干扰素治疗对慢性乙肝患者CD4+CD25+调节性T细胞水平的影响研究

薛海波　马丽丽　林贤凡　吴金明

1.温州医科大学附属第一医院消化内一科，浙江温州325000；2.温州医科大学附属第一医院风湿免疫科，浙江温州325000

干扰素治疗对慢性乙肝患者CD4+CD25+调节性T细胞水平的影响研究

薛海波1马丽丽2林贤凡1吴金明1

1.温州医科大学附属第一医院消化内一科，浙江温州325000；2.温州医科大学附属第一医院风湿免疫科，浙江温州325000

目的探讨慢性乙型肝炎患者在干扰素抗病毒治疗中外周血调节性T细胞的变化及临床意义。方法选择2013年1月～2015年1月在我院行干扰素抗病毒治疗的慢性乙肝患者60例及同时期体检的健康成人20例，分别于治疗前、治疗后第12、24、36、48周及停药后24周收集患者的外周血，比较外周血中CD4+CD25+调节性T细胞（Tregs）、血清HBV-DNA载量以及谷氨酸-丙酮酸转氨酶（ALT）的变化。结果治疗前，完全应答组、部分应答组以及无应答组外周血CD4+CD25+调节性T细胞比例、ALT含量以及HBV-DNA载量组间比较差异无统计学意义（P＞0.05），但均显著高于健康对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；治疗后，完全应答组和部分应答组患者各时间段Tregs比例均较治疗前显著下降（P＜0.05）；在治疗及停药期间，完全应答组和部分应答组患者的Tregs比例一直在下降；治疗期间HBV-DNA转阴患者的Tregs比例逐步下降且显著低于未转阴的患者（P＜0.05）；治疗期间血清学转换的患者Tregs比例逐步下降且显著低于未转换的患者（P＜0.05）。结论慢性乙肝患者在接受干扰素抗病毒治疗期间及治疗后，其外周血调节性T细胞比例下降，且越早出现下降的患者其治疗后血清转阴的可能性越大。

乙型肝炎；干扰素；调节性T细胞；外周血

［Abstract］Objective To investigate the changes and clinical significance of peripheral blood regulatory T cells in chronic hepatitis B patients treated with interferon.Methods 60 patients with chronic hepatitis B who were treated with interferon and 20 healthy adults were selected from January 2013 to January 2015 in our hospital.Peripheral blood was collected before treatment and 12th weeks，24th weeks，36th weeks，48th weeks after treatment and 24 weeks after withdrawal，the changes of CD4+CD25+regulatory T cells（Tregs），serum HBV-DNA and glutamate pyruvate aminotransferase（ALT）in peripheral blood were compared.Results There were no significant differences in the proportion of CD4+CD25+regulatory T cells，ALT content and HBV-DNA content between complete response group，partial response group and non response group before treatment（P＞0.05），but they were significantly higher than those in healthy control group，there were statistically significant differences between the groups（P＜0.05）；The proportion of Tregs in the complete response group and the partial response group after treatment were significantly decreased compared with that before treatment（P＜0.05）；The proportion of Tregs in patients of complete response group and partial response group had been declining during the treatment and withdrawal；Tregs ratio in patients with HBV-DNA negative were gradually decreased and were significantly lower than that of non negative patients during the treatment（P＜0.05）；Tregs proportion of seroconversion in converted patients during treatment were gradually declined and were significantly lower than nonconverted patients（P＜0.05）.Conclusion The peripheral regulatory T cells in patients with chronic hepatitis B by interferons antiviral treatment was decreased during treatment and after treatment，and the sooner the peripheral regulatory T cells declined the greater possibility of seroconversion after treatment.［Key words］Hepatitis B；Interferon；Regulatory T cells；Peripheral

T淋巴细胞是来源于骨髓的多能干细胞（胚胎期则来源于卵黄囊和肝）。在人体胚胎期和初生期，骨髓中的一部分多能干细胞或前T细胞迁移到胸腺内，在胸腺激素的诱导下分化成熟，成为具有免疫活性的T细胞。而外周血调节T细胞是近年来新发现的与人体自身免疫功能相关的细胞，其在慢性乙型肝炎患者体内数目明显增加。本文研究慢性乙型肝炎患者在进行干扰素抗病毒治疗中其外周血调节性T细胞的变化及其临床意义，现报道如下。

