高效液相色谱法检测水产品中抗生素药物残留的研究

王　楠，陈润发，刘　妍

高效液相色谱法检测水产品中抗生素药物残留的研究

王楠，陈润发，刘妍

（广东省工程技术研究所，广东广州 510000）

研究能够检测出水产品中含有抗生素药物残留的方法，建立检测方法。在水产品残留物中，加入Mellvmince-EDTA缓冲提取液，借助高效液相色谱法，对残留溶液进行净化处理，取350nm的检测波长，将溶液流速控制在0.85mL/min。然后对水产品中含有的抗生素药物残留进行梯度式的洗脱。该种方法在实际实验中操作，比较简单，实验现象反映灵敏，实现结果精准度高，实验残留液对于环境的污染较小。

高效液相色谱法；水产品；抗生素；药物残留；检测；研究

在水产品养殖中，为了提升产量，在水产品养殖饲料中添加大量的抗生素。抗生素在养殖饲料中的长期应用，将会产生很多药物残留。当被投入大量抗生素的水产品走进人们的饮食当中时，药物残留将会严重的危害人们的健康。为此，通过高效液相色谱法实验，检测水产品中抗生素的药物残留。

1　实验材料与方法

1.1仪器

主要仪器为10A-VP高效液相色谱仪，该实验仪器中附带有紫外线检测器。辅助仪器为中型均质器、中速离心机。关键仪器为色谱柱：SHIMADZM VP-ODS C18，为了实现精确的结果测定，该色谱柱的尺寸为150mm×4.6mm，粒径保持在5μm。

1.2试剂

标准的土霉素、四环素、氯霉素、金霉素样品，EDTA-2Na、柠檬酸、Mellvmince-EDTA缓冲液。

1.3实验方法

（1）选取样品溶液稀释定容；取磷酸氢二钠30g、柠檬酸13.0g，乙二胺四乙酸二钠盐40.0g。将以上药品混合溶液稀释并且静置定容1000mL。

（2）选取水产品样品10g，将实验样品放置在离心管中，应用Mellvmince-EDTA缓冲进行提取。该溶液提取环节中，分为3个浓度梯度、3个离心梯度进行。缓冲溶液提取梯度为：30mL、20mL、10mL，浓度为1mol/L；离心梯度为：3 000r/ min离心5min，5 000r/min离心5min；7 000r/min离心5min。将缓冲、离心过后的溶液静置。

（3）样品净化；将2）步骤中得到的样品溶液加到固相萃取柱上，采用5mL甲醇、5mL去离子水活化。将被洗脱的混合溶液进行定容在1.0mL，在滤膜过滤下取样。

（4）配置标准溶液；取土霉素、四环素、氯霉素、金霉素等标准品各0.01g，测定溶液时，借助甲醇溶液将以上药物稀释，稀释的浓度依次为：0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/ mL。

2　结果与讨论

2.1标准曲线和检出限

在以上溶液中选取1～3号混合溶液进行测定，求出如下回归方程。水产品抗生素的主要成分在0.1～2.0μg/mL之间存在着线性关系。根据其线性关系，将相关系数确定在0.999 1～0.999 6之间。溶液的检出限范围为18～30μg/kg。具体参数见表1。

表1　标准曲线和检出限

2.2水产品样品加标

为了保证实验的真实性、准确性，选取鱼肉的加标回收试验。同一份的鱼肉取4份的平行样。第一份做为基本样品，另外三份样品中分别加入0.4μg/mL的标准使用液，测定加标回收率。在实际的样品测定环节中，土霉素、金霉素、氯霉素、四环素中最为容易检测出来的抗生素就是土霉素，其含量最大为308ng/mL［1］。

2.3实验讨论

2.3.1如何优化4种抗生素的分离

在对水产品中4种抗生素的分离环节中，有机相与水相的比例不同，对于4种抗生素的分离效果产生一定的影响。那么在等梯度洗脱形式下，所能够实现的分离的效果不好。在图像上所显示的峰值也不理想。在优化下分离下，采用科学的分离梯度，将以上4中抗生素有效分离。

2.3.2如何降低流速对于抗生素的影响

洗脱液的实际流速对于4种抗生素的保留时间、分离度等都产生着一定的影响。流动相大于0.9mL/min的洗脱情况下，土霉素和四环素峰型叠加，抗生素不能实现分离。那么在此基础上，减低流速，可以延长检测时间。经过反复试验，得出流速在0.85mL/min的情况下，4种抗生素的分离效果最好［2］。

2.3.3缓冲提取液的选择

不同类型、不同浓度下的缓冲提取液所能够实现的抗生素提取效果不同，与柠檬酸、高氯酸提取液相比，Mellvmince-EDTA缓冲提取液的提取效果较好。

3　结束语

水产品抗生素的主要成分在0.1～2.0μg/mL之间存在着线性关系。根据其线性关系，将相关系数确定在0.999 1～0.999 6之间。经过实验讨论，确定了抗生素分离、提取的溶液浓度。采用科学的分离梯度，将以上4种抗生素有效分离、流速在

0.85m L/min的情况下，4种抗生素的分离效果较好。Mellvmince-EDTA缓冲提取液最佳。

［1］ 高福凯.亲和提取技术在检测水产品中抗生素残留的研究与应用［D］.烟台大学，2013.

［2］ 朱世超.水产品中大环内酯类抗生素残留量检测方法的研究［D］.集美大学，2012.

Antibiotic Drug Residues in Aquatic Products By High Performance Liquid Chromatography

Wang Nan，Chen Run-fa，Liu Yan

Objective：To study the mode capable of detecting drug residues in aquatic products containing antibiotics，the establishment of detection methods.Methods：Aquatic residue was added Mellvmince-EDTA buffer extract，by means of high performance liquid chromatography，the residual solution was subjected to purification，detection wavelength of 350nm is taken，the solution flow rate control at 0.85ml/min.Then the fish containing antibiotics contained residues in the gradient elution.The operating method in actual experiment，relatively simple experimental phenomena reflecting the sensitivity.Achieve high accuracy results，test the residual liquid is less for the environment.

high performance liquid chromatography；aquatic products；antibiotics；drug residues；detection；research

TS254.7

B

1003-6490（2016）06-0168-02

2016-05-31

王楠（1987—），男，广东兴宁人，助理工程师，主要从事检测方面工作。

收稿日期：2016-06-11

吉林省教育厅“十二五”科学技术研究项目（吉教科合字［2015］第199号）；吉林省科技发展计划项目-青年科研基金项目（20150520118JH）。

作者简介： 曲楠（1980—），女 吉林长春人，副教授，主要从事化学研究工作。