正交试验优选酒白芷饮片的炮制工艺△

袁子民，赵强，贾天柱，王静

(辽宁中医药大学，辽宁 大连 116600)

正交试验优选酒白芷饮片的炮制工艺△

袁子民，赵强，贾天柱，王静*

(辽宁中医药大学，辽宁 大连116600)

目的：优选酒白芷隔水蒸制的最佳炮制工艺。方法：以黄酒加入量、闷润时间和蒸制时间为考察因素，以总香豆素含量为评价指标，采用L9(34)正交设计，优选酒白芷的炮制工艺。结果：黄酒的加入量为每100kg白芷加入黄酒20kg，闷润时间为0.5h，蒸制时间为5h。结论：该工艺合理、可靠、重复性好，可作为酒白芷炮制品的制备方法。

酒白芷饮片；酒炖；总香豆素

白芷为伞形科植物白芷或杭白芷的干燥根，具有散风除湿、通窍止痛、消肿排脓的功能，用于感冒头痛等的治疗。在对白芷炮制历史沿革及炮制品的现代研究中发现，古代白芷的炮制品有16种(去皮、水洗、去梢、微焙、炒炭、炒、湿纸裹煨、面裹煨、醋制、盐炙、酒炙、米泔水制、黄精制、斑蝥制、萝卜制、石灰制)，发展到现代只剩下1种生白芷(净制后切制)。2015版《中华人民共和国药典》一部、各省市炮制规范及《中药炮制学》等相关标准及书籍中均收载生白芷，未见其他炮制品。古代白芷酒炙，在明《滇南本草》的附方中有记载，依据附方的功能推测酒洗、酒浸可增强白芷祛风散寒作用，酒炒可加强白芷消肿排脓作用[1-2]。另外，临床常用中药都梁丸[1]中，白芷采用隔水蒸制(酒炖)炮制后入药，但缺少规范化的炮制工艺，且其未用生品，采用炮制品入药是否具有一定临床价值，值得深入研究。因此，本实验采用正交试验法对白芷隔水蒸制的工艺进行优选，确定最佳炮制工艺，为酒白芷炮制机理的深入研究及其在都梁丸中的临床应用提供参考。

1 仪器与试药

U-3010紫外可见分光光度计(日本日立公司)；电子分析天平(SHIMADZUCORPORATION)；SG3300型超声波清洗器(上海冠特超声仪器有限公司)；真空干燥箱(上海博迅实业有限公司医疗设备厂)。

白芷药材(祁白芷，河北安国，批号：20141120)经辽宁中医药大学李峰教授鉴定为为伞形科植物白芷Angelicadahurica(Fisch.ex Hoffm.) Benth.et Hook.f.的干燥根；欧前胡素对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110826-200307)；黄酒(镇江恒顺酒业有限责任公司)；甲醇为分析纯。

2 方法与结果

2.1炮制工艺的设计

根据预实验结果，以黄酒加入量(A)、闷润时间(B)、蒸制时间(C)三个因素、三个水平进行试验考察。分别取白芷饮片30g，加黄酒适量，置密闭容器内，按L9(34)正交试验设计表，隔水蒸制一定时间，取出，于40℃干燥至恒重，即得。鉴于白芷止痛的有效成分为香豆素类成分[3-4]，因此本实验以白芷总香豆素作为评价指标。因素水平见表1。

表1 正交试验因素水平表

2.2总香豆素的含量测定

2.2.1对照品溶液的制备 取欧前胡素对照品适量，精密称定，加甲醇制成质量浓度为19.2μg·mL-1的对照品溶液。

2.2.2线性关系 分别精密量取上述对照品溶液1、2、4、5、10mL置10mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，制成质量浓度依次为1.92、3.84、5.76、7.68、9.60、19.20μg·mL-1的系列对照品溶液。以甲醇为空白，在300nm波长处测定吸光度，以欧前胡素浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得到回归方程Y=0.0443X+0.0096(r=0.9994)。结果欧前胡素质量浓度在1.92～19.20μg·mL-1与吸光度呈良好线性关系。

2.2.3供试品溶液制备 取各正交试验项下酒白芷饮片粉末(过40目筛)0.2g，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，称定重量，超声处理(功率300W，频率50KHz)1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。分别精密量取续滤液2.5mL置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.2.4精密度试验 取同一供试品溶液，以甲醇为空白，在300nm波长处测定吸光度，重复操作6次，RSD为0.50%，表明仪器精密度良好。

2.2.5重复性试验 取同一酒白芷饮片样品，按2.2.3项下方法分别制备6份供试品溶液，以甲醇为空白，分别在300nm波长处测定吸光度，RSD为1.61%，表明该方法重复性良好。

2.2.6稳定性试验 取同一酒白芷饮片供试品溶液，分别于0、2、4、6、8h以甲醇为空白，在300nm波长处测定吸光度，RSD为1.74%，表明供试品溶液在8h内稳定。

