血清转化生长因子β1、血管内皮生长因子在布-加综合征患者中的表达研究

丁晓帆，张端强，陆召军，石　月，祖茂衡，徐　浩，高修银

血清转化生长因子β1、血管内皮生长因子在布-加综合征患者中的表达研究

丁晓帆1，张端强1，陆召军1，石月1，祖茂衡2，徐浩2，高修银1

目的 研究血清转化生长因子β1（TGF-β1）、血管内皮生长因子（VEGF）在布-加综合征（BCS）患者中的表达，探讨其在BCS病情进展中的作用。方法 选取101例BCS患者作为实验组，选取健康体检者125例作为对照组。采用ELISA法检测两组人群血清TGF-β1、VEGF表达水平。结果实验组血清TGF-β1、VEGF的含量高于对照组血清TGF-β1、VEGF的含量，差异均有统计学意义（P＜0.001）。实验组中单纯BCS患者、BCS合并淤血性肝硬化患者、BCS合并肝癌患者血清TGF-β1、VEGF表达水平比较，差异均有统计学意义（P＜0.001），其中，BCS合并肝癌患者血清TGF-β1、VEGF水平高于BCS合并淤血性肝硬化患者，BCS合并淤血性肝硬化患者血清TGF-β1、VEGF水平高于单纯BCS患者，差异均有统计学意义（P＜0.05）。BCS患者血清TGF-β1与VEGF呈正相关性（r=0.30，P=0.01）。结论 随着BCS患者病情的进展，患者血清TGF-β1、VEGF表达水平增高，两因子的协同作用可能会加快病情的发展进程。

布-加综合征；转化生长因子β1；血管内皮生长因子；肝纤维化

网络出版时间：2016-5-9 15：43：11 网络出版地址：http：//www.cnki.net/kcms/detail/34.1065.R.20160509.1543.052.html

在我国，布-加综合征（Budd-Chiari syndrome，BCS）表现为一种慢性疾病［1］，常由下腔静脉和（或）肝静脉阻塞导致肝纤维化，进一步形成淤血性肝硬化，最终发展为肝癌［2］。近年来，在对肝脏疾病的研究中，细胞因子的作用越来越受关注。研究［3］表明，血清转化生长因子β1（transforming growth factor beta1，TGF-β1）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是与肝脏纤维化发生、发展密切相关的细胞因子。但以往多应用于慢性肝炎导致的肝纤维化、肝硬化的研究，较少应用于BCS的研究。该研究通过对血清TGF-β1、VEGF在BCS患者中表达的检测，探讨其在BCS病情进展中的作用。

1　材料与方法

1.1病例资料 实验组为2013年11月～2014年11月徐州医学院附属医院介入放射科收治的101例BCS患者，所选患者经下腔静脉和（或）肝静脉造影确诊，排除标准：病毒性肝炎、酒精性肝炎及其他肝病患者或其他肝纤维化病变者；肝癌以外的其他恶性肿瘤患者。对照组为同期该院体检中心体检的健康者125例，入选标准：肝、肾功能等血清学指标正常，无酗酒史，无病毒性肝炎、免疫性肝炎等相关疾病。排除标准：合并肝纤维化相关疾病者；合并血栓、冠心病、糖尿病、肾病综合征及肿瘤者。

1.2试剂与方法 实验组患者在介入手术前抽取下腔静脉血液5 ml，置于5 ml分离胶-促凝管中，室温静置30 min，在4℃条件下以3 000 r/min离心15 min，将上层血清装入1.5 ml EP管中，置于-80℃冰箱中冷藏保存。冷藏过程中避免反复取出血清样本，反复冻融。采集符合入选条件的健康体检者肘静脉血5 ml于5 ml分离胶-促凝管中，血清分离方法同实验组。血清制备后，3个月内采用ELISA法检测TGF-β1、VEGF含量，实验过程严格按照试剂盒说明书操作。

1.3统计学处理 采用SPSS 16.0软件进行分析，呈正态分布的计量资料以±s表示。进行方差齐性检验，若方差齐，则两组间指标比较采用独立样本t检验，否则采用Satterthwaite近似t检验；多组间比较方差齐时采用单因素方差分析，组间两两比较采用SNK-q检验，否则采用Welth法，组间两两比较采用Dunnet′s T3检验；相关性分析采用Pearson直线相关。