1　资料与方法

1.1一般资料

选择2013年1月～2015年1月在我院进行干扰素抗病毒治疗的60例慢性乙肝患者以及同时期进行体检的20例健康成人作为研究对象。纳入标准［2］：符合慢性乙型肝炎感染诊断标准［乙型肝炎HBsAg和（或）HBV-DNA阳性6个月以上《慢性乙型肝炎防治指南（2015年版）》］，临床确诊为慢性乙型肝炎；在参与本次研究前半年内未通过其他药物进行抗病毒及免疫调节治疗。排除标准：临床资料不全；合并肿瘤、肝肾功能不全、自身免疫疾病、其他肝炎以及感染HIV者。分组标准：HBeAg、HBV-DNA阴转、ALT复常的患者为完全应答组；HBeAg、HBV-DNA和ALT 3项指标中的1或2项达标为部分应答组；HBeAg、HBV-DNA和ALT均未达标为无应答组。所有患者均对本研究内容知晓，并签署知情同意书。患者的性别、年龄组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

1.2方法

所有患者均在清晨空腹的条件下取全血，通过流式细胞仪（FC-500，美国COULTER公司）测定CD4+CD25+调节性T细胞频率；采用全自动生化分析仪（AU5821，日本Beckman Coulter公司）测定ALT；采用实时荧光定量PCR测定HBV-DNA，具体检测方法参照潘修成等［1］的研究。其中以血清ALT＜40 U/L为正常。

1.3统计学方法

采用SPSS17.0软件进行分析，计量资料以均数±标准差表示，采用t检验或方差分析，计数资料以［n（%）］形式表示。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1治疗前各组临床观察指标比较

完全应答组、部分应答组以及无应答组在进行干扰素抗病毒治疗前外周血CD4+CD25+调节性T细胞比例、ALT含量以及HBV-DNA组间比较差异无统计学意义（P＞0.05），但均显著高于健康对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2　治疗前各组临床观察指标比较

2.2各时间段慢性乙肝患者Tregs比例比较

治疗12周后，完全应答组患者的Tregs比例［（4.16± 0.62）%］显著低于部分应答组患者［（4.98±0.63）%］和无应答组患者［（6.05±0.44）%］（P＜0.05），且部分应答组患者显著低于无应答组患者（P＜0.05）；治疗24周后，完全应答组患者Tregs比例［（3.88±0.71）%］显著低于部分应答组患者［（4.51±0.52）%］和无应答组患者［（6.05±0.44）%］（P＜0.05），且部分应答组患者显著低于无应答组患者（P＜0.05）；治疗36周后，完全应答组患者和部分应答组患者Tregs比例分别为（3.71±0.52）%和（4.11±0.63）%，均显著低于无应答组患者［（5.61± 0.42）%］（P＜0.05）；治疗48周后，完全应答组患者和部分应答组患者Tregs比例分别为（3.44+0.37）%和（4.01+0.57）%，均显著低于无应答组患者［（5.22±0.58）%］（P＜0.05）；停止干扰素治疗24周后，完全应答组患者Tregs比例［（3.07±0.42）%］显著低于部分应答组患者［（3.82±0.47）%］和无应答组患者［（5.31±0.47）%］（P＜0.05），且部分应答组患者显著低于无应答组患者（P＜0.05）。此外，在使用干扰素治疗期间以及干扰素停药24周后，完全应答组及部分应答组患者各时间段Tregs比例均显著低于治疗前（P＜0.05）。见表3。

表1　患者一般资料

2.3各时间段慢性乙肝患者ALT达标情况比较

使用干扰素治疗后12、24、36、48周以及停止干扰素治疗24周后，完全应答组患者ALT达标患者比例分别为77.78%、100.00%、100.00%、100.00%和44.44%；部分应答组患者ALT达标患者比例分别为75.00%、83.33%、83.33%、83.33%和50.00%。见表4。

