辽东楤木叶中一个三萜皂苷*

邹淑君，许树军，李　靖，肖洪彬*（黑龙江中医药大学 .药学院 .实验中心，黑龙江 哈尔滨150040）

辽东楤木叶中一个三萜皂苷*

邹淑君a，许树军b，李靖a，肖洪彬b*
（黑龙江中医药大学 a.药学院 b.实验中心，黑龙江 哈尔滨150040）

经过乙醇溶液提取、正丁醇萃取、硅胶柱色谱分离，从辽东楤木（Araliaelata）的叶中分离得到2个三萜皂苷化合物。利用化学显色法、HPLC谱、核磁共振谱方法鉴定，确定其中一个化合物为辽东楤木叶中首次分得的化合物，该化合物名称为3-O-β-D-葡萄吡喃糖基齐墩果酸。

辽东楤木叶；三萜皂苷；分离；结构鉴定

辽东楤木（Aralia elata）是五加科木属植物，东北地区俗称刺老鸦,民间将根皮作“五加皮”入药,春季初发的嫩芽作为优良的绿色食品山野菜可供食用,属于山珍之一[1]。辽东楤木的活性成分主要为三萜皂苷。最初，对辽东楤木化学成分的研究多集中在根及茎上，而对资源丰富的叶资源的研究相对较少。近些年来有学者研究确定辽东楤木叶中皂苷类物质有很好的抗肿瘤作用、保肝作用等[2,3]，并且辽东楤木叶皂苷提取物口服毒性较小[4]。为了更好地了解和利用该植物叶资源，确定叶中的药效物质是研究该资源的重要使命。目前从辽东楤木叶中分离出的化合物有皂苷类物质、多糖类物质、脂肪类化合物、黄酮类物质等。本实验从辽东楤木叶中提取分离皂苷类成分，从该植物叶中分离得到2个皂苷类化合物，分别经化学法、高效液相色谱及核磁共振谱方法鉴定化合物结构，其中之一为首次从叶中分离。

1　实验部分

1.1仪器和材料

LC-2010型高效液相色谱仪（日本岛津公司）；SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵（郑州长城科贸有限公司）；旋转蒸发仪（上海申胜生物技术有限公司）；电子分析天平（瑞士METTLER TOLEDO公司）；ARX-300型核磁共振光谱仪（德国Bruker公司）；高效薄层板Kieselgel 60 F254及反相色谱用RP18薄层板（青岛海洋化工厂）；柱色谱用硅胶（200～300目,青岛海洋化工厂）。

辽东楤木叶采自黑龙江省五常市山河屯林业局凤凰山下,经黑龙江中医药大学药学院中药资源教研室鉴定；水为二次蒸馏水，其他所用试剂为国产分析纯。

1.2实验方法

辽东楤木叶置阴凉通风处干燥（2kg）,用20倍量75%乙醇加热回流提取3次,每次1.5h。合并乙醇药液，减压回收至无醇味，然后依次用石油醚、氯仿、水饱和的正丁醇萃取。收集正丁醇萃取液并低温真空干燥得淡黄色粉末（总皂苷）56g。总皂苷经高效薄层板Kieselgel 60 F254及反相色谱RP18薄层板确定硅胶柱色谱,氯仿-甲醇-水系统梯度洗脱,洗脱液经薄层板及高效液相色谱检查后相近者合并，得到6个部分。将第2个部分（约3,6g）再经硅胶分配柱色谱（CHCl3:MeOH:H2O=8∶1∶0.1）得到A、B、C、D 4个部分。将B部分（约1.8g）经硅胶分配柱色谱（CHCl3∶MeOH:H2O=10∶1∶0.1）得到化合物1和化合物2。

化合物鉴定方法如下：经Molish及Liebermann-Burchard显色反应；酸水解产物经HPLC色谱检测，条件为：DiamonsilC18（2）（250×4.6m m，5μm）柱，流动相为乙腈-水，梯度洗脱80min，流速1.0mL·min-1，柱温30℃；AlltechELSD 2000ES型蒸发光散射检测器，ELSD参数：漂移管温度110℃，载气（N2）流速3.2mL·min-1；核磁共振谱：以TMS为内标物质，C5D5N为溶剂，1H-NMR谱 300M Hz，1 3 C-NMR谱75MHz。

