几种常见酶对何首乌生物转化的初步探索

陈　珍，黄福荣，马春霓

楚雄医药高等专科学校药学系，云南楚雄　 675005

几种常见酶对何首乌生物转化的初步探索

陈珍，黄福荣，马春霓

楚雄医药高等专科学校药学系，云南楚雄 675005

生物转化［1］本质是利用生物体系本身所产生的酶对外源化合物进行酶催化反应，它具有反应选择性强，反应条件温和，副产物少，不造成环境污染和后处理简单等特点。本课题探讨利用几种常见酶直接对何首乌进行生物转化，拓展转化途径，以期得到对何首乌有转化作用的酶。

生物转化；何首乌；酶

1　实验仪器及材料

1.1实验材料

何首乌产自云南省禄劝县，经云南中医学院赵荣华教授鉴定为蓼科植物何首乌（Polygonum multiflorum Thunb.）的干燥根，打粉备用。

酶：纤维素酶、淀粉酶、蛋白酶、甘露聚糖酶、葡聚糖酶、木聚糖酶、果胶酶，均购买自云南师范大学生化学院。

1.2实验仪器

ZHWY-MB型恒温培养振荡器（上海智诚分析仪器制造有限公司）、artorius Bs224s电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）等。

2　实验方法

2.1何首乌水提物的制备［2］

分别称取5g何首乌粉末，置于锥形瓶中，分别加入5倍量的水，超声提取1h，超声功率25kHz。提取完成后，将样品分3组，第一组作为空白，第二组用滤纸过滤，第三组不过滤。

2.2酶解

每一种酶分别等量加入过滤（第二组）和未过滤（第三组）的何首乌提取液中，分别做3个水平，各组中加入情况见表1。

表1　各组实验酶的加入量和反应条件情况表

各组分别按照表1所示温度在摇床中酶解48h。

2.3利用TCL进行酶解结果的检测

依照2010年版《中华人民共和国药典》（一部）薄层色谱法（附录ⅥB）试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，分别以乙酸乙酯：甲醇：甲酸=15：1：0.5、环己烷：乙酸乙酯：甲酸=2：1：0.2、氯仿：甲醇：甲酸=9：1：0.2为展开剂，展开，取出，晾干，检视。

3　实验结果

除了纤维素酶外，其他的各种酶对何首乌超声水提物的化学成分没有明显的影响。

表2　纤维素酶对二苯乙烯苷的酶解条件

4　纤维素酶对二苯乙烯苷的生物转化实验

在上面实验的基础上，我们筛选出纤维素酶，它对何首乌的化学成分有转化作用，为了验证此结果，直接再用纤维素酶转化何首乌的蒽醌类成分，以期得到同样的结果。

实验方法：

称取二苯乙烯苷结晶3份，每份0.9g，分别往其中加30mL超纯水，各份处理过程如表2所示。

各组分别按照上表所示条件在摇床中酶解48h。

5　实验结果

按照表2处理完后，对各样品进行过滤，各吸取5μL，进行薄层检测，展开剂为：乙酸乙酯：甲醇：甲酸=15：1：0.5。实验结果见图1。

从薄层上显示，纤维素酶对二苯乙烯苷有一定的破坏作用。

［1］李丹，李晓磊，李荣和.纤维素酶水解大豆异黄酮糖苷混合物的抗氧化活性［J］.食品研究与开发，2008，8（29）：1-4.

［2］腺知.利用微生物代谢酶转化白藜芦醇及大豆异黄酮的方法研究［J］.解放军医学杂志，2008，33（11）：1344.

Q-3

A

1674-6708（2016）166-0195-02

陈珍，楚雄医药高等专科学校药学系。黄福荣，楚雄医药高等专科学校药学系。马春霓，楚雄医药高等专科学校药学系。