补阳还五汤对奥沙利铂致神经病理痛模型大鼠的干预作用*

蔡　青，张文洁，赵舒武，王　蓉，许蓬娟，贺美瑜，刘　畅，肖　杏，孙梓翔（天津中医药大学中西医结合学院，天津300193）

补阳还五汤对奥沙利铂致神经病理痛模型大鼠的干预作用*

蔡青，张文洁，赵舒武，王蓉，许蓬娟，贺美瑜，刘畅，肖杏，孙梓翔
（天津中医药大学中西医结合学院，天津300193）

［目的］研究通过建立奥沙利铂致大鼠慢性神经病理痛模型，选择补阳还五汤为代表方揭示其对奥沙利铂致神经病理痛的干预作用。［方法］选取健康清洁级雄性成年大鼠60只，随机分为4组。空白对照组、奥沙利铂组、补阳还五汤对照组和补阳还五汤治疗组。检测4组大鼠热痛阈值并监测大鼠体质量变化。［结果］第2周补阳还五汤治疗组热痛阈值与模型组相比差异有统计学意义。补阳还五汤可拮抗奥沙利铂化疗大鼠引起的热痛阈值和体质量的变化。［结论］补阳还五汤治疗奥沙利铂所致神经病理痛符合中医学的基本理论，该方具有广阔的应用前景。

补阳还五汤；神经病理痛；奥沙利铂；热痛阈值

奥沙利铂是结直肠癌化疗的一线药物，然而却会导致患者出现严重的急性和慢性周围神经病变，并且常常呈现神经病理性疼痛［1-2］。患者经历多个疗程的治疗后，表现出周围神经慢性病变，其主要临床症状特点是上下肢端麻木感和感觉迟钝，甚至可有患者出现运动功能障碍。慢性神经病变是临床奥沙利铂化疗的剂量限制性毒性，往往导致化疗的中断，严重影响患者生存质量［3-4］。中医肿瘤学者研究认为化疗所致神经病理痛归属“血痹”和“痹证”范畴［5-6］。气虚血瘀是本病发生发展基本病理基础，应以益气活血为基本治则［7-9］。补阳还五汤若论治法，补气为主，活血通络为辅［10-11］。本实验通过建立奥沙利铂致大鼠慢性神经病理痛模型，选择补阳还五汤为代表方揭示其对奥沙利铂致神经病理痛的干预作用，研究结果将为防治奥沙利铂化疗致神经病理痛提供新思路。

1　材料与方法

1.1补阳还五汤药液制备将黄芪120g，当归6g，赤芍4.5 g，川芎3 g，地龙3 g，红花3 g，桃仁3 g等7味药浸入10倍体积双蒸水浸泡2 h，常规制成浓度为6 250 g/L的溶液；高压灭菌后，4℃保存，用前摇匀（由天津人民医院中药房制备提供）。

1.2实验动物分组及给药方法选取健康清洁级雄性Wistar大鼠，体质量180～230 g。实验期间保持自由饮水和进食，饲养环境温度为（22±2）℃，适应性喂养1周后进行实验，采用随机数字表法随机分组，每组15只大鼠。空白对照组：灌胃给予等量生理盐水。奥沙利铂组：给予奥沙利铂4 mg/（kg·d），每周2次腹腔注射，持续4周。在造模前1天用电子天平称量体质量，实验过程每周2次测量并记录，根据体质量调整奥沙利铂的剂量。补阳还五汤对照组：灌胃给予补阳还五汤水煎剂浓缩液50 g/（kg·d）（参照临床等效剂量的4倍剂量给药），每日2次，连续灌胃28 d。补阳还五汤治疗组：给予奥沙利铂方法同前，同时灌胃补阳还五汤水煎剂50 g/（kg·d）。

1.3实验方法

1.3.1行为学实验方法建立奥沙利铂化疗所致慢性神经病理痛大鼠模型，通过行为学实验评价补阳还五汤干预作用。行为学测试均于给药完毕后1h，在上午9∶00～11∶00之间进行；给药人员不参与行为学测试。每次测试前大鼠有30 min适应测试环境和测试者。观测时间持续至第1次给药后4周。

