酸枣仁中酸枣仁皂苷A、B及斯皮诺素的动态研究*

郭　慧，崔莹莹，焦梦娇，郑玉光

(河北中医学院，河北　石家庄　050200)



酸枣仁中酸枣仁皂苷A、B及斯皮诺素的动态研究*

郭慧，崔莹莹，焦梦娇，郑玉光

(河北中医学院，河北石家庄050200)

建立了PHLC-UVD测定酸枣仁中酸枣仁皂苷A、B及斯皮诺素含量的方法。并对河北省北部地区和中南部地区8个不同采收时间酸枣仁中酸枣仁皂苷A、B及斯皮诺素的含量进行测定。以期为确定河北产酸枣仁最佳采收期提供一些依据。研究发现，不同采收时间酸枣仁中有效成分含量差别很大。结果表明，河北中南部地区酸枣仁的较佳采收期为9月中旬，北部地区为10月中旬；河北中南部产酸枣仁质量较好。

酸枣仁；采收期；高效液相；酸枣仁皂苷；斯皮诺素

酸枣仁为鼠李科植物酸枣[Ziziphus jujube Mill.Var.spinosa(Bunge)Hu ex H.F.Chou]的干燥成熟种子。具有养心补肝，宁心安神，敛汗，生津的功效，用于惊悸多梦，虚烦不眠，体虚多汗，津伤口渴等症[1],为中医首选安神药。现代药理研究表明，酸枣仁具有镇静催眠[2]、降压[3]降脂[4]、抗脂质过氧化[5]、抗心肌缺血[6]、护脑[7]、改善记忆障碍[8]等作用。由于酸枣仁自古以来的良好治疗效果，以及现在人们生活水平提高对养生药物需求的增加，因此市场对酸枣仁这种药食同源品的需求量越来越大，关注度持续上升。

目前药材市场的酸枣仁主要来源于野生品种。由于野生酸枣没有归属权，因此野生酸枣在刚刚结出果实的时候便被当地的村民争相采收，当地称之为“抢青”。“抢青”的酸枣仁较为干瘪，出仁率低，临床疗效不理想。最终导致药农实际的经济收益降低，影响药农来年的采收积极性，这也是近几年酸枣仁市场价格大幅波动的原因之一。

此外，不同产地的中药质量也有很大差异。由于地形地貌、环境、海拔高度等因素的影响，也会影响酸枣仁质量的差别。目前尚未建立酸枣仁的GAP基地标准，对不同产地的酸枣仁进行质量评价，有助于建立酸枣仁药材的标准化种植及道地药材的质量控制。

由于河北省南北纬度跨度较大，南部和北部地区节气差距较大，因此本课题组对河北南部和北部产酸枣仁有效成分进行动态监测，为确定酸枣仁最佳采收期提供理论依据。

1　仪器和材料

LC-15C高效液相色谱仪，岛津；SPD-15C紫外检测器；MSE125P-100-DU分析天平。

乙腈(色谱纯)，赛默飞世尔科技(中国)有限公司；水为娃哈哈纯净水；其余试剂为分析纯。

酸枣仁皂苷A、B和斯皮诺素对照品(批号分别为110734-200611、110814-200607、111869-201203，购自中国药品生物制品检定所)；酸枣仁供试药材去核、粉碎机粉碎，过60目筛。

2　方　法

2.1色谱条件

色谱柱为WondasilTMC18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；乙腈(A)-水(B)为流动相进行梯度洗脱；斯皮诺素的运行时间30 min，0～10 min，12%A～19%A，10～18 min，19%～20%，18 min～30 min，20%～50%；酸枣仁皂苷A、B的运行时间38 min，0～15 min，20%A～35%A，15～35 min，35%～35%A，35～38 min，35%～70%A；柱温均为25 ℃；流速均为1 mL·min-1；斯皮诺素的检测波长为335 nm，酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B的检测波长为204 nm；进样体积10 μL。

2.2供试品溶液的制备

取酸枣仁样品约5 g，精密称定，加石油醚(60～90 ℃)100 mL，超声1 h，弃去石油醚液，药渣挥去溶剂，转移至250 mL 圆底烧瓶中，加入70%乙醇100 mL，加热回流2 h，滤过，滤渣用70%乙醇25 mL洗涤，合并洗液与滤液。挥干溶剂，残渣加水50 mL溶解并转移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇萃取4次，每次20 mL，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，取续滤液，即得。

2.3对照品溶液的制备

分别取斯皮诺素、酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B适量，精密称定，加甲醇溶解，定容，摇匀，分别制成对照品溶液，过0.45 μm微孔滤膜，取续滤液。

2.4系统适用性实验

取供试品溶液10 μL，进行含量测定，要求斯皮诺素、酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B的理论塔板数不低于7000，且与其他成分分离良好(见图1、图2)。

图1　斯皮诺素高效液相色谱峰

图2　酸枣仁皂苷高效液相色谱峰

2.5方法学考察

2.5.1线性关系考察

分别取干燥至恒重的斯皮诺素、酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B对照品1 mg定容于5 mL容量瓶，制备成对照品溶液。分别精密吸取斯皮诺素、酸枣仁皂苷A和B对照品溶液2、4、6、8、10、12 μL，在上述色谱条件下进行检测，以质量对色谱峰面积进行线性回归，回归方程分别为：Y=2399422X+11110.71，r=0.9998642；Y=53695.73X+10777.25，r=0.9998301；Y=55573.01X-3770.401，r=0.9994806。结果表明斯皮诺素、酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B分别在0.404～2.424 μg、0.468～4.68 μg、0.392～3.92 μg范围内线性关系良好。

