1,8-二氨基萘衍生化气相色谱-质谱法测定血浆中亚硝酸盐含量

2016-10-15刘国杰刘建玲高丽娜刘俊亭

分析科学学报 2016年2期

关键词：离子源缓冲溶液内标

刘国杰，刘建玲，高丽娜，刘俊亭*

(1.中国医科大学公共基础学院化学教研室，辽宁沈阳 110122；2.中国医科大学法医学院，辽宁沈阳 110122 )

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

Shimadzu GC-MS-QP2010气相色谱-质谱联用仪(日本，岛津公司)；Rtx-5色谱柱(10 m×0.18 mm×0.2 μm)；pH测定仪；旋涡混合器；微量进样器；精密电子天平；水浴恒温器；TDZ4-WS台式离心机。

1.2 仪器条件

柱温程序：柱初始温度为60 ℃，保持1 min后以15 ℃/min升至270 ℃，保持8 min；载气为氦气(99.999%)，柱前压为76.5 kPa，不分流，进样1 μL。EI离子源，电子能量为70 eV，质量范围40～900 u，进样口温度为250 ℃，接口温度为270 ℃，离子源温度为200 ℃，检测器温度为200 ℃。GC-MS法分析采用全扫描(Scan)和选择离子检测(SIM)两种方式分析。亚硝酸衍生化产物用特征离子m/z114、m/z141和m/z169进行定性，m/z141进行定量；内标物用特征离子m/z86和m/z99进行定性，m/z86进行定量。

1.3 实验过程

取0.5 mL血浆于试管中，向其中加入1 mL磷酸盐缓冲溶液(pH=3)，20 μL 1,8-DAN 溶液，密封，涡旋震荡30 s，于60 ℃水浴中加热10 min,冷却后，加入内标5 μL；缓慢加入0.5 g碳酸铵至上述溶液中，调pH至8.5，涡旋振荡30 s，直至CO2完全释放；向上述溶液中加入2 mL乙酸乙酯萃取，震荡1 min，3 500 r/min离心5 min；取上清液于N2气下浓缩至近干，吸取1 μL进样分析。

2 结果与讨论

2.1 衍生化反应机理

2.2 血浆中衍生化后的色谱图

2.3 pH值对前处理的影响

衍生化反应过程中，反应液的pH值是影响重氮化的重要因素。实验中，分别配制成pH=2、2.5、3、4、5、6、7、8的一系列磷酸盐缓冲溶液进行衍生化。实验数据证实pH在2～3之间，衍生化产物逐渐增加；pH=3时，衍生化产物量达到最大；pH>3时，衍生化产物迅速减少。因此，反应介质选择pH=3的缓冲溶液。

2.4 衍生化温度优化

重氮化反应温度取决于重氮盐的稳定性。本衍生化反应中，重氮盐离子的π键与萘环的π共轭，增加了重氮盐的稳定性，同时该重氮盐可以迅速分子内缩合成环，形成稳定的衍生化产物。本实验中分别探索了温度20 ℃、40 ℃、60 ℃和80 ℃下衍生化反应的情况。实验表明，随着温度的升高，该衍生化反应效率升高；当温度为60 ℃时，衍生化产物的响应值最高。因此，本实验的衍生化温度选择60 ℃。