1.3.2热缩足潜伏期用足底刺激测痛仪测定按照已有研究方法进行实验，分别于给药前和给药后第7、14、21、28天，将大鼠置于有机玻璃箱内3 mm厚的玻璃板上，适应环境15 min。按仪器操作说明进行测试，用热刺激仪刺激大鼠后肢足底中部皮肤，同时开始计时，出现抬足、舔足，逃避等反应时读刺激仪上的时间［12］。照射光源强度适度调整，控制正常大鼠潜伏期介于10～20 s之间；设置自动切断时间为30 s，防止烧伤大鼠皮肤。大鼠双足分别连续测量5次，每次间隔5 min，去除极端值后计算3次平均值，即为大鼠的热辐射痛阈值［12］。

2　研究结果

2.1补阳还五汤对奥沙利铂致神经病理痛模型大鼠体质量的影响大鼠给予奥沙利铂后，模型组大鼠逐渐出现行动迟缓，进水进食显著减少；除空白对照组外，其余各组均有3只动物死亡，补阳还五汤对照组为灌胃失误致死；其他两组均为不适应化疗所致。重复测量的多因素方差分析结果显示，大鼠体质量随时间进程差异显著（F=51.659，P＜0.001）；分组和各测量时间点间存在交互作用（F=3.516，P＜0.01），提示时间因素的作用随分组的不同差异显著。经LSD检测后发现，空白对照组与第1周相比，第3周和第4周动物体质量显著增加（P＜0.05）。补阳还五汤对照组，第3周和第4周动物体质量显著增加（P＜0.05）。奥沙利铂组4周内体质量比较无统计学差异；补阳还五汤治疗组第2周体质量不增加，反而减少，提示化疗药物的不良反应，影响动物进食；后2周体质量又显著增加，提示补阳还五汤的干预作用。结果见表1，图1。

2.2补阳还五汤对奥沙利铂致神经病理痛模型大鼠热痛阈值的影响对照组热痛阈值随时间呈降低趋势（见表2，图2）。经重复测量的多因素方差分析发现，热痛阈值基础值、第1周至4周时间点间差异显著（F=21.257，P＜0.001）。第2周热痛阈值4组间差异无统计学意义，两两比较显示，与模型组相比补阳还五汤对照组热痛阈值有统计学差异，补阳还五汤治疗组热痛阈值与模型组相比有统计学差异。重复测量的多因素方差分析发现，分组和各测量时间点间无交互作用（P＜0.297）。

表1　补阳还五汤对大鼠体质量的影响（±s）Tab.1Effects of Buyang Huanwu decoction on rat body weigh（t±s）g

表1　补阳还五汤对大鼠体质量的影响（±s）Tab.1Effects of Buyang Huanwu decoction on rat body weigh（t±s）g

注：与第1周相比，*P＜0.05；与第2周相比，**P＜0.01；与第2周相比，##P＜0.01。

组别第1周第2周第3周第4周空白对照组270.66±13.90 269.55±5.85 310.78±7.85*315.01±9.83**奥沙利铂组272.97±7.24 268.19±8.01 292.49±10.72 283.91±9.02补阳还五汤对照组274.83±6.36 274.88±8.49 310.17±9.43*304.47±14.41*补阳还五汤治疗组277.82±5.33 263.81±8.05 302.48±8.55*##300.50±6.18*##

表2　补阳还五汤对神经病理痛模型大鼠热痛阈值的影响（±s）Tab.2Effects of Buyang Huanwu decoction on thermal pain threshold of the neuropathy pain rat mode（l±s）s

表2　补阳还五汤对神经病理痛模型大鼠热痛阈值的影响（±s）Tab.2Effects of Buyang Huanwu decoction on thermal pain threshold of the neuropathy pain rat mode（l±s）s