2.2.7回收率试验 分别取已知含量的同一酒白芷饮片粉末(总香豆素含量为1.30%)0.1g，精密称定，各6份，分别精密加入欧前胡素对照品溶液(质量浓度为192μg·mL-1)7.0mL，再精密加入甲醇18.0mL，其余按2.2.3项下方法分别制备6份供试品溶液。以甲醇为空白，在300nm波长处测定吸光度，计算回收率，结果见表2，符合相关规定。

表2 回收率试验测定结果(n=6)

2.2.8 含量测定 分别取各正交试验项下酒白芷饮片粉末(过20目筛)0.2 g，按2.2.3项下的供试品溶液制备方法，分别制备供试品溶液，以甲醇为空白，分别在300 nm波长处测定吸光度，根据回归方程计算其总香豆素含量[5]。结果见表3。

2.3正交试验结果及方差分析

方差分析见表4，由表4可知，A、C因素对酒炖炮制工艺有显著性影响。经直观分析，影响酒炖工艺的主要因素依次为C>A>B，得工艺的最优条件应为A2B3C3，但由于B因素影响不显著，为节省时间选择闷润时间0.5h，因此酒白芷最终确定的最佳炮制工艺为A2B1C3，即黄酒的加入量为20%(每100kg白芷加入黄酒20kg)，闷润时间为0.5h，隔水蒸制时间为5h。

表3 正交试验结果

表4 方差分析表

2.4炮制工艺的验证

为保证该工艺的重复性、稳定性，本实验按确定的最佳炮制工艺进行3次工艺验证试验，取酒白芷饮片30g进行炮制，结果3批样品的外观颜色均为棕红色(生品为类白色)，见图1。总香豆素含量分别为1.62%、1.60%、1.57%。结果表明，该炮制工艺稳定、可靠、重复性好。

注：A.生品；B.酒白芷。图1 白芷生品与酒白芷的外观颜色图

3 讨论

都梁丸由白芷(酒炖)、川芎组成，具有祛风散寒、活血通络的功能，主要用于风寒瘀血阻滞脉络所致的头痛[1]。方中白芷为治头痛的常用药且采用酒炖入药，但目前缺少酒炖白芷的质量标准、炮制工艺及炮制机理的相关研究。本研究为其质量标准及炮制机理的研究提供参考。研究发现，炮制后总香豆素含量增加约11.7%(生品含量1.43%，炮制品按3批验证的平均值为1.597%)，可能与黄酒的加入、炮制过程中受热致使成分转化、溶出增加有关，炮制后可增强祛风散寒、止痛的药效。

将对照品溶液、供试品溶液分别在200～400nm进行扫描，见图2。结果欧前胡素对照品溶液、酒白芷供试品溶液均在300nm左右有最大吸收，因此选择300nm为紫外测定波长。

注：A.欧前胡素对照品；B.白芷生品；C.白芷酒制品。图2 对照品溶液、生品与炮制品供试品溶液紫外扫描图

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部 [S].北京：中国医药科技出版社，2015.

[2] 金洁，金传山，吴德玲，等.白芷炮制历史沿革及其炮制品的现代研究进展[J].安徽医药，2012，16(1)：1-3.

[3] 秦旭华，李祖伦，朱果夫，等.川白芷总香豆素治疗偏头痛的部分药效学实验研究[J].四川中医，2008，26(6)：4-6.

[4] 魏玉平，刘俊，颜小林，等.白芷治疗头痛的提取工艺评判指标的研究[J].中草药，2001，32(4)：318-319.

[5] 张利，马逾英，蒋桂华，等.白芷新型饮片中总香豆素与欧前胡素的含量测定[J].时珍国医国药，2011，22(1)：80-81.

OptimizationofRiceWineProcessingTechnologyofSlicedRadixAngelicaeDahuricaebyOrthogonalTest

YUANZimin,ZHAOQiang,JIATianzhu,WANGJing*

(LiaoninguniversityofTCM,Dalian116600，China)

Objective：To optimize the wine processing technology of sliced Radix Angelicae Dahuricae.Methods：The rice wine processing technology of sliced Radix Angelicae Dahuricae was optimized by L9(34) orthogonal test with the amount of yellow rice wine，braising time and steaming temperature as factors and with the content of total coumarins as evaluation indicator.Results：The optimal processing technology was that20kg rice wine plus into100kg sliced Radix Angelicae Dahuricae，braising for0.5hour and steaming for5hours.Conclusion：The process is reasonable and reliable, can provide a basis for production of yellow rice wine processedRadix Angelicae Dahuricae.

Sliced Radix Angelicae Dahuricae；rice wine processed；total coumarins

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.9.023

2015-11-27)

辽宁中医药大学杏林杰出青年资助项目(2015044)

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王静，博士，副教授，研究方向：药物分析及炮制品质量标准研究；Tel：(0411)85890139，E-mail：yuanmengwj@163.com