MTHFR基因C677T位点突变及高同型半胱氨酸血症和血管性痴呆的发生相关性

汪　琳,　张　涛,　白克镇



MTHFR基因C677T位点突变及高同型半胱氨酸血症和血管性痴呆的发生相关性

汪琳,张涛,白克镇

目的研究血浆同型半胱氨酸(Hcy)浓度及亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因多态性与血管性痴呆(VaD) 的关系。方法选取83例VaD患者作为观察组和81例非痴呆脑梗死患者作为对照组，分别测定两组患者的MTHFR基因多态性、Hcy浓度、维生素B12和叶酸水平，根据简易精神状态检查量表(MMSE)评定VaD患者痴呆程度，对指标进行比较和相关性分析。结果MTHFR基因TT纯合子在观察组VaD患者的分布频率明显高于对照组，差异具有统计学意义(P<0.05)；两组患者的MTHFR基因C、T等位基因分布频率差异具有统计学意义(P<0.05)。观察组VaD患者的血浆Hcy浓度明显高于对照组，其血清叶酸与维生素B12浓度明显低于对照组，VaD患者的血浆 Hcy 水平随着痴呆程度的增加而明显提高，差异均具有统计学意义(P<0.05)。VaD患者血浆Hcy水平与自身痴呆程度呈正相关(r=0.452，P<0.05)，与MMSE评分呈负相关(r=-0.246，P<0.05)。结论MTHFR基因C677T突变及高水平Hcy与VaD的发生、发展相关，高Hcy血症是VaD发病的一个重要因素。

亚甲基四氢叶酸还原酶;同型半胱氨酸;血管性痴呆;相关性

血管性痴呆 (vascular dementia，VaD) 是指由缺血性卒中、出血性卒中和造成记忆、认知和行为等脑区低灌注的脑血管疾病所致的严重认知功能障碍综合征，在我国患病率为1.1%～3.0%。早期研究认为亚甲基四氢叶酸还原酶(methylene tetrahydrofolate reductase，MTHFR)基因C677T突变与血管性痴呆相关[1]。近年来有学者研究发现高同型半胱氨酸(Hcy)血症是脑梗死发生的独立危险因素之一[2]，Hcy代谢的限速酶MTHFR的C677T碱基突变会较弱其自身活性，导致高Hcy血症。鉴于此，本文分析MTHFR的C677T基因突变及高同型半胱氨酸(Hcy)血症与血管性痴呆发生的相关性，旨在探讨这两者对血管性痴呆发生的影响，现报道如下。

1　材料和方法

1.1研究对象选取2013年10月-2015年9月在我院神经内科及精神科病房住院治疗的VaD患者83例作为观察组，其中男45例，女38例，年龄61～87岁，平均年龄(68.6±6.7)岁。另选取同期在我院接受治疗的81例非痴呆脑梗死患者作为对照组，其中男43例，女38例，年龄58～83岁，平均年龄(65.3±5.9)岁。两组患者均符合中华医学会第四届全国脑血管病学术会议通过的各项脑血管病诊断要点[3]，脑卒中时间>3个月。VaD患者符合美国精神病学会制定的《精神病的诊断和统计手册 (DSM-IV)》中老年性痴呆诊断标准；精神状态简易量表(MMSE)评分≤24分；Hachinski缺血量表评分≥7分；所有患者及家属签署知情同意书。排除标准：患有严重心、肝、肾、肺疾病者；神经系统其他疾病引发的痴呆；精神疾病患者；恶性肿瘤患者。

1.2检测指标及方法 两组患者入院次日清晨空腹抽取外周静脉血，从中抽取2 ml血液，血浆分离后，使用OLYMPUS AU5400全自动生化分析仪深圳奥萨制药公司提供的Hcy检测试剂盒，采用速率法测定血浆Hcy浓度。抽取2 ml血液分离血清后，使用西门子公司生产的CP叶酸分析仪和维生素B12分析仪，采用直接化学发光法检测叶酸和维生素B12浓度。提取DNA后，采用MTHFR C677T 检测试剂盒，使用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)技术检测MTHFR C677T 位单核苷酸多态性。