注：与奥沙利铂组相比，*P＜0.05；与奥沙利铂组相比，**P＜0.01。

组别基础值第1周第2周第3周第4周空白对照组16.02±1.76 14.70±1.23 14.33±1.4411.41±0.949.87±0.59奥沙利铂组16.14±0.59 18.49±1.58 17.20±1.6012.68±0.9311.59±0.85补阳还五汤对照组16.27±1.02 15.43±1.38 11.08±1.51**9.84±0.87*10.49±1.27补阳还五汤治疗组16.09±1.24 18.25±1.73 11.95±1.23*10.22±1.0610.57±0.80

图2　不同组大鼠热痛阈值变化趋势Fig.2The trend of heat pain threshold in different groups of rats within four weeks

3　讨论

奥沙利铂致神经病理痛是在化疗中常见的毒副反应，患者肢体常常发生疼痛、麻木等不能耐受的症状往往中断化疗。奥沙利铂化疗致慢性神经病理痛机制未完全清楚，是非常棘手的临床问题［13-14］。补阳还五汤是清代名医王清任在《医林改错》中最早呈现，由黄芪、当归、赤芍、川芎、红花、地龙组成，该方临床常用于治疗如缺血性脑中风、中风后遗症等疾病［15-16］。随着该方研究深入，临床证实补阳还五汤可用于治疗奥沙利铂所致神经病理痛［17-18］。方中重用黄芪，补益元气，意在气旺则血行，瘀祛则络通，为君药；大剂量黄芪以求其大补元气、推动血液运行为君药，强调了中医学中“气为血帅”和“气行则血行”的理论［19］。诸药合用，益气补血与活血行血，使气旺血行、补而不滞，解毒散结、活血化瘀而不伤正气，从而使气行血行。血痹的病因包括气血不足之体，外受风寒，阳气不能充于脉，血不能荣于脉，治疗当使阳气畅行于脉中，血运亦能趋于稳态，筋脉自荣［20］。

本研究结果表明，给予大鼠奥沙利铂后，动物明显出现行动迟缓，进水进食显著减少现象，致使动物体质量减少，提示补阳还五汤可发挥一定的干预作用。补阳还五汤可拮抗奥沙利铂化疗大鼠引起的热痛阈值的变化。目前奥沙利铂神经毒性的机制尚不明确，并且也不清楚补阳还五汤通过怎样的机制发挥作用，因此尚需进一步的实验研究以明确奥沙利铂致神经病理痛的发病机制以及补阳还五汤的干预机制，后续研究应该进一步从分子机制方面进行研究，以便更好地指导临床用药，减轻肿瘤患者的痛苦。

［1］Chen K，Zhang ZF，Liao MF，et al.Blocking PAR2 attenuates oxaliplatin-induced neuropathic pain via TRPV1 and releases of substance P and CGRP in superficial dorsal horn of spinal cord［J］.J Neurol Sci，2015，352（1-2）:62-67.

［2］Sisignano M，Baron R，Scholich K，Geisslinger G.Mechanism-based treatment for chemotherapy-induced peripheral neuropathic pain［J］. Nat Rev Neurol，2014，10（12）:694-707.

［3］Velasco R，Videla S，Villoria J，et al.Reliability and accuracy of quantitative sensory testing for oxaliplatin-induced neurotoxicity［J］. Acta Neurol Scand，2015，131（5）:282-289.

［4］Garg R，Bhatnagar S.Neuropathic pain in cancer survivors［J］.Pain Manag，2014，4（4）:309-316.

［5］谭兆峰，齐元富.益气温阳活血法治疗胃癌化疗致神经毒性临床研究［J］.山东中医杂志，2015，34（2）：101-103.

［6］秦宝宁.益气活血方防治奥沙利铂致大肠癌周围神经毒性疗效观察［J］.山东中医杂志，2015，34（3）：176-178.

［7］沈婕，何胜利，孙贤俊，等.加味黄芪桂枝五物汤外洗治疗奥沙利铂致周围神经病变临床研究［J］.中国中医药信息杂志，2015，22（11）:13-15.

