p16免疫组化染色在宫颈癌筛查中的应用价值

吕秀芳　宋晓霞　贺慧　徐纪跃　孔令非

(郑州大学人民医院/河南省人民医院　河南 郑州　450000)



p16免疫组化染色在宫颈癌筛查中的应用价值

吕秀芳宋晓霞贺慧徐纪跃孔令非

(郑州大学人民医院/河南省人民医院河南 郑州450000)

目的研究HE染色联合p16免疫组化(IHC)染色在宫颈癌筛查中的作用及意义。方法筛选243例宫颈组织，应用HE染色及p16 IHC染色方法对其进行检测，另由两名病理诊断医生对染色结果进行分析。结果HE染色结果为166例非CIN、45例CINⅠ、12例CINⅡ、16例CINⅢ、4例宫颈癌。结合p16染色结果对HE染色结果进行回顾分析，非CIN中28例宫颈病变被漏诊，包括12例CINⅠ、6例CINⅡ、10例CINⅢ。结论p16 IHC染色方法能够降低HE染色方法的漏诊率，提高灵敏度，HE染色联合p16 IHC染色在宫颈癌筛查中具有重要的应用价值。

宫颈上皮内瘤变；人类乳头状瘤病毒；p16；免疫组织化学

宫颈癌一直位于全球女性中最常见恶性肿瘤的第2位，占所有恶性肿瘤的9.8%。人类乳头状瘤病毒(human papilloma viruses，HPV)感染被认为是最重要的致病因素，其中起关键作用的是致癌基因E6、E7。p16是一个细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)抑制剂，它调节CDK4和CDK6。在正常细胞中，p16是一个增殖的负性调节因子，一旦视网膜母细胞瘤(pRb)基因产物失活，就会通过一个负性反馈环使CDK4下调。HPV感染后，过表达的E7可与pRb蛋白相互作用使此负反馈环失活，导致p16上调，从而加快细胞的分裂增殖[1]。现如今，宫颈病理组织学检查是一个标准诊断方法，但是萎缩、不成熟化生、移行上皮化生、修复或炎症、异型性、不足的样本面积及观察者主观标准的应用等均可导致其诊断准确度的下降和漏诊率的升高[2]。为了克服苏木精-伊红(hematoxylin and eosin，HE)组织学诊断的缺点，p16蛋白过表达的检测被广泛应用于提高各级别上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)和宫颈癌活检的组织诊断的重塑性。然而，p16 IHC染色对HE组织学诊断结果的影响还没有被整体评估[3]。虽然许多研究已经应用p16 IHC染色分流宫颈病变，并将p16蛋白作为宫颈肿瘤预后的预测因子[4]，但很少有研究应用p16 IHC染色从非CIN病变中识别CIN病变以及评估它在常规病理检查中的应用价值。本研究旨在应用p16 IHC染色对HE染色结果进行回顾性分析并发现漏诊病例，从而探讨HE染色联合p16免疫组化(immunohistochemistry，IHC)染色在宫颈癌筛查中的作用及意义。

1　材料与方法

1.1研究对象所选样本均为2014年10月至2015年3月河南省人民医院病理科经福尔马林溶液固定、石蜡包埋的243例宫颈活检标本。患者年龄16～77岁，中位年龄39岁。所有患者无宫颈病变治疗史。

1.2HE染色应用苏木精-伊红对宫颈组织标本进行染色。所用试剂均购自福州迈新公司，具体操作步骤严格按试剂说明书进行，并由两名病理诊断医生对HE染色结果进行评估。

1.3免疫组化染色采用免疫组化Envisivn法检测p16在各病变中的表达情况。所有免疫组化试剂均购自于福州迈新公司，具体操作步骤严格按试剂说明书进行。同期采用荧光定量方法检测HPV DNA。

1.4结果判定由两名病理诊断医生对p16 IHC染色结果做出评估，最后结果为两名病理诊断医生共同认定。宫颈上皮细胞的细胞核或胞核、胞质共同染色时为p16染色阳性，仅有细胞质染色被解释为p16染色阴性。p16免疫组化染色的评估结合两个参数：染色反应的强度和阳性细胞的分布形式。评估标准见表1。

表1　p16免疫组化染色的评估

注：阴性为无细胞染色；1+为p16染色为弱阳性；2+为p16染色为中等阳性；3+为p16染色为强阳性。

1.5统计学分析应用SPSS 17.0统计软件进行数据分析。定性资料组间比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1HE染色结果共筛选243例宫颈组织标本，HE染色结果为166例非CIN、45例CINⅠ、12例CINⅡ、16例CINⅢ、4例宫颈癌。

2.2p16 IHC染色结果随着病变级别的增加，p16 IHC染色阳性率呈逐渐递增趋势。见表2。

表2　HE染色组织切片的p16表达结果评估[n(%)]

2.3回顾性分析结果两名病理诊断医生结合p16 IHC染色结果对HE染色结果进行回顾性分析，发现非CIN病变中27例p16染色强阳性(+++)和1例p16染色中等阳性(++)者为CIN病变，其中包括12例CINⅠ、6例CINⅡ、10例CINⅢ。最终结果为138例非CIN病变、57例CINⅠ、18例CINⅡ、26例CINⅢ、4例宫颈鳞癌。见表3。p16阳性率从非CIN到宫颈癌呈逐渐递增趋势，p16阳性率与宫颈病变级别呈正相关，差异有统计学意义(P<0.05)。

