SRSF1和Survivin在前列腺癌组织中的表达及其与病理分级的相关性

肖邦明，祝兴旺，董理鸣，刘屹立，王　平

（中国医科大学附属第四医院泌尿外科，沈阳110032）

SRSF1和Survivin在前列腺癌组织中的表达及其与病理分级的相关性

肖邦明，祝兴旺，董理鸣，刘屹立，王平

（中国医科大学附属第四医院泌尿外科，沈阳110032）

目的检测人丝氨酸/精氨酸富有剪接因子1（SRSF1）和凋亡抑制因子（Survivin）在前列腺癌组织中的表达，并探讨两者的相关性及其与前列腺癌病理分级的关系，从而初步提出前列腺癌治疗中的新靶点。方法采用免疫组织化学SP法检测SRSF1、Survivin蛋白在12例前列腺癌组织和8例良性前列腺增生组织中的表达，分析其与病理分级的关系，并探讨两者的相关性。结果SRSF1蛋白在前列腺癌组织中的细胞阳性表达率为（76.37±5.06）%，显著高于良性前列腺增生［（11.30±1.09）%，P＜0.05］，Survivin蛋白在前列腺癌组织中的细胞阳性表达率为（86.93±3.21）%，显著高于良性前列腺增生［（17.67±1.99）%，P＜0.05］。SRSF1和Survivin蛋白在前列腺癌组织中的表达与病理Gleason分级呈正相关，并且二者有明显的相关性（P＜0.05）。结论SRSF1和Survivin蛋白在前列腺癌组织中均有高表达，比在良性前列腺增生组织中明显增加；并且SRSF1和Survivin蛋白的阳性表达与前列腺癌Gleason评分呈正相关，同时前列腺癌组织中Survivin蛋白表达量的升高与SRSF1蛋白表达量的升高呈正相关，初步证明了SRSF1的作用可能是通过上调Survivin的表达，从而促进了前列腺癌的发生、发展。

前列腺癌；良性前列腺增生；人丝氨酸/精氨酸富有剪接因子1；凋亡抑制因子；免疫组织化学

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前列腺癌是男性泌尿系统常见的恶性肿瘤，近年来发病率呈上升趋势。目前，前列腺癌的治疗仍然是亟待解决的重要问题，近年来分子生物学研究［1-2］发现去势治疗、放疗及某些化疗药物都是通过诱导前列腺癌细胞凋亡发挥作用的。因此，从凋亡途径来抑制前列腺癌治疗抵抗具有一定研究价值。凋亡抑制因子（Survivin）是凋亡抑制蛋白家族的新成员，具有肿瘤特异性，只表达于肿瘤和胚胎组织。研究［3］发现它在前列腺癌细胞中上调表达，在正常分化组织中不表达，并与前列腺癌的发生、发展及预后均有密切关系。人丝氨酸/精氨酸富有剪接因子1（serine/arginine rich splicing factor 1，SRSF1）为SR蛋白家族的原型成员，研究［4］发现SRSF1为原癌蛋白，并在肺癌、乳腺癌及白血病等人类肿瘤细胞中存在过表达现象，它通过参与前体mRNA的选择性剪接与加工、胞内定位与运输等生理过程，控制下游相关蛋白的表达与功能，从而参与多种复杂的生物学通路，发挥致癌作用。研究［5］报道，在肺癌细胞中，SRSF1能增强Survivin的翻译与活化，并且可以增加Survivin蛋白的稳定性，从而参与肺癌的发生发展。目前关于SRSF1在前列腺癌中表达的相关研究很少，本研究旨在通过免疫组织化学的方法来探讨SRSF1和Survivin在前列腺癌中的表达及与前列腺癌临床病理特征的关系，并探讨两者的相关性。

1　材料与方法

1.1标本来源

收集中国医科大学附属第四医院2012年5月至2014年9月经直肠前列腺穿刺或者手术切除的12例前列腺癌标本，12例前列腺癌石蜡标本均调出对应存档HE染色切片，经有经验病理科医师重新阅片后予确诊，病理资料完整，取病理前均未进行放化疗及内分泌治疗。患者年龄53～73岁，中位年龄62岁，根据Gleason评分系统进行病理分级，高分化组（1～4分）5例，低分化组（5～10分）7例。

同时收集8例2014年于我院行手术切除，经病理证实为良性前列腺增生的石蜡标本作为对照，8例良性前列腺增生的石蜡标本均调出对应存档HE染色切片，经有经验病理科医师重新阅片后予确诊。患者年龄52～86岁，中位年龄71岁。

1.2免疫组织化学检测

SRSF1一抗SF2/ASF（C-19）购自Santa公司，工作浓度1∶100；Survivin一抗Anti-Survivin antibody ab24479购自Abcam公司，工作浓度1∶1 000；羊的免疫组化二抗试剂盒、兔的羊疫组化二抗试剂盒、DAB染色剂，购自福州迈新公司。按照免疫组化SP法说明书操作，采用10 mmL/L的柠檬酸抗原修复液（pH 6.0）高温修复抗原3 min，以PBS替代一抗作为阴性对照。

