不同环境设施内BALB/C裸鼠两种繁育方式的生产性能初步比较

2016-09-20张燕

中国畜牧兽医文摘 2016年8期

关键词：纯合子屏障小鼠

张燕

（新疆实验动物研究中心，新疆乌鲁木齐 830002）

不同环境设施内BALB/C裸鼠两种繁育方式的生产性能初步比较

张燕

（新疆实验动物研究中心，新疆乌鲁木齐 830002）

BALB/C裸鼠在不同环境设施内（SPF屏障系统和IVC独立通风系统）分别采取1♀（nu/+）：1♂（nu/nu）和2♀（nu/+）：1♂（nu/nu）繁育方式，观察记录雌鼠交配分娩间隔、胎数、平均产仔数、平均纯合仔鼠及纯合仔鼠离乳率等数据，分析不同环境设施内BALB/C裸鼠在2种繁育方式中的生产性能。结果显示，4组裸鼠的繁殖性能差异在各胎次内不显著（P＞0.05），而2种环境中繁育方式为2♀（nu/+）：1♂（nu/nu）组中纯合仔鼠离乳率均高于1♀（nu/+）：1♂（nu/nu）组。SPF屏障系统和IVC独立通风系统均能保证BALB/C裸鼠的正常生产繁殖性能，2♀（nu/+）：1♂（nu/nu）的繁育方式可提高纯合仔鼠离乳率。

BALB/C裸鼠 SPF屏障系统 IVC独立通风系统生产性能繁育方式

由于免疫缺陷，裸鼠是应用于基础医学和临床医学研究，特别在肿瘤学、免疫学、毒理病理学、生物制品和新型药品的安全性评价及优选等方面是极好的模型动物［1］。近年来，BALB/C裸鼠生产繁殖一般在SPF屏障系统、隔离包、层流柜、IVC等系统内［2］。由于裸鼠易受病原体感染，裸鼠的饲养和繁殖要求条件比较严格，国内外饲育者对提高裸鼠的存活期和繁殖性能进行了许多研究，我国早有这方面的经验报道［3］。作者通过统计分析新疆实验动物研究中心SPF屏障系统内BALB/C裸鼠种鼠繁育性能的各项指标，初步总结得出裸鼠种鼠血缘扩大群中大量生产裸鼠可采用的繁育方式及环境经验。

1 材料与方法

1.1 环境设施

1.1.1 SPF屏障系统

新疆实验动物研究中心SPF屏障实验室，本实验室是2003年正式投入运转使用，并在2005年通过国家食品药品监督管理局实验室认证管理中心的验收，由新疆实验动物研究中心与新疆维吾尔医药研究所共同筹建的药物非临床安全性评价中心，温度变化范围18℃～22℃。

1.1.2 IVC独立通风系统

IVC-Ⅱ型（智能型）独立送风隔离笼具（苏州市冯氏实验动物设备有限公司），温度变化范围24℃～28℃。

由于IVC笼具放置于SPF屏障实验室内，两种环境设施的照明控制均设定为12h明暗交替，相对湿度变化范围均为30%～60%［4-5］。

1.2 实验动物

本中心引自中国科学院上海动物中心国家种子库BALB/C裸鼠种鼠，雌雄种鼠均为2～3月龄，雌种鼠40只，基因型为（nu/+），雄鼠30只，基因型（nu/nu）。

1.3 分组

BALB/C裸鼠在SPF屏障系统和屏障内IVC笼具中，分别采用1♀（nu/+）：1♂（nu/nu）和2♀（nu/+）：1♂（nu/nu）两种交配方式。SPF屏障系统内裸鼠种鼠1：1方式交配的10♀10♂为实验组一，1：2方式交配的10♀5♂为实验组二；屏障内IVC笼具中裸鼠种鼠1：1方式交配的10♀10♂为实验组三，1：2方式交配的10♀5♂为实验组四。

1.4 繁育方式

饲育鼠料来自新疆实验动物中心提供的全价种小鼠饲料（粗蛋白22.59 %，水分7.82 %，粗脂肪4.51 %，粗纤维2.04%，粗灰分6.68 %等），经Co60放射灭菌处理。饮用水经实验动物饮用水处理器（杭州永洁达净化科技有限公司）过滤，加盐酸酸化至pH值为3.0～3.5，适量添加多维（超能精制鱼肝油VAD3E预混料，济南迅达康生物科技有限公司生产，产品批号：10071201）。饮水和饲料采用自由摄入方式。每周适量添加鸡蛋和葵花籽。每周更换1～2 次饮水瓶和笼具。所有物品和器具进入SPF屏障系统前都必须进行严格消毒，可以耐受高压蒸汽的物品经由真空灭菌器（山东新华医疗器械厂）121℃，30min高压灭菌进入屏障系统，不能耐受高压的物品用0.02%的过氧乙酸擦拭物品表面，再经传递窗紫外灯照射30min后进入屏障系统。BALB/C裸鼠生产管理工作均按照新疆实验动物研究中心屏障系统实验动物生产管理标准操作规程运作［4］。

