参芪多糖泡腾片免疫调节作用的药理研究

任　娟，顾　燕（.江苏省中医院，南京009；.江苏睿博医药有限公司，江苏南京）

参芪多糖泡腾片免疫调节作用的药理研究

任娟1，顾燕2（1.江苏省中医院，南京210029；2.江苏睿博医药有限公司，江苏南京211112）

目的考察参芪多糖泡腾片对小鼠和大鼠的免疫调节作用。方法通过碳粒廓清试验及2，4-二硝基氟苯（DNFB）诱导小鼠迟发型变态反应，通过测定小鼠右耳肿胀度和肝、脾、胸腺指数，考察参芪多糖泡腾片对小鼠的免疫调节作用；通过测定注射用环磷酰胺（CTX）致免疫低下大鼠脾指数、胸腺指数，肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白介素-2（IL-2）水平等的变化，考察参芪多糖泡腾片对大鼠的免疫调节作用。结果参芪多糖泡腾片能够升高小鼠肝指数、脾指数、廓清指数K值及吞噬指数α值；增强DNFB诱导的小鼠迟发型变态反应；并升高CTX所致免疫低下大鼠脾指数和TNF-α、IL-2水平。结论参芪多糖泡腾片具有增强小鼠特异性免疫和非特异性免疫功能、提高大鼠免疫力的作用。

多糖类；片剂；党参/药理学；黄芪/药理学；免疫活性；超敏反应，迟发型；碳粒廓清试验

参芪多糖泡腾片由党参、黄芪的提取物制成，主要成分为党参多糖和黄芪多糖。现代药理学实验表明，党参多糖是党参的主要有效成分之一，具有调节机体免疫、清除自由基和抗衰老等作用［1-3］；黄芪多糖也具有增强免疫力的作用［4-6］。黄芪和党参组方，在免疫调节方面具有一定协同作用，可用于肺脾气虚引起的神疲乏力，少气懒言，自汗眩晕，以及肺癌、胃癌见上述证候者的辅助治疗。本文参照文献［7］，通过动物实验，考察参芪多糖泡腾片的免疫调节作用，为临床应用提供理论支持。

1　材料与方法

1.1材料

1.1.1药物与试剂参芪多糖泡腾片（规格：1.8 g，批号：20110201，自制），注射用胸腺五肽（规格：1 mg，批号：20100701，海南中和药业有限公司），参芪五味子片（规格：0.25 g，批号：1001020003，甘肃独一味生物制药股份有限公司），印度墨水（规格：100 mL，批号：0040327，上海长江日用粘合材料厂），2，4-二硝基氟苯（DNFB，武汉福鑫化工有限公司）等；肿瘤坏死因子-α（TNF-α）试剂盒、白介素-2（IL-2）试剂盒均购自南京建成生物工程研究所；注射用环磷酰胺（CTX，规格：0.2 g，批号：11072523，江苏恒瑞医药股份有限公司），纯水（自制）；其余为分析纯。

1.1.2主要仪器YB502型电子天平（上海海康电子仪器厂）、AY220型电子分析天平（岛津公司）、紫外分光光度仪UV-2501（岛津公司）、耳打孔器等。

1.1.3动物美国癌症研究所（ICR）种小鼠120只，体质量19～21 g，无特定病原体（SPF）级，雌雄各半，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，许可证号：SCXK（沪）2011-0003；Wistar大鼠70只，体质量（174±16）g，SPF级，雌雄各半，由山东大学实验动物中心提供，许可证号：SCXK（鲁）20110005。

1.2方法

1.2.1药物用量设置

1.2.1.1小鼠用量设置参芪多糖泡腾片人用量按每天2次、每次1片计，人用量每天3.600 g。按成人70.00kg和小鼠0.02 kg等效剂量折算系数法［8］，该剂量相当于小鼠剂量的0.468 g/kg，相当于参芪多糖原料粉末0.168 g。高、中、低剂量分别设为1.374、0.468、0.156 g/kg，组建比为3∶1；参芪五味子人用量按每天3次、每次4片计算，人用量每天3.000 g，小鼠的等效剂量为0.400 g/kg；注射用胸腺五肽人用量按2.000 mg/d计算，小鼠的等效剂量为0.260mg/kg。

1.2.1.2大鼠用量设置大鼠按成人70.00kg和大鼠0.20 kg等效剂量折算系数法计算，等效剂量为0.324 g/kg。高、中、低剂量分别设为0.972、0.324、0.108 g/kg，组建比为3∶1。同法计算，参芪五味子等效剂量为0.270 g/kg，注射用胸腺五肽为0.090 mg/kg。

