不结球白菜体外抗氧化活性部位的筛选与研究

马景蕃，刘喜明，陈小红（1.龙岩学院生命科学学院，福建龙岩64012；2.福建省预防兽医学与兽医生物技术重点实验室，福建龙岩64012；.龙岩学院艺术与设计学院，福建龙岩64012）

不结球白菜体外抗氧化活性部位的筛选与研究

马景蕃1，2，刘喜明3，陈小红1，2
（1.龙岩学院生命科学学院，福建龙岩364012；
2.福建省预防兽医学与兽医生物技术重点实验室，福建龙岩364012；3.龙岩学院艺术与设计学院，福建龙岩364012）

应用DPPH自由基清除法、羟自由基清除法、超氧阴离子自由基清除法、ABTS+·清除法四个抗氧化指标对不结球白菜的5个不同极性部位石油醚相、氯仿相、乙酸乙酯相、正丁醇相和水相的抗氧化能力进行评价，同时考察了总酚和总黄酮的含量与抗氧化能力的关系，并对活性最强部位进行了脂质抗氧化研究。结果表明，除水相外，不结球白菜其他4个极性部位均表现出一定的抗氧化能力。总酚和总黄酮的含量与各部位的抗氧化能力具有显著相关性。乙酸乙酯相清除DPPH自由基、羟自由基、超氧阴离子自由基、ABTS+·的EC50值分别为（0.64±0.05）、（1.17±0.12）、（1.02±0.15）、（0.78±0.07）mg/mL；乙酸乙酯相的抗氧化能力最高，其总酚的含量为（151.32±1.87）mg GAE/g DW，总黄酮含量为（32.97±0.56）mg rutin/g DW；10 mg/mL的乙酸乙酯相对H2O2诱导红细胞氧化的抑制率达到62.11%，对H2O2诱导小鼠肝脏脂质过氧化的抑制率为51.26%。实验结果表明，不结球白菜乙酸乙酯相具有较强的抗氧化活性，是天然抗氧化活性物质的良好来源。

不结球白菜，抗氧化活性，总酚，总黄酮，脂质过氧化

已有研究表明，由于自由基的增多，会引起机体脂质过氧化的增强，自由基及其所介导的脂质过氧化会导致许多疾病的发生［1］。占当前医学研究领域前三位的心血管疾病、肿瘤和衰老均与自由基引起的脂质过氧化损伤有关［2］。因此，预防和治疗这些疾病，自由基清除剂或抗氧化剂的研究应用是非常重要的。人工合成的抗氧化剂，如二丁基羟基甲苯（BHT）等，虽然具有一定抗氧化效果，但研究表明也可能会引起肝脏损坏，甚至会诱发癌症［3］。据相关文献报道，很多的中草药［4］、蔬菜和水果［5］都具有抗氧化活性，从这些药用或食用植物中找寻低毒安全的天然抗氧化剂己成为抗氧化剂产业发展的必然趋势。

不结球白菜（Brassica campestris ssp.chinensis Makino）是长江中下游地区主栽蔬菜品种之一［6］，中医认为不结球白菜微寒味甘，有养胃生津、除烦解渴、利尿通便、清热解毒之功效［7］。国内外学者从不结球白菜中分离得到一系列复杂的化学成分，其中相当一部分具有生理活性［8］。最新研究还发现，不结球白菜提取物能提升血中“好”雌激素代谢物—2羟雌酮的水平，对预防乳腺癌有益［9］。有关不结球白菜提取物清除自由基的研究多集中于乙醇总提物及多糖等成分［10］，为了系统的评价不结球白菜总提物不同极性部位的抗氧化活性，本文用不同极性溶剂提取不结球白菜，利用体外抗氧化活性体系筛选出活性部位，并对其总酚和总黄酮含量进行测定，旨在为系统开发不结球白菜资源在食品、药品和保健品领域的应用提供实验支持，以延长产业链，为不结球白菜的深度利用提供理论依据。