2　结　果

2.1两组患者的MTHFR基因型与等位基因分布MTHFR基因包括TT纯合子、CT杂合子、CC纯合子3种类型。两组患者经过Hardy-Weinberg拟合优度检验均符合遗传平衡规则(P>0.05)，具有群体代表性。MTHFR基因TT纯合子在观察组VaD患者的分布频率明显高于对照组，差异具有统计学意义(P<0.05)。观察组VaD患者的MTHFR基因C、T等位基因分布频率与对照组比较，差异有统计学意义(P<0.05)(见表1)。

2.2两组患者血浆Hcy及血清叶酸、维生素B12水平观察组VaD患者的血浆Hcy浓度明显高于对照组，其血清叶酸与维生素B12的浓度明显低于对照组，差异均具有统计学意义(P<0.05)(见表2)。

2.3VaD患者痴呆程度与血浆Hcy水平的相关性根据简易精神状态检查量表(MMSE)评分将VaD患者分为轻度痴呆(MMSE≥21分)、中度痴呆(10分≤MMSE<21分)和重度痴呆(MMSE<10分)3组。VaD患者的血浆Hcy水平随着痴呆程度的增加而逐渐提高，MMSE评分随着痴呆程度的增加而逐渐下降，而且3种不同痴呆程度VaD患者之间的Hcy 水平和MMSE评分差异均具有统计学意义(P<0.05)(见表3)。Pearson相关分析发现，VaD患者血浆Hcy水平与自身痴呆程度呈正相关(r=0.452，P<0.05)，与MMSE评分呈负相关(r=-0.614，P<0.05)。

2.4两组患者MTHFR不同基因型之间血浆Hcy水平两组中MTHFR基因TT纯合子型和CT杂合子型患者的血浆Hcy水平均明显高于本组的CC纯合子型患者，差异均具有统计学意义(P<0.05)(见表4)。

表1　两组患者的MTHFR基因型与等位基因频率比较[n(%)]

表2　两组患者Hcy、叶酸、维生素B12水平比较

表3　不同痴呆程度下VaD患者Hcy 水平比较

表4　MTHFR不同基因型之间血浆Hcy水平比较

与本组CC型比较*P<0.05

3　讨　论

人体MTHFR基因具有多态性，MTHFR基因C677T突变是指该基因的第4个外显子的第677个核苷酸碱基产生C→T突变[3]。该突变会导致MTHFR的酶活性和热稳定性下降，直接促进Hcy在人体内积累储存，导致高Hcy血症。蒋萍等[4]研究报道急性脑梗死患者MTHFR基因C677T突变与Hcy水平显著相关,MTHFR基因C677T突变可能是引起高Hcy的一个重要因素。本研究结果发现，MTHFR基因TT纯合子在VaD患者的分布频率明显高于非痴呆脑梗死患者，VaD患者的血浆Hcy浓度明显高于非痴呆脑梗死患者，差异均具有统计学意义(P<0.05)，提示VaD患者的MTHFR基因C677T突变发生可能性更高；而且研究还发现两组中MTHFR基因TT纯合子型和CT杂合子型患者的Hcy水平均明显高于本组的CC纯合子型患者，提示MTHFR基因中C677T的C→T突变与高Hcy症有关系，这与以往相关的研究结果基本一致[4,5]。

早期研究报道高水平Hcy会产生神经细胞毒性，引发海马部神经元死亡或者对其产生兴奋毒性作用[6]；进而导致患者智力、认知能力、记忆力等遭到损害，导致患者痴呆。Ravaglia等[7]研究发现随着Hcy水平升高，简易精神状况检查评分逐渐下降，Hcy是患者认知功能损害的独立危险因素。本研究结果发现，VaD患者的血浆Hcy水平随着痴呆程度的增加而逐渐提高，MMSE评分随着痴呆程度的增加而逐渐下降，Hcy水平与自身痴呆程度呈正相关(r=0.452，P<0.05)，与MMSE评分呈负相关(r=-0.614，P<0.05)，这与上述研究结果基本一致。Hcy的代谢需要维生素B12和MTHFR参与，通过甲基化转化为甲硫氨酸[3]。叶酸是调节Hcy代谢的关键酶，其水平的下降可引起血清Hcy水平的升高[8]。若叶酸、维生素B12缺乏，会导致Hcy代谢受阻而产生高Hcy血症。本研究结果发现，VaD患者的血浆Hcy浓度明显高于非痴呆脑梗死患者，其血清叶酸与维生素B12浓度明显低于非痴呆脑梗死患者，差异均具有统计学意义(P<0.05)，提示低叶酸和低维生素B12血症可引发高Hcy血症。而且有学者研究提出[9]，通过补充叶酸和维生素B12可有效降低患者Hcy水平，进而降低脑血管病的发生率。

综上所述，MTHFR基因C677T突变及高Hcy血症与VaD的发生、发展有关，高Hcy是VaD发病的一个重要因素，及时补充叶酸和维生素B12可降低Hcy水平，寻找MTHFR基因C677T突变的原因并予以防治，从而为防治VaD提供一些新的手段。

[1]杨志杰，于敏，谢汝萍，等.血管紧张素转换换酶基因与脑出血的相关研究[J].中国实用内科杂志,2001,21(10)：608-609.