2　结果

2.1一般资料比较 101例BCS患者，男51例，女50例；年龄26～71（46.6±10.9）岁，其中，单纯BCS患者53例，BCS合并淤血性肝硬化39例，BCS合并肝癌9例。125例正常对照者中，男67例，女58例；年龄28～77（46.4±8.8）岁。两组在性别（Χ2= 0.216，P=0.642）、年龄（t=0.153，P=0.879）上具有可比性，差异无统计学意义。

2.2ELISA标准曲线方程 TGF-β1、VEGF两种因子ELISA标准曲线方程的r2分别为0.997 1、0.996 1（r2＞0.99），提示各标准品浓度与吸光度值呈高度相关性，试剂盒良好，符合实验要求。

2.3两组TGF-β1、VEGF表达水平比较 实验组血清TGF-β1、VEGF含量均高于对照组，两组差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1　实验组和对照组血清TGF-β1、VEGF表达水平比较（ng/L，±s）

表1　实验组和对照组血清TGF-β1、VEGF表达水平比较（ng/L，±s）

项目实验组（n=101）对照组（n=125）t值P值TGF-β1618.8±105.1471.6±61.813.1＜0.001 VEGF981.4±151.5684.1±71.819.4＜0.001

2.4实验组中单纯BCS患者、BCS合并淤血性肝硬化患者、BCS合并肝癌患者血清TGF-β1、VEGF表达水平比较 血清TGF-β1、VEGF在单纯BCS患者、BCS合并淤血性肝硬化患者、BCS合并肝癌患者中比较，差异均有统计学意义（P＜0.001）。其中，BCS合并肝癌患者血清TGF-β1、VEGF水平均高于BCS合并淤血性肝硬化患者，BCS合并淤血性肝硬化患者血清TGF-β1、VEGF水平均高于单纯BCS患者，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

2.5相关性分析 对实验组血清TGF-β1、VEGF水平进行相关性分析得出：TGF-β1和VEGF呈正相关性（r=0.30，P=0.01）。

3　讨论

BCS患者因下腔静脉、肝静脉以及副肝静脉的不同程度阻塞，导致其肝脏呈不同程度的淤血状态。长期的淤血状态引起肝脏局部发生慢性缺血低氧，进而导致肝细胞变性坏死，纤维组织和再生结节代替坏死肝细胞，逐渐发展为肝纤维化和淤血性肝硬化，最终导致肝癌的发生［4-5］。研究［6］表明BCS是发生淤血性肝硬化和肝癌的独立危险因素，而且大多数的BCS患者并没有病毒性肝炎、酒精性肝炎、中毒等其他直接损伤肝脏的因素存在［7］，因此肝脏的长期淤血、肝细胞的低氧状态是BCS发生淤血性肝硬化甚至肝癌的重要危险因素。TGF-β1和VEGF作为肝纤维化发展至肝硬化乃至肝癌的重要细胞因子，目前较少用于BCS导致的淤血性肝硬化及肝癌研究中，因此，本研究主要分析BCS患者不同病程阶段的血清TGF-β1和VEGF表达水平，探讨其在BCS病情发展中的作用。

李晓虹等［3］对乙肝患者、乙肝导致的肝纤维化及肝硬化患者进行血清TGF-β1水平的研究，结果显示：随着病情的发展，患者血清TGF-β1水平逐渐升高。也有学者实验［8］显示，增加TGF-β1的表达可显著加快肝纤维化的发展进展，相反，若抑制TGF-β1的合成或阻断其信号通路可预防并减少各种肝纤维化模型的形成。本研究结果显示：BCS患者随着单纯BCS、淤血性肝硬化至肝癌的发展，血清TGF-β1水平逐渐升高，且高于正常人群。分析其原因可能是，因下腔静脉和肝静脉的阻塞，BCS患者的肝脏表现为慢性缺血低氧，肝细胞发生持续性损伤和炎症反应，进一步导致肝星状细胞（hepatic stellate cell，HSC）、库普弗（Kupfffer）细胞产生TGF-β1。随着BCS患者病情进一步加重，肝组织呈现为更严重的缺血低氧，促使存活的肝细胞和HSC合成分泌更多的TGF-β1，HSC的持续活化，使细胞外基质不断沉积，最终推进BCS病情发展。