表3　回顾性分析结果[n(%)]

2.4p16 IHC染色的价值评估结合p16 IHC染色结果，发现非CIN中有28例CIN。仅HE染色方法的灵敏度为72.28%，漏诊率为27.72%，特异度为100%，误诊率为0%。

3　讨论

在发展中国家和不发达国家，宫颈癌是威胁女性健康的首要恶性肿瘤，也是继肺癌之后的全球最常见恶性肿瘤。世界卫生组织指出，宫颈癌是第1个完全由感染导致的恶性肿瘤[5]。

有研究已表明，病理组织学诊断为形态学诊断，主观性较强，观察者间的重复率较低[6]。此外，由于小的活检面积、次要区域、炎症反应或其他病变的共存均可造成组织学诊断的困难。Liao等[7]发现p16阳性率与病变级别之间具有正相关性。本研究中，在回顾性分析前，p16阳性率随病变级别的增加而呈递增趋势。结合p16 IHC结果进行回顾性分析后，发现166例非CIN中有28例为CIN，分别为12例CINⅠ、6例CINⅡ、10例CINⅢ，且从非宫颈病变到宫颈癌p16阳性率呈逐渐递增趋势(P<0.05)。因此，p16蛋白是一个能够较好反映宫颈病变的指标。

Liao等[7]发现 p16 IHC染色能够作为提高病理组织诊断可信度的辅助工具。本研究中，结合p16 IHC染色结果发现非CIN中有28例CIN，而仅HE染色方法的灵敏度为72.28%，漏诊率为27.72%，特异度为100%，误诊率为0%。由此可知，p16免疫组织方法可降低HE染色方法的漏诊率，并提高灵敏度。

结合p16 IHC染色方法可检测出漏诊病例，使患者得到及时治疗，可在一定程度上降低宫颈癌的发生率和死亡率；同时，也能够使那些患有低级别CIN病变的女性加强随访，降低向高级别CIN病变进展的风险。另外，p16 IHC染色费用较低，易于操作，应该被应用于宫颈癌的筛查中。

综上所述，p16 IHC染色方法能够降低HE染色方法的漏诊率，提高灵敏度，HE染色联合p16 IHC染色在宫颈癌筛查中具有重要的应用价值。

[1]Liao G D,Sellors J W,Sun H K,et al.p16INK4A immunohistochemical staining and predictive value for progression of cervical intraepithelial neoplasia grade 1: A prospective study in China[J].Int J Cancer,2014,134(7):1715-1724.

[2]Kalof A N,Cooper K.p16INK4a immunoexpression:surrogate marker of high-risk HPV and high-grade cervical intraepithelial neoplasi[J].Adv Anat Pathol,2006,13(4):190-194.

[3]Cardoso F A,Campaner A B,Silva M A.Prognostic value of p16INK4a as a marker of clinical evolution in patients with cervical intraepithelial neoplasia grade 3 (CIN 3) treated by cervical conization[J].APMIS,2014,122(3):192-199.

[4]Lesnikova I,Lidang M,Hamilton-Dutoit S,et al.p16 as a diagnostic marker of cervical neoplasia: a tissue microarray study of 796 archival specimens[J].Diagn Pathol,2009,4:22.

[5]Martin C M,O’Leary J J.Histology of cervical intraepithelial neoplasia and the role of biomarkers[J].Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol,2011,25(5):605-615.

[6]Demir F,Kimiloglu E,Igdem A A,et al.High risk HPV in situ hybridization, p16INK 4A, and survivin expressions in cervical carcinomas and intraepithelial neoplasms: evaluation of prognostic factors[J].Eur J Gynaec Oncol,2014,35(6):708-717.

[7]Liao G D,Sellors J W,Sun H K,et al.p16INK4A immunohistochemical staining and predictive value for progression of cervical intraepithelial neoplasia grade 1: A prospective study in China[J].Int J Cancer,2013,134(7):1715-1724.

The value of p16 immunohistochemistry staining used in cervical cancer screening

Lv Xiufang, Song Xiaoxia, He Hui, Xu Jiyue, Kong Lingfei

(ZhengzhouUniversityPeople’sHospital/HenanProvincePeople’sHospital,Zhengzhou450000,China)

ObjectiveTo study the value of hematoxylin and eosin(HE) combined with p16 immunohistochemistry(IHC) staining used in cervical cancer screening. MethodsHE and IHC staining was used to detect 243 cervical biopsy specimens. The results were valuated by two pathologists. ResultsThe results of HE staining were 166 cases of non-CIN, 45 cases of CINⅠ, 12 cases of CINⅡ,16 cases of CINⅢ,4 cases of SCC. The results of HE staining were retrospectively analyzed according to p16 staining results, and 28 cases of cervical lesions were identified in 166 cases of non CIN, including 12 cases of CINⅠ, 6 cases of CINⅡ, 10 cases of CINⅢ. Conclusionp16 IHC staining can decrease the rate of missed diagnosis and improve the sensitivity of HE staining. HE staining combined with p16 IHC staining has very important practical value in cervical cancer screening.

cervical intraepithelial neoplasia; human papilloma viruses; p16; immunohistochemistry

R 737.33

10.3969/j.issn.1004-437X.2016.08.008

2015-12-30)