液质联用仪测定海产品中氯霉素不确定度的评定

□ 邢　华　湛江市质量计量监督检测所　廖建萌　湛江市食品药品检验所　罗　林　湛江市质量技术监督局

液质联用仪测定海产品中氯霉素不确定度的评定

□ 邢华湛江市质量计量监督检测所廖建萌湛江市食品药品检验所罗林湛江市质量技术监督局

按国家标准测定氯霉素的含量，利用液质联用仪测定了海产品中氯霉素含量，对氯霉素测量不确定度的来源进行了分析和量化评定。水产品中氯霉素含量为5.0 μ g/k g时，测量结果的扩展不确定度为0.58 μ g/k g（k=2）。

测量不确定度；海产品；氯霉素；液质联用法

测量的目的是用某种手段或者方法获得数值指标的真值，在化学分析或仪器分析中得到的数值由于存在分析误差会有波动，这些数值的波动围绕在真值的周围，离真值很近但不是真值，在一个合理的范围内该测量数值可以接受，往往也可以说测量数值是一个近似估计值，具有离散性和不确定性，人们引入测量不确定度来描述这个离散性和不确定性，用测量不确定度来表达各种误差的总和。在质量管理体系中，对测定不确定度是重点管理范畴。原则上，所有的测定结果都应该标示不确定度，不确定度的评定方法是质量计量研究领域的重点，不同的测定方法评定不确定度的内容和过程不同。仪器分析和化学分析中不确定度是分析工作者要掌握的技能。

氯霉素是一种有效的广谱抗生素。其化学结构为对硝基-D-苏阿糖型-二氯乙酰氨基-1，3-丙二醇，易溶于甲醇、乙酸乙酯、丙醇等有机溶剂，其结构中有苯环等效发色基团存在，在275～280 nm处有最大紫外吸收峰。对于很多种类的真菌、霉菌等，氯霉素都具有很强的抑制作用，在海产养殖业曾被广泛应用。但由于低浓度的氯霉素药物残留会诱发多种致病菌如大肠杆菌、沙门菌等的耐药性，还会引起人体粒状白细胞缺乏症、骨髓造血功能、障碍性贫血等其他恶性血液性疾病，对人体健康构成潜在性的危害，引起世界许多国家和地区的高度重视。欧盟、美国等均在法规中规定氯霉素在动物组织中不得检出。

本文参考《可食动物肌肉、肝脏和水产品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考残留量的测定液相色谱-串联质谱法》（GB/T 20756-2006），将该方法引入到实验室，测定海产品中氯霉素含量，分析了测定海产品中氯霉素含量的步骤和方法带来的不确定度，并对测量氯霉素含量不确定度进行了评定。

1　实验部分

1.1试剂与仪器

高效液相色谱质谱联用仪：LCMS-8030（日本岛津公司）；液相色谱柱：C18；电子分析天平：XS205（METTELER TOLEDO）；氯霉素标准物质：纯度99.0%（Dr.E公司）。

1.2测定方法

取鱼、虾肌肉组织用肉类组织粉碎机粉碎。然后称取样品5 g（精确至0.01 g），置于50 mL离心管中，加入15 mL 1%氨化乙酸乙酯，5 g无水硫酸钠，均质提取30 s，4000 r/min离心5 min。重复提取1次，合并上清液，定容50 mL，取10.0 mL乙酸乙酯提取液在45 ℃浓缩至干，用流动相复溶解并定容至2.0 mL，过0.22 μm滤膜，上机进行测定。测量流程如图1所示。

图1　测量流程图

1.3数学模型

测定海产品中氯霉素含量按(1)公式计算。

式（1）中，X为试样中氯霉素含量，μg/kg；c为在标准曲线拟合读取的氯霉素样品溶液浓度，μg/L；V为样品最终定容体积，mL；m为样品的称样量，g；r为回收率。

1.4测量不确定度来源

结合样品的处理过程和仪器测定过程，分析测量不确定度主要有以下的来源：样品取样的随机性和在称样是用到电子分析天平，其测量的随机误差构成样品称样量的不确定度；用来校准未知样浓度的标准拟合曲线的不确定度；定容体积引入的不确定度；提取、浓缩、转移过程的误差；仪器精密度和重复性引起的不确定度；LC/ MS仪器测定及校准引入的不确定度；标准溶液配制所产生的不确定度。测定氯霉素含量的步骤及不确定度来源见图2。

