慢性鼻-鼻窦炎患者潘蛋白和黏蛋白5AC的表达特点

2016-09-08杨红丽闫娟薛媛安丽冯蓉

河北医药 2016年17期

杨红丽　闫娟　薛媛　安丽　冯蓉

·论著·

杨红丽闫娟薛媛安丽冯蓉

目的探讨潘蛋白(Pendrin)和黏蛋白5AC(MUC5AC)在慢性鼻-鼻窦炎患者鼻窦黏膜中的表达特点。方法选取40例慢性鼻-鼻窦炎患者作为观察组，另选取同期进行健康体检的40例正常人作为对照组，采集2组的鼻窦黏膜组织，检测MUC5AC、Pendrin表达水平。结果观察组患者的黏液蛋白、Pendrin、MUC5AC阳性表达率、表达水平均显著高于对照组(P<0.05)。Pendrin与MUC5AC存在显著正相关(r=0.598，P<0.05)。结论慢性鼻-鼻窦炎患者鼻窦黏膜中的MUC5AC、Pendrin均呈高表达，且Pendrin可促使MUC5AC表达升高，诱导黏液分泌。

黏蛋白5AC；潘蛋白；鼻-鼻窦炎慢性；鼻窦黏膜

目前，医学界对慢性鼻-鼻窦炎发病机制的认识尚不完全。近期有研究显示Pendrin(潘蛋白)在气道疾病的发生及发展中发挥着重要作用，Pendrin的过度表达可增强气道高反应性，增加黏液渗出，促使MUC5AC(黏蛋白5AC)水平升高[1]。但是关于Pendrin、MUC5AC在CRS发生、发展中的作用研究较为鲜见，本次研究旨在明确Pendrin、MUC5AC在慢性鼻-鼻窦炎鼻窦黏膜中的表达特点，报告如下。

1　资料与方法

1.1一般资料选取我院2014年10月至2015年9月接诊的40例慢性鼻-鼻窦炎患者为观察组。观察组：男18例，女22例;年龄14～51岁，平均年龄(35.2±4.8)岁；伴息肉16例，不伴息肉24例。本组患者均明确诊断为慢性鼻-鼻窦炎，无支气管哮喘、过敏性鼻炎等变态反应性病史，近1个月内未应用过类固醇激素药物。另选取同期在我院进行健康体检的40例正常人作为对照组，男21例，女19例;年龄17～55岁，平均年龄(37.9±3.8)岁。2组性别比、年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1标本采集与处理:采集2组研究对象上颌窦窦口黏膜标本，获取标本后，每例研究对象的标本均等分为3份，其中2份保存在-80℃的冰箱中待检，另1份使用多聚甲醛溶液(4%)进行固定后，保存在4℃的冰箱中待检。

1.2.2仪器与试剂:仪器：包埋机、摊烤片机、脱水机均由湖北亚光医用电子技术公司提供；切片机由Leica公司提供；OLYMPUS FSX100型光学显微镜；干燥箱由上海精宏实验设备公司提供；微量移液器、PL602-S 电子天平、离心机、水浴锅、电泳仪、酶标仪等。试剂：山羊抗人Pendrin抗体；兔抗人MUC5AC抗体；DAB显色剂；Mayer苏木素；盐酸乙醇；高碘酸等。

1.2.3检测方法:①HE染色：梯度乙醇脱水、蜡块包埋，自然冷却后使用切片机进行连续切片(厚度4 μm)，脱蜡、水化，Mayer苏木精染色8 min，洗片，盐酸浸3 s，清洗4次，碳酸吕浸2 s，冲洗15 min，伊红染色1 min。乙醇脱水，二甲苯透明，中性树脂封片。在光学显微镜下观察病理形态学变化。②PAS染色：梯度乙醇脱水、蜡块包埋，自然冷却后使用切片机进行连续切片(厚度4 μm)，脱蜡、水化。PAS染色后脱水、封固，在光学显微镜下观察组织的糖原染色反应。③免疫组化染色：梯度乙醇脱水、蜡块包埋、切片、脱蜡、水化后，进行组织化学染色，然后脱水、封固。最后在光学显微镜下观察组织的免疫反应情况。④实时荧光定量PCR检测：提取标本中的总RNA，测定RNA纯度、浓度。检索人类编码MUC5AC、Pendrin基因的mRNA序列，利用软件设计MUC5AC、Pendrin基因的mRNA引物，RNA逆转录，荧光定量PCR扩增，最后根据各目的基因扩增的Ct阈值，计算出MUC5AC和Pendrin基因mRNA的表达量。

1.3染色结果判断选取5个高倍镜视野，计算染色强度及免疫反应阳性细胞占比，最终的免疫反应阳性细胞占比取5个高倍镜视野下的平均值。根据免疫反应阳性细胞占比的不同，计0分(不足5%)，1分(5～25%)，2分(26%～50%)，3分(51%～75%)，4份(>75%)。根据着色强度的不同计0分(轻度着色)，1分(轻度着色)，2分(中度着色)，3分(强度着色)。根据免疫反应阳性细胞占比评分与着色强度评分之和进行最终结果判定：评分≤2分判定为阴性(-)，评分3分判定为弱阳性(+)，评分4～5分判定为中等强度阳性(++)，评分6～7分判定为强阳性(+++)。阳性=弱阳性+中等强度阳性+强阳性。

2　结果

2.1HE染色结果光学显微镜下，可见对照组的鼻窦黏膜细胞结构完整，黏膜细胞以假复层纤毛柱状上皮居多，纤毛的长短、粗细均匀，排列整齐。观察组可见黏膜水肿或增厚，杯状细胞化生、增生明显，上皮纤毛不完整或鳞状上皮化生，腺体增生或水肿，炎性细胞较多。见图1、2。