1.2.2参芪多糖泡腾片对小鼠非特异性免疫功能的影响

1.2.2.1药物配置参芪多糖泡腾片高剂量组溶液：取参芪多糖泡腾片适量，研细，精密称取粉末，纯水溶解并稀释至质量浓度为0.068 7 g/mL，标为溶液①；中剂量组溶液：取溶液①适量，加2倍体积纯水稀释，质量浓度为0.0229 g/mL，标为溶液②；低剂量组溶液：取溶液①适量，加8倍体积纯水稀释，质量浓度为0.007 6 g/mL，标为溶液③；注射用胸腺五肽溶液：取1支注射用胸腺五肽，以 7.6 mL生理盐水溶解，药物质量浓度为0.026 0 mg/mL，标为溶液④；参芪五味子溶液：取参芪五味子2片，以纯水研磨并稀释至25 mL，质量浓度为0.0200g/mL，标为溶液⑤。

1.2.2.2实验操作取体质量19～21 g的SPF级ICR种小鼠60只，按体质量、性别随机分为六组：正常对照组、参芪多糖泡腾片低剂量组、参芪多糖泡腾片中剂量组、参芪多糖泡腾片高剂量组、参芪五味子对照组和注射用胸腺五肽对照组，每组10只，雌雄各半。对小鼠进行标记，参芪多糖泡腾片低、中、高剂量组及参芪五味子对照组根据体质量灌胃给予相应质量浓度药物溶液，给药剂量为0.2 mL/10 g。正常对照组灌胃给予等剂量纯水，连续给药7 d。注射用胸腺五肽对照组肌内注射给药，给药剂量为0.1 mL/10 g。所有小鼠末次给药后1 h称质量，尾静脉注射印度墨汁0.05 mL/10 g，于1、5 min后分别从眼眶静脉取血20 μL，加入0.1%碳酸钠（Na2CO3）溶液2 mL摇匀，用分光光度计在680 nm波长下测定吸光度［以下分别用吸光度1（OD1）和OD5表示1、5 min所取血样的吸光度］，处死动物，称肝、脾质量。按下式计算廓清指数K、吞噬指数α，考察药物是否具有提高非特异性免疫功能的作用。廓清指数K=（logOD1-logOD5）/（t5-t1）；吞噬指数α=体质量/肝脾质量×K1/3。

1.2.3参芪多糖泡腾片对小鼠迟发型变态反应的影响

1.2.3.1药物配制方法同1.2.2.1。

1.2.3.2实验操作动物及分组同1.2.2.2。对小鼠进行标记，参芪多糖泡腾片低、中、高剂量组及参芪五味子对照组分别根据体质量灌胃给予相应质量浓度的药物溶液，连续灌胃给药7 d，给药剂量为0.2 mL/10 g，正常对照组灌胃给予等剂量纯水，连续给药7d。注射用胸腺五肽对照组肌内注射给药，给药剂量为0.1 mL/10 g。除正常对照组外，参芪多糖泡腾片低、中、高剂量组，参芪五味子对照组，注射用胸腺五肽对照组小鼠腹部用1% DNFB溶液均匀涂抹进行致敏（腹部去毛，面积3 cm× 3 cm，涂1%DNFB 50 μL），致敏后第5天，将1%DNFB溶液10μL均匀涂抹于小鼠右耳（两面）进行攻击，正常对照组同样涂耳但未致敏。攻击后24 h，颈椎脱臼处死小鼠，剪下左、右耳壳，用打孔器取下直径8 mm的耳片，称质量。测定小鼠右耳肿胀度、脾指数和胸腺指数。考察药物是否具有提高特异性免疫功能的作用。

1.2.4参芪多糖泡腾片对CTX所致免疫低下大鼠器官功能和TNF-α、IL-2等的影响

1.2.4.1药物配制参芪多糖泡腾片高剂量组溶液：称取参芪多糖泡腾片粉末适量，以纯水溶解并稀释，质量浓度为0.097 2 g/mL，标为溶液①；中剂量组溶液：取溶液①适量，加2倍体积纯水稀释，质量浓度为0.0324g/mL，标为溶液②；低剂量组溶液：取溶液①适量，加8倍体积纯水稀释，质量浓度为0.010 8 g/mL，标为溶液③；注射用胸腺五肽溶液：取1支注射用胸腺五肽，以11 mL生理盐水溶解，药物质量浓度为0.090 0 mg/mL，标为溶液④；参芪五味子溶液：取参芪五味子片4片，以纯水研磨并稀释至37 mL，质量浓度为0.025 0 g/mL，标为溶液⑤。

