大黄对慢性便秘模型大鼠结肠血管活性肠肽水平及肠动力影响研究

杜丽娟，占煜，吴至久，孔鹏飞，赵兵，陈泰宇，唐学贵

(1.川北医学院附属医院肛肠科，四川 南充　637000;2.成都中医药大学，四川 成都　610072; 3.成都市第一人民医院，四川 成都　610071)



大黄对慢性便秘模型大鼠结肠血管活性肠肽水平及肠动力影响研究

杜丽娟1,2，占煜3，吴至久1，孔鹏飞1，赵兵1，陈泰宇1，唐学贵1

(1.川北医学院附属医院肛肠科，四川 南充637000;2.成都中医药大学，四川 成都610072; 3.成都市第一人民医院，四川 成都610071)

目的：采用洛哌丁胺灌胃建立便秘大鼠模型，观察大黄对便秘模型大鼠血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide，VIP)水平的影响。方法：健康 Wistar大鼠18只，随机分为3组，空白组、模型组、大黄组。模型组及大黄组采用配制好的含洛哌丁胺(1.5 mg·kg-1·d-1)混悬液2 mL灌胃7 d。模型建立后，大黄组以大黄(5 mg/kg)混悬液2 mL灌胃。检测结肠传输，ELISA检测AQP3含量。结果：(1)造模后大鼠的体重增加、结肠存留粪便增多、粪便含水量降低、肠道传输时间延长(P<0.05)；(2)大黄干预组大鼠大便量、粪便含水量增加(P<0.05)；(3)大黄干预便秘大鼠，其结肠传输时间缩短，VIP水平明显低于模型组(P<0.05)。结论：大黄可加快肠道传输，可能与降低大鼠结肠中VIP水平，促进肠蠕动有关。

大黄；血管活性肠肽；便秘

【Abstract】Objective：To observe the effect of Rhubarb on the vasoactive intestinal peptide (VIP)in colon tissues in the Lopersmide-induced constipated rats.Methods：18 healthy Wistar rats were randomly divided into 3 groups,the control group,model group and rhubarb group.Model group and rhubarb group were prepared with the fittest dosage of Lopersmide(1.5 mg·kg-1·d-1)mixed suspension 2 mL lavage 7 d.After model establishment,rhubarb group with rhubarb (5 mg/kg)mixed suspension 2 mL lavage.Detection of colonic transmission,ELISA detection of AQP3 content.Results：(1)After building the model,the rats’ weight gain,the colon feces increase,waste water content reduce and the transmission time of the intestinal tract prolonged(P<0.05);2)The feces and the waste water content of rats in rhubarb group were increased obviously(P<0.05).(3)Rhubarb intervention in rats with constipation,the colonic transit time was shortened,VIP level was significantly lower than the model group (P<0.05).Conclusion：Rhubarb can accelerate intestinal transmission,may be related to reducing the level of VIP in the colon of rats,and promoting the intestinal peristalsis.

【Key words】Rhubarb;Vasoavtive intestinal peptide;Constipation

慢性便秘(chronic constipation，CC)是最常见的胃肠道运动障碍性疾病。临床上表现为大便次数减少，排便间隔时间延长、便意消失及排便困难为主要症状，但其确切的病因病机尚未完全明确。目前一系列研究[1-3]表明，一些胃肠激素如血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide，VIP)、生长抑素、胃泌素等分泌异常与其发病密切相关，其中VIP为抑制性神经递质，可舒张平滑肌，抑制肠敏感性。大黄作为治疗便秘的常用药物，具有泻下通便的作用。为了进一步探讨大黄药物作用机制，本研究采用洛哌丁胺灌胃制备便秘大鼠模型，使用中药大黄进行干预，通过观察大鼠肠动力及结肠组织中VIP含量的变化，为大黄对调节胃肠运动和水液调节提供理论基础。

1　材料与方法

1.1材料

1.1.1动物清洁级成年雄性Wistar大鼠18只，体重(230±20)g，由川北医学院动物实验中心提供，动物合格证号：SCXK(川)2013-18。动物在川北医学院SPF级实验动物中心饲养，饲养条件为II级，光照周期12 h/12 h，室温20～22 ℃，相对湿度45%～60%，自由进食、饮水。

1.1.2药物及试剂生大黄50 g，购于川北医学院附属医院中药房，经药学院鉴定为正品掌叶大黄。盐酸洛哌丁胺胶囊(西安杨森制药公司，批号140709510)，ELISA试剂盒(武汉华美公司，CSB-E08355r)。

1.1.3仪器酶标仪(Thermo Fisher Scientific公司)，5430R低温高速离心机(Eppendorf公司)。

1.2方法

1.2.1动物分组大鼠18只，随机分为空白组、模型组、大黄组，每组6只。

1.2.2便秘大鼠模型建立便秘大鼠模型建立参考黄小丽等[4]的造模方法进行改进，以洛哌丁胺(1.5 mg·kg-1·d-1)与生理盐水配置成2 mL溶液给予大鼠灌胃，2次/d，共7 d。大鼠出现精神状态差，活动量减少，体重增加，大便粒型小、干硬等表现时，为模型复制成功。