图1　正常鼻窦黏膜(HE×400)

图2　慢性鼻-鼻窦炎鼻窦黏膜(HE×400)

2.22组黏液蛋白阳性表达情况经PAS染色，观察组标本中的黏液蛋白在腺体细胞和上皮杯状细胞有明显的紫红色着色，对照组着色较浅或无着色。观察组患者黏液蛋白阳性表达率为82.5%，对照组为20.0%，组间比较差异有统计学意义 (P<0.05)。见表1。

表1　黏液蛋白阳性表达情况　n=40，例

2.32组Pendrin阳性表达情况免疫组化染色显示，观察组的Pendrin主要由上皮细胞顶膜表达，腺体表达次之，呈明显的黄棕色着色，对照组着色较浅或无着色。观察组患者的Pendrin阳性表达率为72.5%，显著高于对照组的10.0%，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2　Pendrin阳性表达情况　n=40，例

2.42组MUC5AC阳性表达情况免疫组化染色显示，MUC5AC主要由假复层纤毛柱状上皮细胞和杯状细胞表达，腺体细胞可有少量表达，观察组呈明显的棕黄色着色，对照组无着色或呈浅着色。观察组MUC5AC阳性表达率显著高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3　2组MUC5AC阳性表达情况　n=40，例

2.52组Pendrin、MUC5AC表达水平比较实时荧光定量PCR检测显示观察组的Pendrin、MUC5AC表达水平均显著高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表4。

组别PendrinMUC5AC对照组1.002±0.1581.003±0.087观察组1.692±0.1161.792±0.726t值22.2646.825P值<0.05<0.05

2.6Pendrin与MUC5AC的相关性分析应用Pearson法对Pendrin和MUC5AC表达量进行相关性分析，二者存在显著正相关(r=0.598，P<0.05)。

3　讨论

慢性鼻-鼻窦炎是临床较为常见的一种耳鼻喉疾病，本病可在任何年龄人群中发病，并且年龄越大发病率越高，有调查显示成人中约有4.2%会发生慢性鼻-鼻窦炎。慢性鼻-鼻窦炎的临床表现主要为脓涕、鼻塞等，治疗效果不佳者还常会发展为伴息肉型慢性鼻-鼻窦炎，随着息肉的生长，进一步使症状加剧，给患者的日常生活造成诸多不便，影响患者的生活质量[2,3]。

慢性鼻-鼻窦炎的一个重要病理特征就是鼻腔鼻窦黏膜持续的炎性反应，具体表现为黏液分泌增加、分泌细胞增生。虽然目前医学界对慢性鼻-鼻窦炎的病理机制尚无完全确切的解释，但大多数学者都认为具有黏液生成功能的腺体细胞、杯状细胞增生、化生激发了黏蛋白基因表达是慢性鼻-鼻窦炎发生的一个重要病理机制[4-6]。本研究中通过对鼻窦黏膜组织进行HE染色发现，慢性鼻-鼻窦炎患者的黏膜水肿或增厚，杯状细胞化生、增生明显，上皮纤毛不完整或鳞状上皮化生，腺体增生或水肿，炎性细胞较多。这一结果也印证了上述观点。MUC5AC是主要由呼吸道表面上皮的杯状细胞表达，同时MUC5AC也是气道黏液的一个重要组成成分[7]。本研究结果显示，MUC5AC主要由假复层纤毛柱状上皮细胞和杯状细胞表达，腺体细胞可有少量表达。观察组MUC5AC阳性表达率和表达水平均明显高于对照组(P<0.05)。这提示在慢性鼻-鼻窦炎患者的鼻窦黏膜中，腺体细胞和杯状细胞的增生、化生导致了MUC5AC表达水平的升高，从而促使黏液分泌增多[8-10]。

Pendrin是一种转运阴离子的蛋白，近期有研究证实Pendrin是碘/氯转运子，主要作用为转运氯化物、碘化物、碳酸氢盐等阴离子，其是PDS基因的表达产物[11]。有研究显示，Pendrin可在气道疾病中表达，如哮喘、变应性鼻炎、慢性鼻-鼻窦炎等[12]。本次研究结果显示，Pendrin主要由上皮细胞顶膜表达，腺体表达次之。观察组患者的Pendrin阳性表达率和表达水平均显著高于对照组(P<0.05)。这表明Pendrin表达在慢性鼻-鼻窦炎患者鼻窦黏膜中的表达水平异常升高。

有研究显示，在粘液生成过程中，Pendrin蛋白发挥着重要作用[13]。粘液分泌过多是慢性阻塞性肺疾病及支气管哮喘的一个典型特征，所以推测Pendrin蛋白表达与这些呼吸系统疾病的发生有着密切联系。文献显示，慢阻肺和支气管哮喘患者气道上皮细胞的中的Pendrin蛋白表达水平明显升高，并且Pendrin蛋白表达的上调与黏液生成过多有着密切联系[14]。既往关于Pendrin蛋白与粘液生成相关性的研究多为下呼吸道疾病，较少有人针对上呼吸道疾病进行研究。本研究的相关性分析结果显示Pendrin与MUC5AC存在显著正相关关系。这提示Pendrin表达升高可能促使MUC5AC表达增加，诱导黏液生成增多[15]。

综上所述，慢性鼻-鼻窦炎患者鼻窦黏膜中的MUC5AC、Pendrin均呈高表达，且Pendrin可促使MUC5AC表达升高，诱导黏液分泌，其在慢性鼻-鼻窦炎的发生发展中发挥着潜在的重要作用。

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10.3969/j.issn.1002-7386.2016.17.023

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