新疆伊宁市部分售奶站生鲜乳中微生物污染的调查分析

陈 霞，比尔来西肯·赛都力，张海兰，韩春晓，况 玲

(1.新疆农业大学，新疆乌鲁木齐 830052；2.伊犁职业技术学院，新疆伊犁 835000)



新疆伊宁市部分售奶站生鲜乳中微生物污染的调查分析

陈 霞1，2，比尔来西肯·赛都力2，张海兰2，韩春晓2，况 玲1*

(1.新疆农业大学，新疆乌鲁木齐 830052；2.伊犁职业技术学院，新疆伊犁 835000)

[目的]研究伊宁市生鲜乳中主要微生物的含量，为散装生鲜乳销售环节的卫生质量安全检测研究提供参考。[方法]针对新疆伊宁市8个不同片区售奶站进行采样，研究不同季节生鲜乳中菌落总数、大肠菌群数、芽孢总数和耐热芽孢总数的含量变化。[结果]2014年6月～2015年5月期间，伊宁市8个售奶站的生鲜乳在感官方面色泽、滋味、气味均正常，且不存在凝块、沉淀、肉眼可见异物现象；主要微生物含量指标菌落总数、大肠菌群数、芽孢总数和耐热芽孢总数分别为：3.08×105～8.48×105CFU/mL、1.5×105～8.1×105MPN/L、21～75 CFU/mL和3～8 CFU/mL，均符合国家标准。但散奶户所销售的生鲜乳中检查出微生物的含量要明显高于售奶站的鲜乳。[结论]新疆伊宁市部分奶站所售生鲜乳中主要微生物含量各项指标整体均符合国家标准，反映出伊宁市生鲜乳卫生管控整体水平较高。

售奶站生鲜乳；微生物污染；检测

散装生鲜乳消费在我国目前的畜产品质量安全监管体系下是一个特有的领域，在欧美发达国家和其他许多国家不存在散装生鲜乳销售环节。因此，现阶段如何做好散装生鲜乳销售环节的监管具有重要的现实意义。笔者以散装生鲜乳销售环节的卫生质量安全检测为主要研究内容开展相关研究，根据我国的相关检测方法对伊宁市当地部分售奶站所售的生鲜乳进行调查、取样并采用感官和微生物等多种检测、试验以及数据分析方法，对伊宁市生鲜乳的品质和微生物污染情况做出分析和评估。

1　材料与方法

1.1材料

1.1.1样品。样品来自伊宁市8个不同片区的售奶站，共12批次，384份生鲜乳样品。

1.1.2主要仪器。冰箱、试管、钥匙、量筒、酒精灯、采样箱、温度计、均质器、振荡器、电炉、放大镜、显微镜、载玻片、(0.01 mL刻度)1 mL灭菌刻度吸管、(0.1 mL刻度)10 mL灭菌刻度吸管、250 mL、500 mL灭菌锥形瓶、直径90 mm灭菌培养皿、1～1 000 μL移液枪和枪头、灭菌毛细管、剪子、镊子、精密pH试纸、乳糖胆盐发酵管、乳糖发酵管等。

1.1.3培养基和试剂。月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤，批号20130904等，青岛海博生物技术有限公司；煌绿乳糖胆盐肉汤，货号22767-49-3，上海盈公实业有限公司；伊红美兰琼脂平板，规格7 cm×10块/包，广州市迪景微生物科技有限公司；EC肉汤，批号20131002等，青岛海博生物技术有限公司；血平板，规格90 mm×10个/包，郑州安图生物工程有限公司；营养琼脂培养基，批号HB0108-4，青岛海博生物技术有限公司；结晶紫中性红胆盐琼脂，批号20140503等，青岛海博生物技术有限公司；磷酸盐缓冲液，货号mrgf-6235-12，Growcells。

另外，试验药品和试剂还包括0.85%灭菌生理盐水、75%乙醇、硫酸盐缓冲液、革兰氏染色液等。

1.2方法

1.2.1采样。针对伊宁市8个不同片区售奶站进行采样，包括①斯大林街三巷售奶屋、②都市田园售奶屋、③世纪家苑二期售奶屋、④农四师售奶屋、⑤滨河家园售奶屋、⑥南苑散奶点1、⑦南苑散奶户2和⑧汉人街散奶户。根据实际情况每次试验在各个奶站称取1 kg生鲜牛乳，带一次性采样手套将乳样存放在无菌采样杯(无菌采样袋)中。

将称取好的生鲜乳以无菌采样袋形式放置于样品采集箱中，采样箱中放入一套冰盒，以控制样品温度在0～4 ℃保存，减少贮运温度波动，尽快带回试验点(系无菌实验室或伊犁哈萨克自治州出入境检验检疫局)。

1.2.2检测。该试验检测菌落总数和大肠菌群数的方法均按中华人民共和国国家标准《食品卫生学检验》中GB/T4789.2—2010菌落总数测定[1]和GB/T4789.3—2010大肠菌群计数程序[2]方法进行。