1.2.3给药方法大黄组在造模成功后给予生大黄粉(5 mg/kg)混悬液2 mL灌胃1次，空白组和模型组正常饲养。

1.2.4指标检测(1)一般行为学观察：观察动物一般行为表现，包括活动量、皮毛光泽度、体质量及排便情况；(2)炭末推进实验及粪便含水量测定：采用活性炭灌胃法观察肠道传输功能。每组大鼠禁食 40 min后，经口灌入 100 g/L活性炭混悬液 2 mL，等待40 min后立即处死大鼠，取结肠内粪便称其湿重，粪便 37 ℃ 恒温干燥箱，称其干重，计算粪便含水率。粪便含水率 = (湿重-干重)/湿重×100%。摘除从幽门到直肠末端的全部肠道。将肠管拉直后测量肠管的长度，即幽门至肛门的长度。松弛状态下测量肠道全长，以及活性炭悬液前端(肠内容物呈漆黑处)到幽门的距离与肠道全长的百分比；(3)ELISA法检测结肠组织中VIP水平：操作严格按说明书进行，每样本均作复孔检测,取均值为最终结果,以试剂盒各自标准品绘制标准曲线,依曲线计算各样本中VIP含量。

1.3统计学分析

2　结果

2.1各组大鼠实验期间一般情况比较

造模期间，模型组有1只大鼠灌胃后发生呛咳死亡。造模前，各组大鼠皮毛光泽色白，背毛光泽，反应灵敏，进食、饮水正常，大便正常；造模后动物逐渐出现饮食减少，体重增加，毛色干枯，反应迟钝，大便颗粒干燥。自大黄治疗用药起，大便逐渐正常，大便量、粪便含水量增加。

2.2各组大鼠炭末推进率比较

3组间大鼠炭末推进率总的说来有差异(F=10.186，P=0.002)。模型组大鼠炭末推进率低于空白组大鼠，差异有统计学意义(P<0.05)；大黄组炭末推进率高于模型组大鼠，差异有统计学意义(P<0.05)(表1)。

表1　各组炭末推进率比较±s)

*P<0.05，与空白组比较；﹟P<0.05，与模型组比较。

2.3各组大鼠结肠组织VIP含量结果

3组间大鼠结肠组织中VIP含量总的来说有差异(F=11.481，P=0.001)。模型组大鼠VIP含量低于空白组，但差异无统计学意义(P>0.05)，提示洛哌丁胺造模7 d，大鼠近端结肠VIP水平无显著变化；大黄组大鼠结肠VIP水平与模型组比较明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)(表2)。

表2　各组VIP表达含量比较

*P<0.05，与模型组比较。

3　讨论

便秘是常见的胃肠道症状，表现为排便次数减少粪便干硬和(或)困难，病程在 6个月以上称为CC。CC的病因包括功能性、器质疾病和药物等。本实验通过洛哌丁胺给予大鼠灌胃复制便秘大鼠模型。在第3天有近半出现粪粒缩短、干硬，其余亦少见稀便，至第7天上述变化更为明显，结合大鼠症状、体质量变化、结肠粪便量以及粪便含水量、肠传输减慢等可初步判定洛哌丁胺诱导便秘的复制成功。其建立的大鼠便秘模型的复制周期较短，症状持续时间较长，能够较好地模拟人类CC的病理生理特点。

VIP是由28个氨基酸组成的直链肽，属于胰高血糖素-胰泌素家族，因具有血管活性作用而命名，其广泛分布于中枢神经系统、心血管、胰腺及全部胃肠道中，VIP浓度在胃肠道中以十二指肠和结肠最高[5-8]。VIP是参与调节肠蠕动的重要肠神经递质，具有抑制胃肠运动，延长胃排空时间，抑制肠道环形肌收缩，对肠壁内神经丛的抗应激及稳定作用，促进肠分泌和抑制肠吸收等作用[9-12]。国内使用传统泻下中药(如大黄、番泻叶等)治疗CC患者，面临诸多质疑，认为长期使用会加重便秘，为发展传统泻下中药，使其能够更好地应用于临床，故本研究采用大黄进行干预。结果发现当给予便秘大鼠灌服大黄5 h，粪便中含水量升至70%以上，较模型组明显升高。同时，大黄可下调结肠VIP水平，与肠传输功能变化具有较好一致性，提示VIP与大黄促进肠蠕动有关。

综上所述，大黄治疗大鼠便秘的作用机制可能是：通过降低抑制性肠神经递质VIP含量，增加胃肠黏膜分泌活动，促进肠蠕动，加快肠道传输，从而达到治疗便秘的目的。

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(学术编辑：任明扬)

Effect of rhubarb on the vasoactive intestinal peptide and motility in colon tissues of rats with chronic constipation

DU Li-juan1,2，ZHAN Yu3，WU Zhi-jiu1，KONG Peng-fei1，ZHAO Bin1，CHEN Tai-yu1，TANG Xue-gui1

(1.Department of Anorectal,Affiliated Hospital of North Sichuan Medical College，Nanchong 637000;2.Chengdu University of Traditional Chinese Medicine,Chengdu 610072;3.Chengdu First people’s Hospital,Chengdu 610071,Sichuan,China)

10.3969/j.issn.1005-3697.2016.04.06论著

国家自然科学基金项目(81273663)；四川省教育厅青年基金项目(11ZB184)；川北医学院科研发展计划项目(CBY12-A-ZP02)

2016-04-06

杜丽娟(1981-)，女，博士研究生。E-mail: 3429287@qq.com

占煜，E-mail: 277546066@qq.com

网络出版时间：2016-8-217∶48网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1254.R.20160802.1748.010.html

1005-3697(2016)04-0470-03

R256.25

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