2.4各时间段慢性乙肝患者HBV-DNA低于500拷贝数/mL患者比例

使用干扰素治疗后12、24、36、48周以及停止干扰素治疗24周后，完全应答组患者HBV-DNA低于500拷贝数/mL的患者比例分别为44.44%、100.00%、100.00%、100.00%和44.44%；部分应答组患者ALT达标患者比例分别为25.00%、58.33%、58.33%、75.00%和25.00%。见表5。

2.5各时间段HBV-DNA转阴与未转阴、血清学转换与未转换患者Tregs比较

HBV-DNA转阴组患者使用干扰素治疗后及停药后Tregs比例逐步下降且均显著低于未转阴组患者（P＜0.05）；血清学转换组患者干扰素治疗后及停药后Tregs比例逐步下降且均显著低于未转换组患者（P＜0.05）。见表6。

表3　各时间段慢性乙肝患者Tregs比例比较（x±s，%）

表4　各时间段慢性乙肝患者ALT达标情况比较［n（%）］

表5　各时间段慢性乙肝患者HBV-DNA低于500拷贝数/mL患者比例［n（%）］

表6　各时间段HBV-DNA转阴与未转阴、血清学转换与未转换患者Tregs比较（x±s）

3　讨论

调节性T细胞［3］（regulatory cells，Tregs）是一类控制体内自身免疫反应性的T细胞亚群，早期亦称做suppressor T cells。调节性T细胞可分为天然产生的自然调节性T细胞（n T-regs）和诱导产生的适应性调节性T细胞（a T-regs或i T-regs），如Th3、Tr1，另外尚有CD8 Treg、NKT细胞等，与自身免疫性疾病的发生关系密切，其异常表达可导致自身免疫性疾病。

CD4+CD25+调节性T细胞［4-6］是一类最近才被认识的免疫调节细胞，起源于胸腺，发挥抑制性免疫调节作用，持续性表达IL-2Rα链（CD25），具有免疫抑制性和免疫无能性两大特征，在自身免疫性疾病的治疗、肿瘤的免疫治疗以及移植耐受的诱导等方面具有潜在的应用价值。程翔等［7］人研究表明，慢性心力衰竭患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞比例较正常人低，并且与慢性心力衰竭患者心功能存在相关性，说明CD4+CD25+调节性T细胞比例下降不仅与慢性心力衰竭发病有关，还与其疾病发展有关。此外，众多研究还表明［8-10］，CD4+CD25+调节性T细胞与紫癜［11］、肿瘤免疫逃逸［12］以及糖尿病合并肺部感染等有关［13］。这主要是由于CD4+CD25+调节性T细胞是一种免疫调节细胞，其表达的多少将直接影响到机体的免疫水平，表达异常时会造成机体出现疾病［14-16］。Tregs不仅与疾病的发生发展密切相关，还与疾病的治疗有密切联系。李浩等［17，18］研究发现，对于慢性乙型肝炎患者进行干扰素抗病毒治疗期间，随着HBV-DNA载量的下降，Tregs比例也随之下调。黄燕等［19，20］研究发现，慢性乙型肝炎患者体内外周血CD4+CD25+Tregs细胞升高，进行干扰素抗病毒治疗后其比例下调。

本文研究发现，应答慢性乙型肝炎感染患者进行干扰素抗病毒治疗，Tregs比例也随之下调，且越早出现下降的患者治疗后血清转阴可能越大，而无应答慢性乙型肝炎感染患者的Tregs比例无显著变化。

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Effect of CD4+CD25+regulatory T cell level of chronic hepatitis B during interferon theraping

XUE Haibo1MA Lili2LIN Xianfan1WU Jinming1
1.The First Department of Gastroenterology，the First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University，Wenzhou 325000，China；2.Department of Rheumatology and Immunology，the First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical U-niversity，Wenzhou325000，China

R512.62

A

1673-9701（2016）24-0012-04

2016-04-13）

浙江省自然科学基金（LY12H03003）