1　材料与方法

1.1材料与仪器

不结球白菜品种“苏州青” 由龙岩学院生物技术课题组提供；2，2’-联氮基双（3-乙基苯并噻唑－6－磺酸）二铵盐（ABTS）、1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH） 美国Sigma公司；乙醇、石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、FeSO4、H2O2、三氯乙酸（TCA）、硫代巴比妥酸（TBA）、邻苯三酚、NaNO2、Al（NO3）3、没食子酸、芦丁等均为国产分析纯；ICR雄性小鼠实验动物许可号［SCXK-（京）-2012-001］，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。

WFM-10型振动中药磨粉机江阴市昶衡机械设备有限公司；RE-52AA旋转蒸发仪上海科晓科学仪器有限公司；UV762紫外可见分光光度计上海仪电分析仪器有限公司；TGL-16M台式高速冷冻离心机杭州艾普仪器设备有限公司；FA1004电子天平长沙科怡仪器设备有限公司；Scientz-18ND冷冻干燥机上海圣科仪器设备有限公司。

1.2实验方法

1.2.1不结球白菜不同极性部位的制备不结球白菜采收后，用聚乙烯膜真空包装，迅速用液氮冷冻，真空冷冻干燥后粉碎过60目筛。称取100 g干燥粉末，用500 mL 75%乙醇超声提取35 min，再回流提取3 h，抽滤，滤渣重复以上操作一次，合并两次滤液。旋转蒸发浓缩至近干，即为不结球白菜提取物（16.57 g）。将提取物用蒸馏水超声溶解35 min，得到水悬液，将其转入500 mL的分液漏斗中，依次用等体积的石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇分别萃取3次，合并各自的萃取液并保留最后的水相，依次得到石油醚相、氯仿相、乙酸乙酯相、正丁醇相和水相的萃取物［11］。各部位经旋转蒸发浓缩，真空冷冻干燥至恒重，置于4℃冰箱冷藏保存备用。

1.2.2抗氧化活性测定

1.2.2.1清除DPPH自由基能力测定按照文献［12］的方法略作改动，配制6.5×10-5mol/L DPPH的乙醇溶液，分别吸取2 mL不同质量浓度的样品和DPPH的乙醇溶液置于试管中，摇匀，黑暗条件下室温反应30 min，于波长517 nm处测定吸光度值（A）i；分别吸取2 mL DPPH的乙醇溶液与无水乙醇于试管中，反应后于517 nm处测定其吸光度值（A）c；再分别吸取2 mL待测样品液和无水乙醇于试管中，反应后在517 nm处测定吸光度值（A）j。用VC为阳性对照，按式（1）计算其清除率，并计算待测样品液的半数抑制浓度（EC5）0。

1.2.2.2清除羟自由基能力测定参照Chaieb等［13］的方法略作改动，取0.2 mL 10 mmol/L的FeSO4-EDTA混合液于试管中，加入0.5 mL 10 mmol/L的α-脱氧核糖溶液，再加入0.2 mL不同浓度的待测样品液，用pH7.4的0.1 mol/L磷酸缓冲液定容至1.8 mL，然后加入0.2 mL 10 mmol/L的H2O2，混匀后于37℃恒温水浴中反应1 h，再加入2.8%的三氯乙酸（TCA）溶液1 mL，1%的硫代巴比妥酸（TBA）溶液1 mL，混匀后于沸水浴中反应15 min，冷却后在532 nm处测定吸光值为Ai，用0.2 mL蒸馏水代替待测样品液，测得吸光值（Ac），用磷酸缓冲液代替脱氧核糖溶液测得吸光值（Aj）。用VC为阳性对照，按式（1）计算其清除率，并计算待测样品液的半数抑制浓度（EC50）。