1.2.4.2实验操作选取体质量（174±16）g的SPF级Wistar大鼠70只，按体质量、性别随机分为正常对照组、模型对照组、参芪多糖泡腾片低剂量组、参芪多糖泡腾片中剂量组、参芪多糖泡腾片高剂量组、参芪五味子对照组和注射用胸腺五肽对照组。每组10只，雌雄各半。对大鼠进行标记，参芪多糖泡腾片低、中、高剂量组及参芪五味子对照组分别根据体质量灌胃给予相应质量浓度的药物溶液，给药剂量为：0.1 mL/10 g。正常对照组和模型对照组灌胃给予等剂量纯水。注射用胸腺肽对照组肌内注射给药，给药剂量为0.1 mL/10 g，连续给药7 d。7 d后除正常对照组外，其余各组大鼠隔天腹腔注射CTX 40 mg/kg共5次。末次给药后1 h，动物称质量，取血测定血清TNF-α、IL-2水平，处死动物称胸腺、脾质量，计算大鼠胸腺指数和脾指数。考察药物是否具有提高特异性免疫功能的作用。

1.3统计学处理应用SPSS11.0统计软件进行数据分析，计量资料以±s表示，组间比较采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结　果

2.1参芪多糖泡腾片对小鼠非特异性免疫功能的影响参芪多糖泡腾片对小鼠廓清指数K、吞噬指数α、肝指数及脾指数均有不同程度的升高作用，对吞噬指数K的影响最明显；随着剂量增加，作用增强；中、高剂量组的作用强于参芪五味子对照组及注射用胸腺五肽对照组。见表1。

2.2参芪多糖泡腾片对小鼠迟发型变态反应的影响参芪多糖泡腾片能够增强DNFB诱导小鼠的迟发型变态反应，其中中剂量组的作用与参芪五味子类似。见表2。

表1　参芪多糖泡腾片对小鼠非特异性免疫功能的影响（±s）

表1　参芪多糖泡腾片对小鼠非特异性免疫功能的影响（±s）

注：与正常对照组比较，aP＜0.05，bP＜0.01；与参芪五味子对照组、注射用胸腺五肽对照组比较，cP＜0.05，dP＜0.01。

组别　廓清指数K　吞噬指数α　肝指数（g/10 g）脾指数（g/10 g）正常对照组低剂量组中剂量组高剂量组参芪五味子对照组注射用胸腺五肽对照组0.06±0.03 0.07±0.04a0.08±0.03ac0.09±0.02ad0.07±0.01a0.08±0.02a6.15±0.48 6.37±0.59a6.95±0.43ac7.88±0.34bd6.88±0.43a6.07±0.70 0.54±0.05 0.57±0.08 0.60±0.06a0.63±0.07b0.59±0.15 0.57±0.13 0.03±0.01 0.03±0.01 0.03±0.03ac0.04±0.01bd0.03±0.01 0.03±0.01

表2　参芪多糖泡腾片对小鼠迟发型变态反应的影响（±s）

表2　参芪多糖泡腾片对小鼠迟发型变态反应的影响（±s）

注：与正常对照组比较，aP＜0.05，bP＜0.01；与注射用胸腺五肽对照组比较，cP＜0.05，dP＜0.01。

组别　耳肿胀度（g）脾指数（g/10 g）胸腺指数（g/10 g）正常对照组低剂量组中剂量组高剂量组参芪五味子对照组注射用胸腺五肽对照组0.85±0.76 6.26±7.26 9.38±2.15bd10.05±10.21bd8.25±2.33bd2.91±1.05 0.04±0.01 0.04±0.01c0.06±0.00ad0.06±0.01bd0.04±0.00 0.03±0.01a0.023±0.003 0.024±0.005c0.030±0.014d0.029±0.011d0.028±0.012 0.012±0.002b

2.3参芪多糖泡腾片对CTX所致免疫低下大鼠器官功能和TNF-α、IL-2的影响参芪多糖泡腾片可使脾指数、IL-2及TNF-α水平升高，对胸腺指数的作用不明显；其中中、高剂量组对脾指数的作用、高剂量组对TNF-α的影响、中剂量组对IL-2的影响与参芪五味子对照组相当。见表3。