［8］杨兵，梁翠微，杜均祥，等.补阳还五汤加味防治奥沙利铂外周神经毒性19例疗效观察［J］.新中医，2007，39（6）：81-83.

［9］李萍.补阳还五汤临床举偶［J］.中国民族民间医药，2012，21（10）: 54，59.

［10］张弛，段小英，杨志伟.补阳还五汤临床应用探微［J］.中国全科医学，2013，16（6A）：1918-1919，1926.

［11］黄洪欣.补阳还五汤冲剂治疗缺血性中风的临床分析［J］.中医临床研究，2015，7（29），61-62.

［12］胡莹.当归四逆汤防治奥沙利铂致慢性外周神经毒性实验研究［D］.南京：南京中医药大学硕士论文，2012.

［13］Ece Esin，Suayib Yalcin.Neuropathic cancer pain:What we are dealing with How to manage it？［J］.Onco Targets Ther，2014，7:599-618.

［14］Liu XY，Zhang GF，Dong L，et al.Repeated administration of mirtazapine attenuates oxaliplatin-induced mechanical allodynia and spinal NR2B up-regulation in rats［J］.Neurochemical Research，2013，38（9）:1973-1979.

［15］洪丽芬，郭宏敏.补阳还五汤在心脑血管疾病中应用研究［J］.辽宁中医药大学学报，2010，11（5）:262-264.

［16］姜志荣.补阳还五汤加味在心脑血管疾病中的运用［J］.中华实用中西医杂志，2008，20（3）:208.

［17］文汉英，朱创洲.“补阳还五汤加味”防治奥沙利铂所致外周神经毒性反应30例临床观察［J］.江苏中医药杂志，2010，42（1）:42-43.

［18］孙一予，贾英杰，黄敏娜，等.益气活血法防治化疗后外周神经病变临床观察［J］.新中医，2009，41（12）:17-18.

［19］戴虹，潘宇，王晓露.补阳还五汤加味治疗草酸铂化疗后周围神经毒性42例［J］.实用中医内科杂志，2006，20（5）：518-519.

［20］曹鹏，霍介格.从血痹论治化疗相关性周围神经病变［J］.光明中医，2013，28（1）:12-15.

（本文编辑：马英，滕晓东）

Intervention effects of Buyang Huanwu decoction on neuropathic pain oxaliplatin induced in the rat model

CAI Qing，ZHANG Wen-jie，ZHAO Shu-wu，WANG Rong，XU Peng-juan，HE Mei-yu，LIU Chang，XIAO Xing，SUN Zi-xiang
（School of Integrative Medicine，Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193，China）

［Objective］The aim of the present study was to reveal the intervention of Buyang Huanwu decoction as a representative soup to oxaliplatin-induced neuropathic pain using oxaliplatin induced rat chronic neuropathic pain model.［Methods］Sixty healthy adult male and clean grade rats were randomly divided into four groups including Blank group，oxaliplatin group，Buyang Huanwu decoction control group and Buyang Huanwu decoction treatment group.Body weight measurements and the thermal pain threshold of rats were assessed in rats of the four groups.［Results］The thermal pain threshold of Buyang Huanwu decoction treatment group compared with that in model group was significantly different in second week.Buyang Huanwu decoction can antagonize change of thermal pain threshold and body weight in rats induced by oxaliplatin chemotherapy.［Conclusion］The present experimental study has confirmed Buyang Huanwu treated neuropathic pain oxaliplatin-induced is fully consistent with the basic theory of Chinese medicine.Buyang Huanwu decoction has broad application prospects.

Buyang Huanwu decoction；oxaliplatin；neuropathic pain；thermal pain threshold

R285.5

A

1672-1519（2016）03-0169-03

10.11656/j.issn.1672-1519.2016.03.11

天津中医药大学中西医结合学院科研启动基金；天津中医药大学第五届大学生科技创新基金资助项目。

蔡青（1967-），男，博士后，教授，从事脑缺血和神经系统疾病的基础研究。

（2015-11-20）