2　结果与讨论

化合物1经鉴定及与文献对比确定为3-O-β-D-葡萄吡喃糖基常春藤皂苷元，已有报道[5]。化合物2为辽东楤木叶中首次分离得到，鉴定结果如下：

化合物为白色无定形粉末状物质，Molish反应呈阳性，Liebermann-Burchard反应呈阳性。酸水解产物经过高效液相色谱与齐墩果酸和标准葡萄糖对比，检出葡萄糖、齐墩果酸和化合物2。碱性条件下化合物2基本不水解。化合物的1H-NMR谱在δ5.30给出归属于1个葡萄糖的端基质子信号，7个特征的甲基质子信号:0.90（3H，s，23-CH3）、0.92（3H，s，25-CH3）、0.99（3H，s，24-CH3）、1.01（3H，s，29-CH3）、1.08（3H，s，26-CH3）、1.23（3H，s，30-CH3）、1.76（3H，s，27-CH3）；1个烯氢质子信号 δ5.60（1H，br.s，H-12），。13C-NMR谱在δ106.9处叶出现1个糖的端基碳信号，烯碳信号122.5，144.8及羰基碳信号176.3，表明苷元为齐墩果酸型。另外的13C-NMR谱信号为：39.0（C-1）、26.5（C-2）、88.8（C-3）、39.4（C-4）、55.8（C-5）、18.5（C-6）、33.2（C-7）、39.7（C-8）、48.1（C-9）、37.4（C-10）、23.7（C-11）、122.5（C-12）、144.8（C-13）、42.2（C-14）、28.3（C-15）、23.8（C-16）、46.7（C-17）、42.0（C-18）、46.5（C-19）、31.0（C-20）、34.3（C-21）、33.2（C-22）、64.9（C-23）、13.6（C-24）、15.8（C-25）、17.4（C-26）、26.2（C-27）、180.2（C-28）、33.3（C-29）、23.8（C-30），为苷元13C-NMR谱的数据。及106.9（C-1'）、75.8（C-2'）、78.7（C-3'）、71.8（C-4'）、78.2（C-5'）、63.8（C-6'），为葡萄糖部分13C-NMR谱的数据。根据以上数据推测化合物2的结构见图1。命名为3-O-β-D-葡萄吡喃糖基齐墩果酸（3-O-β-D-glucopyranosyl-Oleanolic acid）。该化合物曾经从辽东楤木根部分离获得[6]。

图1　3-O-β-D-葡萄吡喃糖基齐墩果酸的结构式Fig.1　Structure of 3-O-β-D-glucopyranosyl-oleanolic acid

3　结论

经提取分离及鉴定，确定从辽东楤木叶中获得化合物3-O-β-D-葡萄吡喃糖基齐墩果酸，该化合物为首次从叶中分离获得。辽东楤木三萜皂苷类成分居多。从叶中分离的成分许多往往也存在于根或茎中，目前，从辽东楤木全株分离的皂苷成分已经有140多种。随着叶中新化合物的不断发现，可以分析对比辽东楤木不同部位中皂苷成分，为为从不同角度利用根茎叶提供参考。

［1］王忠壮，胡晋红，于占洋，等.楤木属植物的生物学研究及应用［M］.上海:第二军医大学出版社,2001.4-7.

［2］张秀萍，孙达辰，肖洪彬.辽东楤木叶总皂苷抗肿瘤作用研究进展［J］.中国实验方剂学杂志，2015,21（11）：232-234.

［3］王丽岩,肖洪彬,王鸣慧.辽东楤木叶总皂苷抗急性肝损伤的实验研究［J］.中医药信息,2009,26（2）:29-30.

［4］F Li，X He，W Niu，et al.Acute and sub-chronic toxicity study of theethanol extract fromleaves of aralia elata in rats［J］.Journal of Ethnopharmacology,2015,175:499-508.

［5］宋丽丽.辽东楤木叶中化学成分的研究［D］.长春:吉林大学, 2006.

［6］S.Sakai，M.Katsumata，Y.Satoh，et al.Oleanolicacidsaponinsfromroot barkofAraliaelata［J］.Phytochemistry,1994,35（5）:1319-1324.

A saponins from leaves of Aralias elate*

ZOU Shu-juna，XU Shu-junb，LI Jinga，XIAO Hong-binb*
（a.College of Pharmacy；b.Experiment Center，Heilongjiang University of Chinese Medicine，Harbin 150040，China）

After extracted by ethanol solution and butanol，silicagel column chromatographic method were used to extract and separate the saponin.Two saponins were isolated from leaves of Aralia elata.One of the two was separated from leaves of Aralia elata firstly.Chemical coloration method，HPLC and NMR were used to analyze the purity and the determine structure.This compound was identified as 3-O-β-D-glucopyranosyl-Oleanolic acid.

Leaves of Aralia elata；triterpenoid saponin；separation；Structure identification

R282.71

A

10.16247/j.cnki.23-1171/tq.20160867

2016-04-20

中国博士后科学基金面上项目（2014M551289）

邹淑君(1974-)：女，副教授，黑龙江中医药大学在站博士后工作人员，研究方向：药物分析。

肖洪彬：男，教授，研究方向：中药药理。