荨麻汁体外抑菌作用的初步研究

王秀艳

（赤峰学院　生命科学学院，内蒙古　赤峰　024000）

荨麻汁体外抑菌作用的初步研究

王秀艳

（赤峰学院生命科学学院，内蒙古赤峰024000）

研究荨麻汁对几种致病菌的体外抑制作用，确定最低及最佳抑菌浓度.通过在固体培养基中添加不同浓度的荨麻汁，研究其对绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌抑菌圈直径的影响.荨麻汁浓度在100～700ul/m l范围内对绿脓杆菌，枯草杆菌，金黄色葡萄球菌抑制作用较为显著；荨麻汁浓度在700ul/m l时对绿脓杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌菌落完全抑制.荨麻汁对绿脓杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌均有抑制作用，且完全抑制浓度为700ul/m l.

荨麻汁；绿脓杆菌；枯草杆菌；金黄色葡萄球菌；抑菌作用

狭叶荨麻（UrticaangustifoliaFisch.ExHornem.）为荨麻属多年生野生草本植物，是传统的可药可食的野生植物［1］.该植物富含蛋白质、脂肪、氨基酸及无机元素，其中谷氨酸、天门冬氨酸含量更为突出，是营养价值、保健价值极高的山野菜，可调节人们的食物结构，可鲜食、炒食、凉拌、酱菜、烹调等［2］.

狭叶荨麻的茎皮纤维可用于纺织或造纸.茎、叶可入药，能祛风、化痞、解毒、温胃［2］.祛风定惊，消食通便.用于风湿关节痛，产后抽风，小儿惊风，小儿麻痹后遗症，高血压，消化不良，大便不通；外用治荨麻疹初起，蛇咬伤［2］.

绿脓杆菌（pseudomonas aeruginosa）或称铜绿色假单胞菌，它属假单胞菌属（pseudomonas）［3］.广泛存在于自然界，是伤口感染较常见的一种细菌，也是一种致病力较低但抗药性强的杆菌.绿脓杆菌能产生多种致病物质，主要是内毒素、外毒素、蛋白分解酶和杀白组胞素等［3］.其致病特点是引起继发感染，多发生在机体抵抗力降低时，如大面积烧伤，长期使用免疫抑制剂等.绿脓杆菌感染可发生在人体任何部位和组织、常见于烧伤或创伤部位、中耳、角膜、尿道和呼吸道［3］.患者感染后可产生特异性抗体，有一定的抗感染作用.临床上常见的有皮肤和皮下组织感染，中耳炎、脑膜炎、呼吸道感染、败血症等［3］.

枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），是芽孢杆菌属的一种［4］.广泛分布在土壤及腐败的有机物中，为条件致病菌，易在枯草浸汁中繁殖，故名枯草芽孢杆菌［5］.枯草芽胞杆菌毒性低，但其可致呼吸道感染、心内膜炎，以及菌血症、败血症等.金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属（Staphylococcus），有“嗜肉菌”的别称，是革兰氏阳性菌的代表，可引起许多严重感染［6］.金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染［6］，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染［7］.

本试验研究了荨麻汁对上述三种细菌的体外抑制作用，如获成功，对人类由上述细菌所引起疾病的预防和治疗具有重大意义.

2　试验材料与方法

2.1试验材料

新鲜狭叶荨麻：（采于赤峰市翁牛特旗）

供试菌：绿脓杆菌，枯草芽孢杆菌，金黄色葡萄球菌（由赤峰学院医学院微生物实验室提供）

试验培养基：营养琼脂培养基：营养琼脂45克，水1000m L.

2.2试验方法

2.2.1培养基的制备

营养琼脂培养基的制备：按配方称取营养琼脂，加入蒸馏水，加热，用玻璃棒不断搅拌至完全溶解，用P H计测其p H为7.3左右（p H用1m o l/L N a O H调节），然后置于立式压力蒸汽灭菌器中121℃灭菌30min，冷却至60℃取出后在无菌超净工作台内制备平板培养基，冷却后备用.

2.2.2菌种扩繁

接种前，将标准菌株及其他所需物品置于超净工作台中进行紫外灯杀菌30min.