VEGF在血管再生中发挥着重要的作用，能够特异性地促进血管内皮细胞分裂、增殖，增加血管的通透性，是目前为止最受重视的血管生成因子之一［9］。有关于VEGF与肝纤维化发生、发展的相关报道很多，随着肝纤维、肝硬化、肝癌病程的不断发展，VEGF的表达逐渐增强，这点在医学界已达成共识。本研究结果显示：BCS患者随着淤血性肝硬化乃至肝癌的不断发展，血清VEGF水平逐渐升高，且高于正常人群，与以往研究［10-11］结果一致，分析其原因可能是：BCS患者肝静脉和（或）下腔静脉不同程度的阻塞，使肝静脉回流压力逐渐增大，导致肝脏呈现淤血状态并出现缺血低氧刺激活化HSC，进而通过自分泌和旁分泌的途径产生细胞因子，从而引起VEGF表达增高。至淤血性肝硬化阶段，肝组织缺血低氧进一步加重，肝细胞坏死进一步增多，释放更多的炎性介质，刺激HSC合成分泌更多的VEGF。这些结果表明，VEGF参与BCS患者淤血性肝硬化甚至肝癌的发生，提示从BCS患者肝脏纤维结缔组织增生到肿瘤的形成过程，血管形成起着推动作用。

表2　单纯BCS患者、BCS合并淤血性肝硬化患者、BCS合并肝癌患者血清TGF-β1、VEGF表达水平比较（ng/L，±s）

表2　单纯BCS患者、BCS合并淤血性肝硬化患者、BCS合并肝癌患者血清TGF-β1、VEGF表达水平比较（ng/L，±s）

与单纯BCS比较：*P＜0.05，与BCS合并淤血性肝硬化比较：#P＜0.05

项目单纯BCS（n=53）BCS合并淤血性肝硬化（n=39）BCS合并肝癌（n=9）F值P值TGF-β1585.7±118.3636.4±67.6*737.3±27.2*#10.6＜0.001 VEGF898.1±121.11031.7±121.6*1224.5±71.9*#15.7＜0.001

本研究的相关性分析得出：BCS患者血清TGF-β1和VEGF呈正相关性，这与李晓虹等［3］的研究结果一致。李东等［12］也指出：肝纤维化患者血清VEGF与TGF-β1水平呈正相关性，两者联合检测可作为诊断及判断病情的血清学指标。结合BCS血清TGF-β1和VEGF随着病情进展逐渐升高，可以推断这两种因子的协同作用可能加快了BCS病情的发展。

综上所述，随着BCS患者病情的进展，患者血清TGF-β1、VEGF表达水平增高，两因子的协同作用可能会加快病情的发展进程。因此，在临床诊疗中，及早发现BCS患者血清TGF-β1、VEGF表达异常，在进行介入治疗的同时，应尽早结合抗肝纤维化治疗，及时解除肝脏的淤血性损伤，对延缓患者肝脏的损伤，减少BCS患者淤血性肝硬化甚至肝癌的发生有重要意义。

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Analysis of the expression of transforming growth factor-β1 and vascular endothelial growth factor in Budd-Chiari syndrome

Ding Xiaofan，Zhang Duanqiang，Lu Zhaojun，et al
（School of Public Health，Xuzhou Medical College，Xuzhou 221004）

Objective To study the expression of transforming growth factor-β1（TGF-β1）and vascular endothelial growth factor（VEGF）in Budd-Chiari syndrome，and to explore whether serum TGF-β1 and VEGF play important roles in the progression of Budd-Chiari syndrome.Methods There were 101 cases of Budd-Chiari syndrome in the experimental group.During the same period，125 controls were recruited from the medical examination center.The serum concentrations of TGF-β1 and VEGF were detected by ELISA.Results The serum concentrations of TGF-β1 and VEGF in the experimental group were higher than those in the control group（P＜0.001）.In the BCS group，the serum concentrations of TGF-β1 and VEGF were different significantly between pure BCS patients，BCS with stasis cirrhosis patients and BCS with hepatic carcinoma patients（P＜0.001）.Among them，the serum concentrations of the two factors of BCS with hepatic carcinoma patients were higher than BCS with stasis cirrhosis patients，and the latter was higher than the pure BCS patients（P＜0.05）.The serum TGF-β1 and VEGF were positive correlated in the BCS group（r=0.30，P=0.01）.Conclusion The serum concentrations of TGF-β1 and VEGF increase with the progression of BCS，and the synergistic effect between TGF-β1 and VEGF may accelerate the development of BCS.

Budd-Chiari syndrome；transforming growth factor β1；vascular endothelial growth factor；liver fibrosis

R 575

A

1000-1492（2016）06-0877-04

2016-03-04接收

国家自然科学基金资助项目（编号：81172604）

1徐州医学院公共卫生学院，徐州 2210042徐州医学院附属医院介入放射科，徐州 221002

丁晓帆，女，硕士研究生；高修银，男，教授，硕士生导师，责任作者，E-mail：xzgxy888 @163.com