1.3结果判定

SRSF1以细胞核有黄至棕黄色颗粒者为阳性细胞，Survivin以细胞核或细胞质有黄至棕黄色颗粒为阳性细胞。使用Nikon eclipse 80i显微镜进行图像采集和计数，在400倍镜下计数至少5个视野，取其平均值作为该病例的细胞阳性率。

1.4统计学处理

采用SPSS 13.0软件进行统计分析，细胞阳性率的比较采用t检验进行分析，不同指标的相关性采用Spearman等级相关分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1SRSF1和Survivin蛋白在前列腺癌组织和前列腺良性增生组织中的表达

2.1.1SRSF1蛋白在前列腺癌组织中的表达：前列腺癌组织中SRSF1蛋白在癌细胞核染色较多，呈棕黄色，周围正常组织未见着色。SRSF1蛋白在前列腺癌组织中的细胞阳性表达率显著高于良性前列腺增生［（76.37±5.06）%vs（11.30±1.09）%，P＜0.05］，见图1。

2.1.2Survivin蛋白在前列腺癌组织中的表达：前列腺癌组织中Survivin蛋白在癌细胞核及胞质中均有染色，但以胞质弥漫性分布为主，呈棕黄色。Survivin蛋白在前列腺癌组织中的细胞阳性表达率显著高于良性前列腺增生［（86.93±3.21）%vs（17.67±1.99）%，P＜0.05］，见图2。

图1　SRSF1在不同分化前列腺组织中的表达×400Fig.1 Expression of SRSF1 in different degree of prostate lesions×400

2.2SRSF1和Survivin蛋白在前列腺癌组织中的表达与病理Gleason分级的关系

图2　Survivin在分化不同前列腺组织中的表达×400Fig.2 Expression of Survivin in different degree of prostate lesions×400

2.2.1SRSF1蛋白在前列腺癌组织中的表达与病理Gleason分级的关系：SRSF1蛋白在前列腺癌组织低分化组的阳性细胞表达率显著高于高分化组［（81.81±6.78）%vs（68.75±2.09）%，P＜0.05］，见图1B、1C。

2.2.2Survivin蛋白在前列腺癌组织中的表达与病理Gleason分级的关系：Survivin蛋白在前列腺癌组织低分化组的阳性细胞表达率显著高于高分化组［（90.36±4.30）%vs（82.14±1.58）%，P＜0.05］，见图2B、2C。

2.3SRSF1和Survivin蛋白在前列腺癌组织中表达的相关性

Spearman等级相关分析表明，SRSF1和Survivin蛋白的表达具有正相关性性（r=0.9779，r的t检验，t=14.81，P＜0.05）。

3　讨论

SRSF1是SR蛋白家族的一员，作为Pre-mRNA的可变剪接因子，在维持细胞的基本生命活力方面发挥重要作用［4］。近来研究［6］表明，SRSF1为原癌蛋白，在肺癌、乳腺癌、系统性红斑狼疮及白血病等人类肿瘤细胞中存在过表达现象。Li等［7］研究发现下调B淋巴细胞系的SRSF1表达，会使细胞分裂停止在G2期，同时诱导细胞凋亡的发生，而SRSF1的过表达对于维持肿瘤的早期稳定性非常重要。可见，SRSF1能通过调节细胞的凋亡程序，参与到肿瘤的发生、发展中。SRSF1在前列腺癌中的表达相关研究目前很少，仅Mavrou等［8］在研究中指出SRSF1在前列腺癌组织中高表达，但在正常前列腺组织及前列腺上皮内瘤组织中未见明显增高。本研究证实了SRSF1在前列腺癌中存在高表达，同时还发现SRSF1的阳性表达率在前列腺良性增生中表达极低（11.30%），在前列腺癌组织中高达76.37%，并与前列腺癌病理Gleason评分呈正相关（P＜0.05），即癌细胞分化越差，SRSF1蛋白的表达就越高，这提示SRSF1的异常表达能影响前列腺癌的发展，与参考文献的报道是一致的。

Survivin蛋白是凋亡抑制蛋白家族中的成员之一［9］，在肺癌、前列腺癌、胃肠道肿瘤、淋巴细胞瘤等多种肿瘤中研究显示Survivin是迄今为止发现的作用最强，同时也是该家族成员中最小的1个凋亡因子。Survivin可以使细胞不受凋亡诱导因子的刺激而保持有丝分裂，甚至可以使细胞不受放疗及化疗的影响［10］。Survivin在正常成人组织中几乎不能发现，但在人类肿瘤组织中却存在高表达，包括前列腺癌［11］。国内高吴阳等［12］报道，Survivin蛋白在前列腺癌组织中的表达率为80.59%，且与病理分级、临床分期、淋巴转移相关（P＜0.05），而在正常前列腺组织中未见明显表达。本研究证实了Survivin在前列腺癌中的高表达，同时还发现Survivin的阳性表达率在前列腺良性增生中表达极低（17.67%），在前列腺癌组织中高达86.93%，并与前列腺癌病理Gleason评分呈正相关（P＜0.05），这表明在前列腺癌组织中Survivin表达越强，癌细胞的分化就越差，提示Survivin的异常表达程度与前列腺癌的恶性程度呈正相关。这与目前的文献报道是相符合的。

