一例绵羊肺腺瘤病毒感染的诊断

才格加（青海省贵南县过马营镇兽医站青海海南州813101）

一例绵羊肺腺瘤病毒感染的诊断

才格加
（青海省贵南县过马营镇兽医站青海海南州813101）

绵羊肺腺瘤病（Ovine pulmonary adenomatosis，OPA）是由绵羊肺腺瘤病毒（Jaagsiekte sheep retrovirus，JSRV）引起羊的一种慢性、接触传染性、肺脏肿瘤性疾病［1］。本病的潜伏期较长，以肺部发生肿瘤为特征，病羊表现消瘦，咳嗽，呼吸困难，肺部发生肿瘤，最终衰竭而死亡［2］。绵羊感染JSRV多散发，不同品种，年龄和性别的绵羊均发病，饲养密度大，通风不良等有利于疾病传播。寒冷季节，疾病加重。本病呈世界范围内流行，被世界动物卫生组织确定为B类疫病，在我国被农业部兽医局列为三类动物传染病，国内多呈散发性、地方性流行，近年来我国养羊密度集中地区均有该病发生和流行的报道［3-5］，严重威胁着我国养羊业的健康发展。本文对某规模羊场发生的一起绵羊肺腺瘤病毒感染病例进行诊断，通过对病羊临床表现，剖检和实验室PCR诊断，确定该羊场发生绵羊肺腺瘤病毒感染。养殖单位通过采取对临床发病羊全部隔离、淘汰，饲养用具及环境全面消毒，疫情得到有效控制。现将疾病的诊断过程介绍如下：

1　发病情况

2015年5月开始，该羊场1周岁左右小羊开始陆续发病，发病率达10%左右，病程较长，经咳嗽、气喘、瘦弱、衰竭至死。羊场曾用青霉素、四环素类等多种药物进行治疗，均无显著效果。同时调查发现该羊场所贮备饲草有霉变现象。

2　临床特征

发病绵羊呼吸困难、鼻液粘稠、鼻孔流产卡他性分泌物、间断啰咳嗽、支气管“”音、病程长，低头时由鼻孔流出大量液体、体型消瘦、贫血、食欲降低，最后极度消瘦死亡。

3　病理变化

剖检可见病变主要表现于肺脏，整个肺脏的外观显著肿大、水肿，其体积可达正常肺脏的3倍以上，肺表面具有大量灰白色小结节、外观圆形、质地坚实、小结节发生融合，形成大结节。通过临床症状及病理剖检观察，高度怀疑为肿瘤病，送实验室进行绵羊肺腺瘤病PCR检测。

4　PCR检测

取病死羊肺脏病变组织加入灭菌生理盐水后匀浆，-20℃反复冻融3次，10 000 r/min离心5min，吸取上清液按病毒基因组DNA试剂盒（购自北京百泰克生物技术有限公司）说明书提取病死羊组织病料的基因组DNA。根据参考文献［6］中的方法合成绵羊肺腺瘤病1对检测引物（上游引物序列：5'-CTGGGAGCTCTTTGGCAAAAGCCAAAGCC-3'，下游引物序列：5'-CCTGCCGCGACCAGCACAAACAAGAG-3'）。以提取的DNA为模板，参照参考文献［6］中的PCR反应体系和PCR扩增程序进行PCR扩增，PCR扩增产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳观察可见在位于约367 bp处具有特异性扩增条带（见图1），其片段大小与罗军荣等［6］的报道完全一致。

图1　PCR扩增结果M:DL 2000Marker；1:病料PCR扩增产物；2:水对照

5　基因序列鉴定结果

将PCR扩增产物利用胶回收试剂盒回收纯化后，送生工生物工程（上海）股份有限公司测序，将测序结果与GenBank中登录的序列比对分析显示，PCR扩增产物的基因序列与登录号为AF105220的绵羊肺腺瘤病毒基因组序列同源性最高，为99.46 %。表明所扩增序列为绵羊肺腺瘤病毒特异性序列。

6　综合诊断结果

结合临床发病情况、临床特征、病理变化等临床诊断结果以及PCR检测、序列鉴定等实验室诊断结果综合判定此次病例由绵羊肺腺瘤感染所致。

7　小结与讨论

绵羊肺腺瘤病的分布广泛，在世界范围内都有发病报道，本病有传染性，死亡率很高，给养羊业带来严重经济损失，引起兽医界越来越广泛的关注。本病主要感染绵羊，山羊有一定抵抗力，感染疾病后最主要特征是在肺部形成肿瘤。绵羊肺腺瘤病毒感染后潜伏期很长，如果发生细菌病混合感染可加快疾病发生和死亡。对于绵羊肺腺瘤病的诊断方法，由于绵羊肺腺瘤病毒在体外培养没有适宜的细胞系，因此本病不能通过病毒分离的方法诊断。绵羊肺腺瘤病毒感染后在绵羊体内不产生抗体，因此本病不能通过血清学方法检测。故本病的诊断主要通过分子生物学方法进行确诊，分子生物学检测方法中PCR方法是目前实验室疾病检测最简单、最有效的主要方法，发生自然感染的病例，潜伏期较长，PCR方法可以用于疾病的早期诊断。目前，绵羊肺腺瘤病毒感染的诊断主要通过临床症状、病理剖检和实验室PCR检测。故本病例综合采用临床发病情况、临床特征、病理变化观察以及PCR检测、序列鉴定方法对此次病例进行综合诊断，诊断结果应具有十分高的准确性和可靠性。（编辑：段勇）

［1］朱福余，于立新，么宏强，等.绵羊肺腺瘤病毒检测方法的研究进展［J］.中国畜牧兽医，2014，41（4）:236-241.

［2］杨素芳，梁田，赵庆亮，等.新疆绵羊肺腺瘤病理学诊断与全基因组序列分析［J］.病毒学报，2015，31（3）:217-225.

［3］王林，韦海涛，李志军，等.北京地区绵羊肺腺瘤病的病理学及PCR诊断［J］.中国兽医杂志，2014，50（5）:22-24.

［4］杨素芳，司俊强，郑启伟，等.新疆部分地区绵羊肺腺瘤病流行病学调查［J］.石河子大学学报（自然科学版），2015，33（5）:46-51.

［5］刘畅，李磊，于立新，等.绵羊肺腺瘤病毒内蒙古分离株前病毒全基因组克隆及序列分析［J］.病毒学报，2014，30（5）:508-513.

［6］罗军荣，刘霄卉，余群英，等.绵羊肺腺瘤病特异性PCR及套式PCR诊断方法的建立［J］.病毒学报，2009，25（2）: 125-130.

10.3969/j.issn.1008-4754.2016.8.027

才格加（1971-），男，藏族，青海人，专科，畜牧师，研究方向：动物疫病防治与检疫。