接种前打开吹风，洗净双手，伸入超净工作台中，用酒精棉擦拭双手和标准菌株的培养皿外壁，点燃酒精灯，灼烧接种环.然后，将封口膜撕下，左手无名指托住标准菌株培养皿底部，中指和大拇指夹住标准菌株培养皿，食指和大拇指灵活揭开和盖住培养皿，右手取已平板培养基置于酒精灯前方，左手大拇指在上其余四指在下抓住旋转着灼烧标准菌株培养皿，然后右手拿好接种环，在火焰上方反复灼烧几次接种环，慢慢伸入标准菌株培养皿中，待温度不能灼伤菌种时，轻轻刮取菌丝，慢慢将接种环抽出（注意不要使菌种及菌种环碰到培养皿内壁），小心伸入待接种培养皿培养基中部，涂均匀后慢慢抽出接种环，勿碰培养皿内壁，重复上述操作.将接好的培养皿贴签并放在恒温培养箱内37±1℃黑暗条件下培养3d，在培养期应每6h观察记录一次，如有杂菌感染应及时将培养皿取出，以免污染其它菌种.在37℃恒温培养箱培养3天，长满整皿后即为二级平板菌种.

2.2.3菌悬液制备

将已扩繁好的二级平板菌种从培养箱中取出，用酒精棉球擦拭后放入超净工作台内进行紫外灯杀菌，菌悬液配置在超净工作台中进行.挑取长势良好的菌种进行使用，然后将培养好的培养皿菌种用5m l无菌水将培养基上长出的菌洗脱下来，每种菌液各稀释至30m l，倒入试剂瓶中，备用.

2.2.4荨麻汁的制备

将榨汁机放入超净工作台，用无菌水将榨汁机冲洗干净，取新鲜的洗净的荨麻放入托盘，一起放入超净工作台，然后打开紫外灯，使榨汁机与荨麻在密闭环境下紫外灭菌30min.关闭紫外灯，打开吹风，用镊子夹取几根荨麻放入75%酒精中浸泡5～10min进行消毒，后用无菌水反复冲洗两到三次，控干水分，放到托盘上.将已消毒清洗后的荨麻进行榨汁.

2.2.5荨麻汁浓度设置

表1　试验浓度设置

2.2.6打孔法测定荨麻汁的抑菌作用

在超净工作台内用移液枪分别吸取稀释后的菌液1m l，移入制备好的培养基中，使菌液均匀铺满培养基.点燃酒精灯，将灭完菌的打孔器在酒精灯外焰灼烧，待打孔器冷却后，打开摇匀平铺好菌液的培养皿，围绕培养皿培养基中心用打孔器呈正三角形打三孔，然后将打孔器中取出的菌饼弃去，用移液枪将不同浓度的荨麻汁移入培养基的小孔内［11］，每孔移入荨麻汁为20u l，重复以上操作.

将移入荨麻汁的培养皿用封口膜封口后，逐一标记，然后将这些培养皿放入恒温箱中37℃恒温培养，每6h观察记录一次.

2.2.7抑菌圈直径的测定

培养3天，选择抑菌圈的任一位置测量其直径，然后逆时针旋转60°第二次测量其直径，接着再逆时针旋转60°进行第三次测量，3个角度测量的平均值为抑菌圈直径.

3　结果与分析

表2　不同浓度的荨麻汁对绿脓杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌抑菌圈直径的影响

图1　不同浓度的荨麻汁对绿脓杆菌、枯草杆菌和金黄色葡萄球菌抑菌圈直径的影响

3.1荨麻汁对绿脓杆菌的影响

3.1.1荨麻汁对绿脓杆菌长势的影响

图2　不同浓度的荨麻汁对绿脓杆菌的影响

由图2所示，添加不同浓度的荨麻汁对绿脓杆菌的生长均有抑制作用，且随着荨麻汁浓度的升高绿脓杆菌菌体生长速度减慢、长势减弱.

3.1.2荨麻汁对绿脓杆菌抑菌圈直径的影响

表2、图1分析可由知，当荨麻汁浓度在0～100u l/ml之间时，对绿脓杆菌生长抑制作用较弱，浓度在100～700u l/ml之间时，对绿脓杆菌生长抑制作用较明显，在该浓度范围内随着荨麻汁浓度的升高抑菌圈直径增大二者呈正相关，且在浓度为700u l/ml时，绿脓杆菌的抑菌圈直径达最大.

3.2荨麻汁对枯草杆菌的影响

3.2.1荨麻汁对枯草杆菌长势的影响

图3　不同浓度的荨麻汁对枯草杆菌抑菌圈直径的影响

由图3所示，添加不同浓度的荨麻汁对枯草杆菌的生长均有抑制作用.随着荨麻汁浓度的升高，枯草杆菌生长速度逐渐减慢、长势减弱.