目前的研究仅报道了SRSF1或者Survivin在前列腺癌中的表达，二者的相关性研究鲜有报道，本研究对SRSF1和Survivin的表达进行了相关性分析，结果呈正相关，即随着SRSF1蛋白的表达强度增加，Survivin蛋白的表达强度也增加，二者可能在前列腺癌细胞抗凋亡过程中发挥着协同作用，但二者如何协同作用机制尚不清楚，这也是日后的研究重点。目前在肿瘤细胞中，有研究［13］显示Survivin蛋白的高表达与mTOR通路有关。Jin等［14］报道在肺癌中，mTOR通路可以通过烟草等致癌物质来调节Survivin的蛋白合成。在前列腺癌中，被胰岛素生长因子Ⅰ激活的mTOR通路，已经被证实能够维持Survivin的稳定性与增强其转录［15］。又有研究［5］指出，mTOR通路的激活发生在mRNA水平，同时这些mRNA的剪接加工有SRSF1剪接因子的参与［16］，Ezponda等［5］研究报道在非小细胞肺癌中，Survivin为SRSF1参与抑制细胞凋亡过程中的一个中介物质，SRSF1的过表达可以增强Survivin的mRNA转录表达，同时可以维持在激活mTOR通路时Survivin的稳定性。这与本文SRSF1和Survivin在前列腺癌中的表达相关性研究一致，基于以上文献报道和本研究结果大胆猜测：在前列腺癌中，SRSF1扮演着Survivin蛋白转录表达的上游调节角色，SRSF1蛋白的表达能够调控Survivin蛋白的表达，从而在前列腺癌的发生发展中发挥作用。同时SRSF1也有希望成为前列腺癌治疗中的新靶点。

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［3］Monzo M，Rosell R，Felip E，et al.A novel anti-apoptosis gene：reexpression of survivin messenger RNA as a prognosis marker in nonsmall-cell lung cancers［J］.J Clin Oncol，1999，17（7）：2100-2104.

［4］Karni R，de Stanchina E，Lowe SW，et al.The gene encoding the splicing factor SF2/ASF is a proto-oncogene［J］.Nat Struct Mol Biol，2007，14（3）：185-193.

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（编辑于溪）

Correlations between the Expressions of SRSF1 and Survivn and the pathological Features of prostate Cancer

XIAO Bangming，ZHU Xingwang，DONG Liming，LIU Yili，WANG Ping
（Department of Urinary Surgery，The fourth Affiliated Hospital of China Medical University，Shenyang 110032，China）

Objective To test the expression of serine/arginine rich splicing factor 1（SRSF1）and apoptosis inhibiting factor（Survivin）in prostate cancer，and study their correlation with the pathological features of prostate cancer，so as to put forward the new targets in the treatment of prostate cancer.Methods SRSF1 and Survivin protein was determined in 20 prostate tissue samples including prostate cancer（n=12）and benign prostatic hyperplasia（n=8）by immunohistochemical SP method.SRSF1 and Survivin was correlated to pathological features，and both the relevance was analyzed（no related reports at home and abroad）.Results The positive expression rate of SRSF1 protein in prostate cancer tissue cells was 76.37± 5.06%，which was significantly higher than that of benign prostatic hyperplasia（11.30%±1.09%，P＜0.05）；the positive expression rate of Survivin protein in prostate cancer tissue cells was 86.93%±3.21%，which was significantly higher than that of benign prostatic hyperplasia（17.67%±1.99%，P＜0.05）；SRSF1 and Survivin protein expressed in prostate cancer organizations and were positively correlated to pathological Gleason grading，and there was significant correlation（P＜0.05）.Conclusion SRSF1 and Survivin protein were highly expressed in adenocarcinoma tissue，which were significantly increased than that of benign hyperplasia of prostate tissue.The positive expression SRSF1 and Survivin protein were positively correlated to pathological Gleason grading.The expression of Survivin protein was elevated with the expression of SRSF1 protein in prostate cancer. These preliminary evidence indicated that SRSF1 may up-regulate the expression of Survivin，and thus promote the occurrence and development of prostate cancer.

prostate cancer；benign prostatic hyperplasia；serine/arginine rich splicing factor 1；Survivin；immunohistochemical

R737.25

A

0258-4646（2016）05-0452-04

10.12007/j.issn.0258-4646.2016.05.018

肖邦明（1988-），男，硕士研究生.

王平，E-mail：cmu4h-wp@126.com

2015-05-28

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