饲养于IVC独立通风系统的裸鼠种鼠，在超净工作台上用0.5 %过氧乙酸擦拭消毒笼具表面，更换无菌垫料，添加饮水、饲料、鸡蛋和葵花籽［6］。

实验组种鼠生仔后为确保纯合子（nu/nu）幼鼠充分哺乳和健康成长，一般在仔鼠出生后第3 d左右保留部分健壮雌性杂合子（nu/+），根据仔鼠触须的多少和性别剔除其余杂合子［7］，杂合子21d离乳，纯合子28d离乳。在此期间，记录裸鼠种鼠的生仔日期、胎次、生仔数、离乳日期、离乳纯合子仔数。

1.5 实验数据统计学处理

根据BALB/C裸鼠种鼠繁殖记录卡的详细数据资料，用SPSS16.0软件进行统计学处理。

2 结果

各实验组种鼠平均胎间隔、平均胎产仔数、平均胎产纯合子数、纯合子仔鼠离乳率等繁育性能相关数据见表1。各胎次内四组实验裸鼠种鼠繁殖性能均无明显差异（P＞0.05）。

BALB/C裸鼠种鼠由国家种子库引进后，在SPF屏障系统中，有两只雄性种裸鼠（nu/nu）死亡；IVC独立通风系统中的裸鼠种鼠交配繁殖正常，无死亡现象。引进的40只雌性裸鼠种鼠，实验观察期间有1只始终未见怀孕，第1胎种鼠怀孕率达到97.5%，第2胎和第3胎的生产繁殖中种鼠怀孕率为87.5%。

3 讨论

（1）由于BALB/C纯合子裸鼠对饲养室内温湿度要求较高［5］，裸鼠种鼠自中国科学院上海动物中心国家种子库到新疆运输过程漫长，新疆独特的地理环境造成新疆秋冬季相对温湿度较低，SPF屏障系统内稳定的通风换气系统也影响使用，加湿设备对屏障实验室大面积相对湿度的调控困难，可能是造成雄性纯合子裸鼠种鼠死亡的一个原因。

（2）新疆实验动物研究中心SPF屏障实验室温度变化范围18℃～22℃，IVC独立通风系统温度变化范围24℃～28℃，两环境设施的照明控制均为12h明暗交替，相对湿度变化范围为20%～30%，其中相对湿度与文献相比较低［3，5，8］，各胎次的BALB/C裸鼠种鼠的繁育指标与文献相比并未发现明显差异。但是较高温度的IVC独立通风系统组（24℃～28℃）纯合子裸仔鼠离乳率并未明显高于SPF屏障组（18℃～22℃），可能是温度较高而相对湿度较低的环境特点影响到纯合子无被毛裸仔鼠的生长。因此，调节合适的相对湿度与温度，可能会增加BALB/C裸鼠纯合仔鼠离乳率。

（3）纯合子雌性裸鼠（nu/nu）的乳腺发育不良，因此裸鼠的繁育方式通常采用♂（nu/+）：♀（nu/+）和♂（nu/nu）：♀（nu/+）。♂（nu/+）：♀（nu/+）的繁育方式从遗传上来说只能得到约25%的纯合子裸鼠，通常不采用此方式进行裸鼠生产群的建立。本次实验中选定的是裸种鼠血缘扩大群中常用的♂（nu/ nu）：♀（nu/+）繁育法［3］。繁育方式为2♀：1♂的实验组，在SPF屏障系统和IVC独立通风系统内饲育，其剔除部分杂合仔鼠后纯合仔鼠离乳率均高于1♀：1♂组，初步证明两雌性裸鼠同步妊娠分娩，共同哺育仔鼠的繁育方式可能提高裸鼠仔数及其离乳率，其可行性还需进一步通过实验确认。杂合子裸鼠仔鼠（nu/+）天生强壮，具备极强的抢乳能力，严重影响同窝纯合仔鼠的生长发育，根据吴芳洁等［7］报道，在仔鼠出生3d内保留部分健壮雌性杂合子，剔除剩余杂合子仔鼠能够提高纯合子仔数裸鼠的离乳率，本实验采用此经验，纯合子裸鼠仔数离乳率均达到85%以上。

（4）根据文献报道［3，5，8］和作者多年饲养实验动物的经验，裸鼠等小鼠的种鼠繁殖性能在第2、3 胎各项指标表现为最好，可能是由于第1胎体成熟不够完全、雌鼠种鼠母性经验不足和第4、5胎种鼠老龄化导致生殖机能下降。另外，裸鼠比近交系小鼠抵抗力差，繁殖周期稍长，为保证实验动物的正常供应，繁殖到第4胎要更换种鼠。本文为给生产实践者提供更清晰的实验数据，只对繁殖性能最佳的第2、3胎数据进行统计分析。