表3　参芪多糖泡腾片对CTX致免疫低下大鼠脾指数、胸腺指数、TNF-α和IL-2的影响（±s）

表3　参芪多糖泡腾片对CTX致免疫低下大鼠脾指数、胸腺指数、TNF-α和IL-2的影响（±s）

注：与正常对照组比较，aP＜0.05，bP＜0.01；与模型对照组比较，cP＜0.05，dP＜0.01。

组别　脾指数（mg/100 g）胸腺指数（mg/100 g）IL-2　TNF-α正常对照组模型对照组低剂量组中剂量组高剂量组参芪五味子对照组注射用胸腺五肽对照组0.47±0.22c0.17±0.02a0.18±0.05a0.22±0.05ac0.23±0.07ac0.20±0.06a0.16±0.03a0.19±0.03 0.04±0.01b0.04±0.01b0.04±0.01b0.03±0.01b0.07±0.07b0.03±0.01b1 277.24±682.62 632.83±300.12b640.73±378.18b790.02±353.32bc758.57±358.33bc694.65±325.82b817.01±402.29bd156.45±14.12 126.87±12.42a123.00±32.35a175.22±34.33ac224.80±131.64bd105.24±57.89a219.59±123.95bd

3　讨　论

免疫力是人体自身的防御功能，免疫失调会引起各种疾病。人体免疫系统由免疫器官、免疫细胞及免疫分子组成。肝脏、脾脏及胸腺是人体主要的免疫器官，通过测定肝、脾及胸腺指数可反映药物的免疫调节作用；免疫细胞单核巨噬细胞的吞噬能力反映了机体的非特异性免疫作用，通过碳粒廓清试验可测定机体对异物的吞噬能力，从而反映药物的非特异性免疫调节作用；机体TNF-α、IL-2等免疫分子水平高低，也能反映药物的免疫调节作用。

本研究结果表明，参芪多糖泡腾片能增强非特异性细胞免疫作用，其作用强于对照药物参芪五味子，具有增强DNFB诱导的小鼠迟发型变态反应的作用，其效果与参芪五味子类似；可改善被CTX抑制的大鼠免疫功能，表现为升高脾指数和TNF-α、IL-2水平，但对胸腺指数无明显作用。其免疫调节作用具有剂量依赖性，中剂量组可达到较明显的作用。参芪多糖泡腾片的免疫增强作用，可用于临床癌症的辅助治疗。

党参和黄芪单方或复方在抗肿瘤方面已有临床应用。郑学芝等［9］研究了黄芪多糖对COLO205人结肠癌细胞株的抑制作用；苏宏等［10］研究了参芪化瘀方对H22肝癌细胞survivin表达的影响；柏长青等［11］进行了黄芪、党参提取物抑制肺癌细胞诱导血管内皮细胞迁移的研究。

总之，中药主要通过扶正祛邪来达到提高机体免疫力及自身抑癌能力的目的，其不良反应少，能够提高患者的生活质量。中药成分复杂，作用靶点多，可从多方面辅助治疗癌症。本研究为参芪多糖泡腾片的临床应用提供了理论支持。

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Pharmacological study on immunoregulation effect of Shenqi Polysaccharide Effervescent Tablets

Ren Juan1，Gu Yan2（1.Jiangsu Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine，Nanjing，Jiangsu 210029，China；2.Jiangsu Ruibo Pharmaceutical Co.，Ltd.，Nanjing，Jiangsu 211112，China）

ObjectiveTo investigate the immunoregulation effects of Shenqi Polysaccharide Effervescent Tablets in mice and rats.MethodsThe carbon particle clearance test and 2，4-dinitrofluorobenzene（DNFB）were used to induce the mice delayed type hypersensitivity reaction，the changes of the spleen index，thymus index，TNF-α and IL-2 in immunosuppressed rats caused by cyclophosphamide（CTX）were detected for investigating the immunoregulation effects of Shenqi Polysaccharide Effervescent Tablets in rats.ResultsShenqi Polysaccharide Effervescent Tablets could increase the liver index，spleen index，clearance index K value and phagocytic index α value；and enhanced the spleen index，TNF-α and IL-2 levels in immunosuppressed rats caused by CTX.ConclusionShenqi Polysaccharide Effervescent Tablets can enhance specific immune and non-specific immune function of mice and increases the immunity in rats.

Polysaccharides；Tablets；Codonopsispilosula/pharmacology；Astragalusmembranaceus/pharmacology；Immunocompetence；Hypersensitivity，Delayed；Carbon clearance test

10.3969/j.issn.1009-5519.2016.01.017

A

1009-5519（2016）01-0051-03

任娟（1987-），药师，主要从事中药调配工作。

（2015-08-18）