1.2.2.3清除超氧阴离子能力测定参照文献［14］的方法略加改动，取0.05 mol/L的磷酸缓冲液（pH=8.0）2.25 mL于试管中，分别加入0.5 mL不同浓度的待测样品液和25 mmol/L的邻苯三酚溶液0.2 mL，充分混匀后在25℃水浴中反应5 min，再加入0.5 mL 80 mmol/L 的HCl终止反应，在420 nm处测定吸光值Ai，用0.5 mL 1%二甲基亚砜（DMSO）的无水乙醇代替样品液，测得吸光值（Ac）；为排除供试液颜色干扰，用0.5 mL的无水乙醇代替邻苯三酚溶液，测得吸光值（Aj）。用VC为阳性对照，按式（1）计算其清除率，并计算待测样品液的半数抑制浓度（EC50）。

1.2.2.4清除ABTS+·能力测定参考Saiga等［15］的方法并加以改进，将7 mmol/L ABTS溶液10 mL与2.45 mmol/L过硫酸钾溶液10 mL混合，旋涡均匀后置于室温黑暗条件下12～16 h，用以制备ABTS+·。用95%乙醇将制备的ABTS+·溶液稀释至其在波长734 nm处的吸光值为0.70±0.02。将l00 μL不同质量浓度（0.025～0.4 mg/mL）的待测样品溶液加入3.9 mL ABTS+·溶液中，旋涡均匀后室温放置10 min，测量其在波长734 nm处的吸光度值（Ai）。用l00 μL 95%的乙醇液代替样品液，测得吸光值（Ac）；用3.9 mL 95%的乙醇溶液代替ABTS+·溶液，测得吸光值（Aj）。用VC为阳性对照，按式（1）计算其清除率，并计算待测样品液的半数抑制浓度（EC50）。

1.2.3总酚含量测定依据福林酚比色法原理，采用Kima等［16］的方法并加以改进，0.1 mL一定质量浓度的待测样品液置于4 mL，加入1 mL福林酚试剂，充分混合5 min后加入1 mL 7%（w/v）Na2CO3溶液振荡，混匀后于25℃黑暗条件下温育3 h，于波长760 nm处测得吸光值，实验重复三次，取平均值。根据以上相同步骤，以没食子酸的质量浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制没食子酸标准曲线。根据标准曲线求得样品中总酚的含量，结果以mg GAE/g DW表示，GAE （gallic acid equivalent）表示没食子酸等效物。

1.2.4总黄酮含量测定采用三氯化铝显色法测定总黄酮含量，将0.5 mL一定质量浓度的待测样品液置于2 mL离心管中，加入5%NaNO2溶液50 μL，放置5 min，再加入50 μL 10%的Al（NO3）3溶液，摇匀，继续放置5 min，再加入250 μL的NaOH（1 mol/L）溶液，放置20 min后于510 nm处测吸光值，实验重复三次，取其平均值。根据以上相同步骤，以芦丁的质量浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制芦丁的标准曲线。根据标准曲线求得样品中总黄酮的含量，结果以mg rutim/g DW表示。

1.3不结球白菜活性部位对H2O2诱导脂质过氧化的抑制作用

用前期实验中清除自由基活性最强的部位为研究对象，用含1%DMSO的无水乙醇分别配成0.1、0.5、1、2、3、5、10 mg/mL的溶液［17］，置于4℃冰箱冷藏备用。

1.3.1不结球白菜活性部位对H2O2诱导红细胞氧化的抑制作用小鼠于眼眶取血，抗凝后离心除去上层液体，红细胞继续用冰冷的生理盐水洗涤3次后配制成0.5%的细胞悬液。取悬液2 mL，分别加入0.2 mL不同浓度的样品，再加入50 mmol/L的H2O22 mL，充分混匀，于37℃恒温温育1 h后用生理盐水稀释成4倍的体积，4000 r/min离心10 min，410 nm处测定上清液的OD值，其中空白对照用等体积的蒸馏水代替样品［18］。