[2]丁钦慕．急性脑梗死与血浆同型半胱氨酸关系的临床研究[J].中国实用神经疾病杂志，2010，13：39-40.

[3]施梦丽,弓园芳,陈淅泠,等.同型半胱氨酸浓度及MTHFR基因多态性与缺血性脑卒中的相关性[J].中国实用神经疾病杂志,2014,(17):53-54.

[4]蒋萍,臧大维.急性脑梗死患者MTHFR基因多态性与血浆同型半胱氨酸水平的关系[J].山东医药,2014,54(8):1-8.

[5]Montjean D,Benkhalifa M,Dessolle L,et al.Polymorphisms in MTHFR and MTRR genes associated with blood plasma homocysteine concentration and sperm counts[J].Fertility and Sterility,2011,95(2):635-640.

[6]Lipton SA,Kim WK,Choi YB,et al.Neurotoxicity associated with dual actions of homocysteine at the N-methyl-D-aspartate receptor[J].Proc Natl Acad Sci USA,1997,94(11):5923-5928.

[7]Ravaglia G,Forti P,Maioli F,et al.Homocysteine and cognitive function in healthy elderly community dwellers in Italy[J].Am J Ciln Nutr,2003,77(3)：668-673.

[8]Mejia Mohamed EH,Tan KS,Ali JM,et al.TT genotype of the methylenetetrahydrofolate reductase C677T polymorphism is an important determinant for homocysteine levels in multiethnic malaysian ischaemic stroke patients[J].Ann Acad Med Singapore,2011,40：186-191.

[9]Ji Y,Tan S,Xu Y,et al.Vitamin B supplementation，homocysteine levels,and the risk of cerebrovascular disease a meta analysis[J].Neurology,2013,81(15):1298-1307.

The relationship between the plasma homocysteine levels,the MTHFR gene polymorphism and vascular dementia

WANGLin,ZHANGTao,BAIKezhen.

(DepartmentofPsychiatry,TheAffiliatedHospitalofSouthwestMedicalUniversity,SichuanLuzhou64600,China)

ObjectiveTo study on the association between the plasma homocysteine (Hcy) concentration,the methylene tetrahydrofolate reductase gene polymorphism(MTHFR) and vascular dementia (VAD).Method83 patients with VaD were selected as the observation group and 81 patients with non dementia cerebral infarction were selected as control group,MTHFR gene polymorphism,Hcy concentration,Vitamin B12 and folic acid levels in two groups of patients were measured,the degree of dementia in patients with VaD were assessed according to the mini mental state examination scale (MMSE),the indicators were compared and correlation were was analyzed.ResultsThe distribution frequency of MTHFR gene TT in the observation group was significantly higher than that in the control group,the difference was statistically significant (P<0.05).The distribution frequency of C and T allele of the MTHFR gene in the two groups had statistical significance(P<0.05).The plasma Hcy concentration of VaD patients in observation group was significantly higher than that in control group,the serum folate and vitamin B12 concentrations were significantly lower than those of the control group,the level of plasma Hcy in VaD patients was significantly increased with the increase of the degree of dementia,the differences were statistically significant (P<0.05).The level of plasma Hcy in VaD patients was positively correlated with the degree of dementia (r=0.452，P<0.05),and negatively correlated with the MMSE score(r=-0.246，P<0.05).ConclusionMTHFR gene C677T mutation and high level of Hcy are correlated with the occurrence and development of VaD,high plasma Hcy blood disease is an important factor for the occurrence of VaD.

Methylene tetrahydrofolate reductase;Homocysteine;Vascular dementia;Correlation

1003-2754(2016)08-0696-03

2016-04-14；

2016-08-03

(西南医科大学附属医院精神科，四川 泸州 646000)

汪琳，E-mail：cedirt@163.com

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