1.2.2.1菌落总数测定方法。以无菌操作将采样杯中的奶样25 mL放入225 mL无菌生理盐水中，用均质器拍打混匀，做10倍系列稀释，选择适度3个连续稀释液的样品，各取1 mL分别加入无菌培养皿中，每个平皿中加入20 mL左右营养琼脂培养基，混匀，待凝固后，放入(36±1)℃培养箱中培养(48±2)h。详细参见GB/T4789.2—2010《食品卫生微生物学检验菌落总数测定》[1]。

1.2.2.2大肠菌群测定方法。以无菌操作将采样杯中奶样25 mL放入225 mL无菌生理盐水的灭菌玻璃杯中，做10倍系列稀释，选择3个连续稀释度的奶样均液接种3管，做乳糖发酵试验和分离培养试验。详细参见GB/T4789.3—2010《食品卫生微生物学检验大肠菌群计数》[2]。

1.2.2.3芽孢总数测定方法。芽孢总数和耐热芽孢总数检测按照实验室要求标准操作规程，进行检验分析。量取采样杯奶样10 mL放入无菌试管，在另一个试管内放入10 mL蒸馏水，将2支试管放在80 ℃恒温水浴锅中，将温度计放于试管中，计时10 min后，将试管取出，迅速冷却到室温，将调剂好的营养琼脂加入40 ℃水浴锅中。用加热后的乳样制备稀释样品，做10倍系列稀释如菌落总数测定方法，将培养皿放入恒温培养箱中培养72 h。

1.2.2.4耐热芽孢总数测定方法。量取采样杯奶样10 mL加热到100 ℃，保持10 min，用恒温培养箱进行培养，方法等同芽孢总数的测定方法，培养温度为30～35 ℃和50～55 ℃。

1.2.3数据处理。使用Excel软件绘制图表，导出表格，进行检测项目的数据分析。

1.2.4评价标准。微生物评价按照2010年《食品卫生国家标准》进行评价，样品不合格认定标准为有1项或1项以上指标不符合国家标准，国家食品安全标准中规定，生鲜乳的菌落总数限量应当≤2.0×106CFU/mL，菌落总数≤5.0×105CFU/mL为1级，大肠菌群数≤1.0×106MPN/L，芽孢总数≤100 CFU/mL和耐热芽孢总数≤10 CFU/mL均为正常。

2　结果与分析

2.1菌落总数测定数据根据图1和表1分析，对取自各售奶站的生鲜牛乳检测的数据进行分析，这12批次的奶样中菌落总数介于3.08×105～8.48×105CFU/mL，均低于国家对于牛奶中微生物的限量2.0×106CFU/mL。售奶站①～⑤中微生物的含量小于5.00×105CFU/mL，可以评定为1级，奶样中细菌总数达1级的占62.5%，对比原国标，售奶站⑥、⑦和⑧中微生物的含量介于5.00×105～2.00×106CFU/mL，认定为2级。

2.2大肠菌群测定数据根据图2和表2分析，对取自各售奶站的生鲜乳检测的数据进行分析，这12批次的乳样中大肠菌群介于1.5×105～8.1×105MPN/L，均低于国家对于牛奶中的限量1.0×106MPN/L。但是，售奶站⑥、⑦和⑧中的数值要较前5个售奶站稍高些。

图1　2014年6月～2015年5月伊宁市8个售奶站的样品菌落总数检测数据Fig.1　Total number of colonies in raw milk from eight milk stations in Yining City from June 2014 to May 2015

Table 1The average results of total number of colonies in raw milk from some milk stations in Yining City within a year

奶站序号MilkstationserialNo.菌落总数Totalnumberofcolonies×105CFU/mL是否超标Whetherexceedstandard①4.79否②4.22否③3.08否④3.89否⑤3.67否⑥8.48否⑦7.85否⑧7.16否

图2　2014年6月～2015年5月伊宁市8个售奶站的样品大肠菌群数检测数据Fig.2　The data of coliform test for raw milk from the eight milk stations in Yining City from June 2014 to May 2015

2.3芽孢总数测定数据根据图3和表3分析，对取自各售奶站的生鲜乳检测的数据进行分析，这12批次的乳样中芽孢总数介于21～75 CFU/mL，均低于国家标准≤100 CFU/mL。但是售奶站⑦和⑧大于60 CFU/mL。

表2伊宁市部分奶站生鲜乳样品1年大肠菌群的平均检测结果

Table 2The average results of coliform groups in raw milk from some milk stations

奶站序号MilkstationserialNo大肠菌群数Coliformgroups×105MPN/mL是否超标Whetherexceedstandard①2.8否②4.0否③2.0否④1.5否⑤4.1否⑥7.1否⑦8.1否⑧5.6否

图3　2014年6月～2015年5月伊宁市8个售奶站的样品芽孢总数检测数据Fig.3　The data of total spores in raw milk from eight milk stations in Yining City from June 2014 to May 2015

Table 3The average results of total spores in raw milk from some milk stations in Yining City within a year

奶站序号MilkstationserialNo芽孢总数TotalsporesCFU/mL是否超标Whetherexceedingstandards①29否②21否③31否④27否⑤30否⑥75否⑦64否⑧52否