H2O2诱导红细胞氧化的抑制率（%）=（1-A/A0）×100式（2）

式中，A为样品的三次平均OD值，A0为空白对照的三次平均OD值。

1.3.2不结球白菜活性部位对H2O2诱导肝脏脂质过氧化的抑制作用小鼠颈椎脱臼致死，肝脏用预冷的生理盐水洗净，加生理盐水冰浴匀浆，制成10%的肝脏匀浆液。取匀浆液2 mL，分别加入1 mL不同浓度的样品液，充分混匀，于37℃恒温温浴20 min，加入100 mmol/L的H2O20.2 mL，充分混匀，于37℃恒温温浴30 min，再加入20%的三氯乙酸2 mL，加入0.7%的硫代巴比妥酸溶液2 mL，充分混匀后沸水浴20 min，再4000 r/min离心10 min，532 nm处测定各上清液的OD值（A），空白对照用等体积的蒸馏水代替样品，测定OD值（A0）［18］。按式（2）计算不结球白菜活性部位对H2O2诱导肝脏脂质过氧化的抑制率（%）。

1.4统计分析

实验数据均为3次重复实验结果的平均值，以平均数±标准偏差（SD）表示。采用SPSS 19.0软件进行双变量相关性分析和线性回归。抗氧化活性方法间的相关性以样品浓度为5 mg/mL的数据进行分析。

2　结果与分析

2.1不同极性部位清除DPPH自由基的能力

由图1和表1可知，不结球白菜不同极性部位对DPPH自由基均具有清除能力，且在一定浓度范围内（0.1～5 mg/mL）呈明显的量效关系，其中乙酸乙酯相对DPPH自由基的清除能力最强，EC50值为（0.64± 0.05）mg/mL，虽然显著高于对照VC的EC50值（0.012± 0.003）mg/mL，但当乙酸乙酯相浓度为5 mg/mL时，对DPPH自由基的清除率达到98.83%，与VC的清除率（99.01%）无显著性差异（p＞0.05）；正丁醇相的EC50值为（4.07±0.38）mg/mL，显著高于乙酸乙酯相EC50值（0.64±0.05）mg/mL；石油醚相与氯仿相清除DPPH自由基的能力相当，且活性较小，而水相对DPPH自由基几乎没有清除作用。

图1　不结球白菜不同极性部位清除DPPH·的能力Fig.1　DPPH radical scavenging activity of different extracts from non-heading Chinese cabbage

表1　不结球白菜不同极性部位清除四种自由基的EC50值Table 1　EC50of scavenging capacities for free radicals of different extracts from non-heading Chinese cabbage

2.2不同极性部位清除羟自由基的能力

由图2可知，不同极性部位表现出强弱不同的清除羟自由基能力，其所有部位清除羟自由基能力均小于对照VC，且具有显著性差异（p＜0.05）；由表1可知，乙酸乙酯相、氯仿相清除羟自由基能力的EC50值分别为（1.17±0.12）、（1.04±0.23）mg/mL，两者无显著性差异（p＞0.05），但都显著低于其他三个部位（p＜0.05）；结合图2与表1，不同极性部位清除羟自由基能力顺序为氯仿相＞乙酸乙酯相＞正丁醇相＞石油醚相＞水相。

图2　不结球白菜不同极性部位清除·OH的能力Fig.2　Hydroxyl radical scavenging activity of different extracts from non-heading Chinese cabbage

2.3不同极性部位清除超氧阴离子的能力

由图3和表1可知，不结球白菜乙酸乙酯相提取物对超氧阴离子具有较强的清除能力，当浓度大于2.5 mg/mL时，其对超氧阴离子的清除率高于对照VC；不结球白菜正丁醇相提取物在浓度小于2.5 mg/mL时，其对超氧阴离子的清除率小于对照VC（p＜0.05），但随着浓度的增大，清除率则大于对照VC（p＞0.05）；石油醚相和氯仿相提取物的清除能力均较弱，其EC50值均大于10 mg/mL，其中，水相对超氧阴离子自由基几乎没有清除作用。综合图3和表1清除能力顺序为乙酸乙酯相＞正丁醇相＞氯仿相＞石油醚相＞水相。