2　不确定度评定

2.1氯霉素标准工作溶液浓度的不确定度

氯霉素标准工作溶液配制方法为：准确称取氯霉素标准物质0.010 0 g，置于含有少量甲醇100 mL容量瓶中，溶解后用甲醇溶解定容，得到氯霉素标准储备液，浓度为100 mg/L；然后取1.0 mL氯霉素标准储备液，置于100 mL容量瓶中并用甲醇定容。

氯霉素标准使用溶液的浓度按式（2）计算。

图2　测定氯霉素含量的步骤及不确定度来源

式（2）中，配制氯霉素标准使用液溶液浓度用C（m g/L）表示；v1为移取1.0 mL氯霉素标准储备液体积，v2为两次定容的体积相乘。

2.2称量过程物质带来的不确定度

2.2.1称取氯霉素标准物质质量带来的不确定度

由于称取氯霉素标准物质采用精度为0.000 1 g的电子分析天平，这个不确定度是由电子分析天平校准不确定度引入，对测定结果的影响很小，可以忽略不计。

2.2.2氯霉素标准物质含量的不确定度。

因为没有绝对纯的物质，氯霉素标准物质的绝对含量不可能为100%，按照购买有资质机构提供的氯霉素标准物质证书，显示氯霉素含量的不确定度为：u（m）=0.5%。

2.2.3容量瓶定容体积的不确定度

使用前对容量瓶进行检定，根据具有资质的机构给出的检定证书，100 mL容量瓶的不确定度为：u1（V1）=u2（V3）=0.05 mL；

同样，1.0 mL可调移液器具有资质的机构给出的检定证书显示不确定度为：u3（V2）=0.034 mL。

综合上述的各个因素，氯霉素溶液浓度的不确定度为整个标准物质配制过程合成相对标准不确定度，结果为：

2.3液质联用仪测量引入的不确定度

液质联用仪测量引入的不确定度可根据液质联用仪校准证书提供：U=5%，k=2，液质联用仪测量引入的相对不确定度为:u(S1)=5%/2=0.025。其中，引入的为以下几个方面：自动进样器；仪器的调谐校准；雾化器的雾化效率稳定性；质量传输稳定性；质量漂移的准确性；标准工作溶液的不确定度等。由于标准和样品测定同样受到B类不确定度影响，液质联用仪测定氯霉素含量主要是有拟合标准曲线引入不确定度。

2.4样品称量引入的不确定度

称样5.00 g，天平的检定证书给出MPE为±0.05 g，取矩形分布，导致的不确定度为:

2.5前处理操作过程引入的不确定度

依据所述方法，对加标样品做6次前处理平行实验，测定结果重复性的相对标准偏差为:RSD（%）=5.19%，由前处理操作过程引入的相对标准不确定度即为相对标准偏差RSD（%）=0.051 9%在不确定度公式中用urel(rep)表示。

3　合成相对标准不确定度

将上述的整个检测流程引入的不确定度，计算测定水产品中氯霉素的合成相对标准不确定度为:

在根据标准不确定度的公式得到: U(W)=urel(W)×=0.058×5=0.29μ g/k g

4　扩展不确定度与测量结果表示

根据扩展不确定度的定义，取包含因子k=2时，则测定水产品中氯霉素含量扩展不确定度为:U=k×u(W)=0.58 μg/kg。

用国家标准方法 GB/T 20756-2006，测定结果含量为5.0 μg/kg时，氯霉素测量结果应表述为:W=(5.0±0.58) μg/kg，k=2。

5　结语

对氯霉素测量结果不确定度贡献较大的分量有前处理操作过程引入的不确定度和液质联用仪测量引入的不确定度。水产品中氯霉素含量为5.0 μg/kg时，氯霉素测量结果应表述为:W=(5.0±0.58)μg/kg，k=2.测量结果的扩展不确定度为0.58 μg/kg(k=2)。

［1］中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.可食动物肌肉、肝脏和水产品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考残留量的测定液相色谱-串联质谱法（GB/T 20756-2006）［S］.北京：中国标准出版社，2006.

［2］中国合格评定国家认可委员会.化学分析中不确定度的评估指南（CNAS GL06）［S］.2006.

［3］中华人民共和国国家质量技术监督局 测量不确定度评定与表示（JJF 105921999）［S］.1999.

［4］李东刚，李春娟，吴凡，等.高效液相色谱法测定巴氏杀菌乳中糠氨酸不确定度的评定［J］.化学分析计量，2008，17（3）：7-9.

［5］余孔捷，黄杰，刘正才，等.液质联用法测定水产品中孔雀石绿、结晶紫的不确定度评定［J］.分析试验室，2008，27（5）：203-209.

邢华（1975-），女，汉族，河北广宗人，本科，助理工程师。研究方向：计量管理。