2.4耐热芽孢总数测定数据根据图4和表4分析，对取自各售奶站的生鲜乳检测的数据进行分析，这12批次的奶样中耐热芽孢总数介于3～8 CFU/mL，均低于国家标准≤10 CFU/mL。但是售奶站⑥、⑦和⑧的数值要较前5个售奶屋稍高些。

综合上述的图表和数据分析，奶站的生鲜乳样品中细菌菌落总数、大肠菌群数、芽孢总数和耐热芽孢数均未超标，符合国家标准，但通过平均检测结果可以看出，斯大林街三巷售奶屋、都市田园售奶屋、世纪家苑二期售奶屋、农四师售奶屋、滨河家园售奶屋这5个政府奶业办管理下的固定售奶站的生鲜乳质量较南苑和汉人街的3家固定散户的乳样质量要高，但均在国家要求的范围之内，说明生鲜乳卫生管控整体水平较好。

图4　2014年6月～2015年5月伊宁市8个售奶站的样品耐热芽孢总数检测数据Fig.4　The data graph of total heat-resistant spores test for raw milk from the eight milk stations samples in Yining city from June 2014 to May 2015

Table 4The average results of total heat-resistant spores in raw milk from some milk stations in Yining City within a year

奶站序号MilkstationserialNo.耐热芽孢总数Totalnumberofheat-resistantspores∥CFU/mL是否超标Whetherexceedstandard①4否②6否③5否④3否⑤4否⑥8否⑦7否⑧7否

3　结论与讨论

该试验收集整理了2014年6月～2015年5月间伊宁市部分售奶站所售生鲜牛乳中微生物的检验情况。从数据分析图和表得出政府指定奶站的生鲜乳样品质量要优于散户的鲜乳质量，这些可能与奶源、生鲜乳储存环境、售奶点的污染状况、承装鲜奶的容器等因素有关，奶站都拥有固定的房屋、冰箱、相应承载生鲜乳的容器，以及定期质检部门的监督检查，而散奶户销售情况、鲜奶品质随天气变化大，尤其是冬季、夏季受温度、湿度影响大，且不易监管。固定奶站的奶源为企业或养殖合作社提供，质量控制较好，而散奶户的生鲜乳多源于自家奶牛生产出的，存在卫生意识差，贮奶装备不卫生等情况，也是造成散奶户大肠菌群数较严重的主要原因。其中个别数值较高的售奶点奶样，原因可能采奶时间为夏季，此夏季温度较高，比较利于微生物的繁殖。散户奶个别指标略高，接近限制量，要作为参考，继续考察散奶户的卫

生管理状况，也能得出固定售奶屋比散户奶生产管理更加规范，因为奶源多为固定奶源提供[3-4]，所以奶样的4项指标均能符合我国现在的标准。

[1]中华人民共和国卫生部.食品卫生微生物学检验 菌落总数测定：GB/T4789.2—2010[S].北京：中国标准出版社，2010.

[2]中华人民共和国卫生部.食品卫生微生物学检验 大肠菌群计数：GB/T4789.3—2010[S].北京：中国标准出版社，2010.

[3]比尔来西肯·赛都丽，王一明，阿曼土尔，等.伊宁市区生鲜乳中微生物污染程度检测与分析[J].黑龙江畜牧兽医，2014(7)：209-210.

[4]夏冬.如何控制原料奶中微生物污染[J].中国乳业，2003(9)：25-26.

Investigation and Analysis of Microbial Contamination of Raw Milk from Parts of Milk Station in Yining City,Xinjiang

CHEN Xia1,2,Bierlaixiken Saidouli2,ZHANG Hai-lan2,KUANG Ling1*et al

(1.Xinjiang Agricultural University,Urumqi,Xinjiang 830052;2.Yili Vocational and Technical College,Yili,Xinjiang 835000)

[Objective]The aim was to study major microorganism content in raw milk in Yining City,provide reference for quality detection in sales link of bulk raw milk.[Method]Collecting samples from milk stations in 8 districts of Yining City,the changes of total bacterial colonies,total coliform groups,total spores and heat-resistant spores were studied.[Result]During June 2014-May 2015,color,taste and smell of raw milk from 8 milk stations in Yining were normal,and there was no block,precipitation and visible foreign matter phenomenon;The content of total bacterial colonies,total coliform groups,total spores and heat-resistant spores were 3.08×105-8.48×105CFU/mL,1.5×105-8.1×105MPN/L,21-75 CFU/mL and 3-8 CFU/mL,respectively.The content of microorganisms in fresh milk sold by the scattered milk households was obviously higher than that of the milk station.[Conclusion]The indicators of main microorganisms content in raw milk from some milk stations in Yining City are in line with national standards,reflecting the overall level of health management and control of fresh milk in Yining City is relative high.

Raw milk in milk station;Microbiological contamination;Detection

伊犁哈萨克自治州科技计划项目(YZ201201026)。

陈霞(1984- )，女，江苏溧阳人，助教，在读硕士，从事动物产品质量安全研究。*通讯作者，教授，博士，从事兽医临床的教学和研究工作。

2016-08-03

TS 252.7

A

0517-6611(2016)25-048-03