图3　不结球白菜不同极性部位清除O2-·的能力Fig.3　Superoxide radical scavenging activity of different extracts from non-heading Chinese cabbage

2.4不同极性部位清除ABTS+·的能力

由图4和表1可知，除水相外，其他四个极性部位对ABTS+·均具有一定的清除能力，且表现出明显的量效关系。低浓度时，乙酸乙酯相对ABTS+·的清除率低于对照VC，但随着浓度的增大，乙酸乙酯相的清除活性增强，当浓度大于2.5 mg/mL时，其对ABTS+·的清除能力与对照VC差异不显著（p＞0.05），当各极性部位浓度为5 mg/mL时，对ABTS+·的清除率分别为乙酸乙酯相98.76%，正丁醇相67.38%，氯仿相54.73%，石油醚相39.26%，水相6.4%。结合各极性部位的EC50值（表1），其清除ABTS+·的能力顺序为乙酸乙酯相＞正丁醇相＞氯仿相＞石油醚相＞水相。

图4　不结球白菜不同极性部位清除ABTS+·的能力Fig.4　ABTS radical scavenging activity of different extracts from non-heading Chinese cabbage

2.5不结球白菜不同极性部位总酚含量测定

没食子酸标准曲线方程为Y=4.9745X+0.0064 （R2=0.9972）。不结球白菜各极性部位的总酚含量见表2，可以看出，乙酸乙酯相总酚含量最多，为（151.32± 1.87）mg GAE/g DW，含量最少的为水相（2.77± 0.36）mg GAE/g DW的54.6倍；含量居中的分别为正丁醇相（39.78±0.91）mg GAE/g DW、氯仿相（34.76± 0.57）mg GAE/g DW、石油醚相（29.89±0.73）mg GAE/g DW。

2.6不结球白菜不同极性部位总黄酮含量测定

不同极性部位的总黄酮含量由芦丁标准曲线Y= 20.17X+0.065（R2=0.998）计算得来，如表2所示，各极性部位的总黄酮含量中乙酸乙酯相的含量最高，为（32.97±0.56）mg rutin/g DW，水相的含量最低，仅（1.58±0.17）mg rutin/g DW；含量居中的正丁醇相、氯仿相及石油醚相的总黄酮含量依次为（26.19±0.37）、（21.46±0.38）、（10.42±0.13）mg rutin/g DW。

表2　不结球白菜不同极性部位总酚和总黄酮的含量Table 2　Total phenolics and flavonoids content in different extracts from non-heading Chinese cabbage

2.7四种抗氧化活性方法间的相关性分析

目前还没有一种抗氧化体系可以全面的评价一种物质的抗氧化能力［17］，为了研究不结球白菜不同极性部位的抗氧化活性，选用了清除DPPH自由基、羟自由基、超氧阴离子、ABTS+·等四个指标进行综合评价。运用SPSS 19.0软件进行抗氧化活性方法间的相关性分析，结果见表3，ABTS+·清除法与DPPH·清除法的相关性最好，相关系数为0.963；DPPH·清除法与O2-·、·OH清除法，ABTS+·清除法与·OH、O2-·清除法的相关性均显著，相关系数分别为0.922、0.885、0.939、0.942；结合表3分析，不结球白菜活性提取物对清除DPPH·、·OH、O2-·与ABTS+·的能力基本一致。

表3　四种抗氧化活性方法的相关性分析Table 3　Correlation analysis of four methods of antioxidant activity

2.8总酚与总黄酮含量与抗氧化活性间的相关性分析

很多研究表明，植物源活性提取物的抗氧化活性与其总酚和总黄酮的含量具有很大关系［19］，分析不同极性部位的总酚和总黄酮含量是否与其抗氧化活性密切相关，预知不结球白菜提取物的抗氧化活性物质基础，可为进一步分离有效单体成分提供理论依据。