3.2.2荨麻汁对枯草杆菌抑菌圈直径的影响

由表2、图1分析可知，当荨麻汁浓度在0～100u l/ml范围之间时，对枯草杆菌抑制作用较弱，浓度在100～700u l/ml之间时，在该浓度范围内随着荨麻汁浓度的升高抑菌圈直径变大，二者呈正相关，对枯草杆菌抑制作用较明显，且在浓度为700u l/m l时，枯草杆菌抑菌圈直径达最大.

3.3荨麻汁对金黄色葡萄球菌的影响

3.3.1荨麻汁对金黄色葡萄球菌长势的影响

图5　不同浓度的荨麻汁对金黄色葡萄球菌的影响

由图5所示，添加不同浓度的荨麻汁对生长均受到不同程度影响，随着荨麻汁浓度的升高绿脓杆菌生长速度逐渐减慢、长势减弱.

3.3.2荨麻汁对金黄色葡萄球菌菌落直径的影响

由表2、图1分析可知，当荨麻汁浓度在0～100u l/ml范围之间时，对金黄色葡萄球菌生长抑制作用较弱，浓度100～700u l/ml之间时，对金黄色葡萄球菌生长抑制作用较明显，在该浓度范围内随着荨麻汁浓度的升高抑菌圈直径增大，二者呈正相关，且在浓度为700u l/ml时，金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径达最大.

4　结论

4.1在琼脂平板培养基中加入不同浓度的荨麻汁对绿脓杆菌、枯草杆菌和金黄色葡萄球菌生长均有不同程度的抑制作用，随荨麻汁浓度的升高，绿脓杆菌、枯草杆菌和金黄色葡萄球菌抑菌圈直径逐渐增大.

4.2荨麻汁对绿脓杆菌、枯草杆菌和金黄色葡萄球菌最低抑制浓度均为100u l/m L.

4.3荨麻汁对绿脓杆菌、枯草杆菌和金黄色葡萄球菌完全抑制浓度为700u l/m L.

4.4荨麻汁浓度在100-700u l/m L范围内，荨麻汁对三种菌的抑制作用由大到小依次为：枯草杆菌〉金黄色葡萄球菌〉绿脓杆菌.

荨麻是很有经济价值的野生植物和农作物［8］.荨麻不仅是富含生物学活性的物质［9］，而且我国荨麻植物资源丰富、分布广泛，但开发应用不足，市场上以荨麻原料为主的产品较少，还需要加快对荨麻植物资源的开发应用［9］.而且，随着抗生素在临床的广泛、大量使用，其滥用和浪费现象也日益增加.过多使用抗生素对细菌产生耐药性，使抗生素的抗菌作用下降，抗生素在进入人体发挥治疗作用的同时，也会引起很多的不良反应，具有较强的副作用，因此，开发利用荨麻等天然植物药代替抗生素具有广阔的发展前景.

〔1〕王亚丽，秦民坚，戴岳，等.狭叶尊麻根、茎、叶的抗炎镇痛作用［J］.现代中药研究与实践，2005，19（3）：42.

〔2〕张海悦.狭叶荨麻中降血糖和抗疲劳活性成分的研究［D］.东北师范大学.

〔3〕韩青松，简永利，涂宜强，等.绿脓杆菌研究进展［J］.畜牧与饲料科学，2012，33（1）：122-124.

〔4〕彭清忠，张惟材，朱厚础.枯草杆菌表达系统的研究进展［J］.生物技术通讯，2001，12（3）：220-225.

〔5〕周亚妮.浅谈枯草杆菌的特性及其应用［J］.黔南民族医专学报，2010，23（2）：84-88.

〔6〕郭孟洁.锂皂石、玉米秸秆基复合调湿材料的制备与性能研究［D］.天津大学，2012.

〔7〕李雁津.骏枣内生细菌的分离、鉴定与拮抗菌的筛选［D］.山西医科大学，2012.

〔8〕张晓庆，杨晓亮，那日苏，等.荨麻资源的应用及开发前景［J］.畜牧与饲料科学，2009，30（5）：185-187.

〔9〕李成生.荨麻属植物可利用价值综述［J］.河北林业科技，2013（3）：73-74.

Q946.91

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1673-260X（2016）08-0028-03

2016-05-09