由表4可知，在不结球白菜各极性部位浓度为5 mg/mL时，其总黄酮含量与抗氧化能力间有较好的相关关系，其中总黄酮含量与ABTS+·清除能力的相关系数为0.979，极显著相关（p＜0.01），与·OH、O2-·、DPPH·清除能力也显著相关（p＜0.05）；因此可以认为不结球白菜各极性部位总黄酮的含量高低可直接反映出其抗氧化能力的大小。各极性部位总酚的含量与DPPH·的清除能力极显著相关（p＜0.01），相关系数为0.964，总酚含量与ABTS+·、O2-·的清除能力也显著相关（p＜0.05），因此各极性部位总酚的含量与抗氧化活性间也具有一定的相关性，提示总酚和总黄酮类化合物可能是不结球白菜抗氧化能力的物质基础。

表4　不结球白菜不同极性部位总酚和总黄酮含量与抗氧化活性的相关性分析Table 4　Correlation analysis between content of the total phenolics and flavonoids and the antioxidant activity of different extracts from non-heading Chinese cabbage

2.9不结球白菜乙酸乙酯相对H2O2诱导脂质过氧化的抑制作用

综合本实验中4种清除自由基抗氧化体系评价的不结球白菜5种不同极性部位的抗氧能力（图1～图4），乙酸乙酯相的抗氧化能力最强，因此选择乙酸乙酯相作为脂质过氧化抑制作用的研究对象。

2.9.1不结球白菜乙酸乙酯相对H2O2诱导红细胞氧化的抑制作用研究表明，过量的H2O2攻击红细胞，脂质过氧化作用增强，H2O2对膜内巯基进行攻击，破坏了膜的完整性，脂质膜受损，形成膜孔，内液外漏，细胞破坏，变形性下降，引起细胞损伤［17］。图5的实验结果表明，不结球白菜乙酸乙酯相对H2O2诱导红细胞氧化具有抑制作用，随着乙酸乙酯相浓度的增大，抑制作用越明显，浓度为5 mg/mL时的抑制率达到60.03%，与浓度10 mg/mL（62.11%）时的抑制率无显著性差异（p＞0.05）。由此可见，不结球白菜乙酸乙酯相在细胞水平上能够有效抑制氧化损伤。

图5　不结球白菜乙酸乙酯部对H2O2诱导红细胞氧化的抑制作用Fig.5　Inhibition effects of the ethyl acetate fraction on hemolysis of mice erythrocytes induced by H2O2

2.9.2不结球白菜乙酸乙酯相对H2O2诱导肝脏脂质过氧化的抑制作用H2O2会刺激肝脏发生膜脂过氧化作用，丙二醛（MDA）是其产物之一，通常利用它作为脂质过氧化指标，其产量的多少可以代表组织损害的程度［20］。图6的实验结果表明，在乙酸乙酯相为0.1～2 mg/mL的低浓度范围内，其对H2O2诱导小鼠肝脏脂质过氧化的抑制作用并无显著性差异（p＞0.05）；在浓度为2 mg/mL时，乙酸乙酯相对H2O2诱导肝脏脂质过氧化的抑制率为21.13%；但随着乙酸乙酯相浓度的增大，抑制作用迅速加强，当浓度为10 mg/mL时，抑制率达到了51.26%，约是浓度为0.1 mg/mL时的2.8倍。说明不结球白菜乙酸乙酯相能够有效保护H2O2诱导的肝脏脂质过氧化。

图6　不结球白菜乙酸乙酯部对H2O2诱导肝脏脂质过氧化的抑制作用Fig.6　Inhibition effects of the ethyl acetate fraction on lipid peroxidation of mice liver homogenate induced by H2O2

已有研究表明，活性氧自由基增加能引起肝脏脂质过氧化，进而诱发许多肝脏疾病，如肝硬化、急、慢性肝炎、内毒素性肝损害和肝肿瘤等［20］。本实验研究结果显示，不结球白菜乙酸乙酯相对H2O2诱导的红细胞氧化溶血及小鼠肝脏脂质过氧化均有较好的抑制作用，乙酸乙酯相对实验中四种自由基的清除效果最好，可推断其过氧化抑制机理可能为活性提取物与H2O2反应，阻止机体过氧化的发生及进行，但不结球白菜乙酸乙酯相的具体成分及作用机制尚不清楚，有待进一步的研究。

3　结论

不结球白菜不同极性部位的体外抗氧化研究结果表明，除水相外，其他四个极性部位对四种自由基均表现出一定的抗氧化活性，且DPPH自由基清除法、羟自由基清除法、超氧阴离子自由基清除法、ABTS+·清除法四种方法间的相关性基本一致，乙酸乙酯相的抗氧化活性最强，提示乙酸乙酯相是不结球白菜提取物抗氧化活性的主要部位。经抗氧化活性与总酚和总黄酮含量的相关性分析表明，不结球白菜各极性部位抗氧化活性与总酚和总黄酮含量密切相关，提示总酚和总黄酮类化合物可能是不结球白菜抗氧化能力的物质基础。不结球白菜乙酸乙酯相对H2O2诱导的红细胞氧化溶血及小鼠肝脏脂质过氧化均有较好的抑制作用，提示乙酸乙酯相可阻止机体过氧化的发生及进行，进一步的实验将对乙酸乙酯相的具体成分进行分析。本文可望为不结球白菜的进一步开发利用提供科学的理论依据，为深入挖掘不结球白菜资源在食品及医学等领域的应用提供参考。

［1］Circu ML，Aw TY.Reactive oxygen species，cellular redox systems，and apoptosis［J］.Free Radic Biol Med，2010，48：749-762.

［2］Shukla SI，Mehta A，Mehta P，et al.Antioxidant ability and total phenolic content of aqueous leaf extract of stevia rebaudiana bert［J］.Exp Toxicol Pathol，2012，64（7）：807-811.

［3］Saito M，Sakagami H，Fujisawa S.Cytotoxicity and apoptosis induction by butylated hydroxyanisole（BHA）and butylated hydroxytoluene（BHT）［J］.Anticancer research，2003，23（6C）：4693.

［4］郝慧楠，王倩，侯喜林，等.不结球白菜主要农艺性状的分离分析［J］.南京农业大学学报，2010，33（4）：8-12.

［5］Rojo E，Solano R，Sanchez-serrano J J.Interactions between signaling compounds involved in plant defense［J］.J Plant Growth Regul，2003，22：82-98.

［6］侯喜林.不结球白菜育种研究新进展［J］.南京农业大学学报，2003，26（4）：111-115.

［7］姜爱莉，孙丽芹，王文，等.四种植物天然抗氧化剂活性初探［J］.食品科学，2002，23（6）：35-38.

［8］Ma J F，Hou X L，Xiao D，et al.Cloning and characterization of the BcTuR3 gene related to resistance to Turnip Mosaic Virus （TuMV）from non-heading Chinese cabbage［J］.Plant Mol Biol Rep，2010，28：588-596.

［9］Liu TK，Li Y，Zhang CW，et al.Basic helix-loop-helix transcription factor BcbHLHpol functions as a positive regulator of pollen development in non-heading Chinese cabbage［J］.Funct Integr Genomics，2014，14：731-739.

［10］Jonathan DGJ，Jeffery LD.The plant immune system［J］. Nature，2006，444：323-329.

［11］Liu S，Sun J，Yu L，et al.Antioxidant activity and phenolic compounds of Holotrichia parallels Motschulsky extracts［J］.Food chemistry，2012，134（4）：1885-1891.

［12］Molyneux，Philip.The use of the stable free radical diphenylpicrylhydrazyl（DPPH）for estimating antioxidant activity ［J］.Songklanakarin J Sci Technol，2004，26（2）：211-219.

［13］Chaieb K，Hajlaoui H，Zmantar T，et al.The chemical composition and biological activity of clove essential oil，Eugenic caryophyllata（Syzigium aromaticum L.Myraceae）：a short review ［J］.Phytotherapy Research，2007，21（6）：501-506.

［14］Halliwell B，Gutteridge JM.Role of free radicals and catalytic metal ions in human disease：an overview［J］.Methods Enzymol，1990，186：1-85.

［15］Saiga A，Tanabe S，Nishimura T.Antioxidant activity of peptides obtained from porcine myofibrillar proteins by protease treatment［J］.Journal of Agricultural and Food Chemistry，2003，51：3661-3667.

［16］Kima HJ，Lee KW，Kima MS，et al.Piceatannol attenuates hydrogen-peroxide-and peroxynitrite-induced apoptosis of PC12 cells by blocking down-regulation of Bcl-XL and activation of JNK［J］.Jurnal of Nutritional Biochemistry，2008，19：459-466.

［17］Silva JK，Cazarin CBB，Colomeu TC，et al.Antioxidant activity of aqueous extract of passion fruit（Passiflora edulis）leaves：In vitro and in vivo study［J］.Food Res Int，2013，53（2）：882-890.

［18］陈留勇.桃水溶性多糖的抗肿瘤作用及清除自由基提高免疫活性的研究［J］.食品科学，2004，25（1）：167.

［19］Kaijin Wang，Chongren Yang，Yingjun Zhang.Phenolic antioxidants from Chinense toon［J］.Food Chem，2007，101：366-371.

［20］李人峰，贾冬英，杜雪，等.马齿苋酚类提取物的抗氧化作用研究［J］.中国油脂，2010，35（12）：41-43.

Antioxidant activity-guided fractionation of non-heading Chinese cabbage

MA Jing-fan1，2，LIU Xi-ming3，CHEN Xiao-hong1，2
（1.School of Life Sciences，Longyan University，Longyan 364012，China；2.Fujian Provincial Key Laboratory of Preventive Veterinary Medicine and Veterinary Biotechnology，Longyan 364012，China；3.School of Art Design，Longyan University，Longyan 364012，China）

This study was carried out to explore the antioxidant activities of five extracts obtained from nonheading Chinese cabbage by using different polarity solvents，including petroleum ether，chloroform，ethyl acetate，n-butyl alcohol and water.The antioxidant activities of the five fractions were evaluated by the scavenging power of four free radicals，namely DPPH·，·OH，O2-·and ABTS+·.The relationship between the antioxidant activity and the content of total phenolics and total flavonoids were also analysed.The results showed that four fractions except water fraction had great antioxidant activity and the content of total phenolics and total flavonoids had a highly significant correlation with the antioxidant activity.The ethyl acetate fraction was the most effective fraction.The EC50values based on DPPH·，·OH，O2-·and ABTS+·were（0.64±0.05），（1.17±0.12），（1.02±0.15）mg/mL and（0.78±0.07）mg/mL，respectively.The highest contents of total phenolics and total flavonoids were in the ethyl acetate fraction and their contents were（151.32±1.87）mg gallic acid equivalent/g DW and（32.97±0.56）mg rutin equivalent/g DW，respectively.Effect of the ethyl acetate fraction on anti-lipid peroxidation was investigated.The inhibition of the ethyl acetate fraction on hemolysis of mice erythrocytes and lipid perexidation of mice liver homogenate induced by H2O2were 62.11%and 51.26%when the ethyl acetate fraction concentration was 10 mg/mL.The ethyl acetate fraction of non-heading Chinese cabbage，a strong ability to act as antioxidant，might be considered as a natural source of active compounds.

non-heading Chinese cabbage；antioxidant activity；total phenolics；total flavonoids；lipid peroxidation

TS201.1

A

1002-0306（2016）04-0132-06

10.13386/j.issn1002-0306.2016.04.017

2015－06－12

马景蕃（1978-），女，博士，研究方向：天然产物化学，E-mail：m_jingfan@163.com。

福建省科技厅重点项目（2012N0020）；福建省教育厅A类项目（JA12320）；国家自然科学基金培育项目（LG2014014）。