2.5.2精密度实验

取上述对照品溶液10 μL连续进样5次，测定峰面积，计算RSD值分别为0.6826%、0.6610%、2.7769%，表明本法精密度良好。

2.5.3稳定性实验

所测供试品溶液室温放置0、3、6、12、24 h进样测定，斯皮诺素、酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B峰面积的RSD(n=5)值分别为2.1352%、1.1503%、2.3382%，表明样品在24 h内稳定。

2.5.4重复性实验

根据外标两点法计算同一批次酸枣仁5份样品的中斯皮诺素、酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B的含量，其结果显示斯皮诺素、酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B含量的RSD(n=5)值分别为0.7031%、1.8010%、2.1478%，表明该样品制备方法的重复性较好。

2.5.5加样回收实验

精密称定酸枣仁药材1 g，共6份，分别加入相同含量的对照品，测定斯皮诺、酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B的平均加样回收率分别为101.42%、100.43%、100.99%；RSD(n=6)值分别为2.0118%、1.3865%、2.6826%，表明该方法具有良好的准确度。

2.6样品测定

分别精密称定8份酸枣仁样品粉末，按“2.2”项方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件，取供试品溶液10 μL，进行测定，以外标法、两点法分别计算8份酸枣仁样品中斯皮诺素、酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B的含量。结果见表1、表2。

表1　河北中南部产酸枣仁有效成分测定

表2　河北北部产酸枣仁有效成分测定

3　讨　论

根据河北省所采8份样品的测定结果分析，不同产地的酸枣仁中所含斯皮诺素、酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B的含量存在显著差异，南部地区的成分含量高于北部地区。野生酸枣树喜阳，耐碱、耐寒、耐旱、耐瘠薄，不耐涝，适应性强，一般在陡峭的山坡上比较常见，河北地区有燕山和太行山山地适合其生长，而南北地区酸枣仁的质量存在差异可能是经纬度不同、气候差异等原因所导致。河北南部地区，酸枣仁的较佳采收期为9月中旬；河北北部地区酸枣仁的较佳采收期为10月中旬。长城是河北省气温分布的重要界限，长城以北地区年平均气温低于10 ℃，长城以南高于10 ℃，中南部地区年平均气温在12 ℃以上。野生酸枣树喜阳，河北中南部地区，年平均气温较北部地区高，这可能是影响酸枣仁采收期的因素，有待进一步研究。有文献报道，土壤和气候是影响中药材中次生代谢产物形成和积累的关键环境因素，而现阶段中药材采收期研究却常常忽视环境因素的影响[6],造成酸枣仁的质量差异因素的分析，还应从多方面考虑。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(1部)[M].北京:中国医药科技出版社, 2010:343.

[2]郭胜民,范晓雯,何建伟,等. 酸枣仁总黄酮的中枢抑制作用[J]. 中药材. 1998,21(11):578-579.

[3]张典,袁秉祥,孙红. 酸枣仁总皂苷对原发性高血压大鼠降压作用[J]. 西安交通大学学报(医学版), 2003,24(1):59-60.

[4]袁秉祥,张庆. 酸枣仁总皂苷对大鼠血脂和血脂蛋白固醇的影响[J]. 中国药理学报, 1990,6(1):34-36.

[5]万华印,丁力,孔祥平,等. 酸枣仁总皂苷抗脂质过氧化作用[J]. 中草药, 1996,27(3):103.

[6]陈兴坚,余传林,刘菊芳. 酸枣仁总皂苷对培养大鼠心肌细胞的保护作用[J]. 中国药理学报, 1990,11(2):153.

[7]白晓玲，黄志光，莫志贤,等. 酸枣仁总皂甙对大鼠脑缺血损害及脑组织生化指标的影响[J]. 中国中药杂志， 1996,21(2):110-112.

[8]吴尚寐,袁秉祥,马志义. 酸枣仁油对小鼠学习记忆的影响[J]. 中草药, 2001,32(3):246-247.

Study on the Regulation of Dynamic Accumulation of Jujuboside A,B and Spinosin in Semen Ziziphi Spinosae*

GUOHui,CUIYing-ying,JIAOMeng-jiao,ZHENGYu-guang

(Hebei University of Chinese Medicine, Hebei Shijiazhuang 050200, China)

A HPLC-UVD method for determination of Jujuboside A, B and Spinosin in Semen Ziziphi Spinosae was established. Jujuboside A, B and Spinosin in the 8 different picking times Semen Ziziphi Spinosae from Northern Hebei and Central and Southern Hebei were determined. There were differences in the contents of the effective components in Semen Ziziphi Spinosae at different collecting time. The results showed that the optimal harvest time of Semen Ziziphi Spinosae was mid-September in Central and Southern Hebei, mid-October in Northern Hebei. The quality of Semen Ziziphi Spinosae from Central and Southern Hebei was good.

semen ziziphi spinosae; harvest period; HPLC; Jujuboside; Spinosin

2015年河北省大学生创新创业训练计划项目(No: 201514432013)。

郭慧(1994-)，女，学生，中药学专业。

崔莹莹(1980-)，女，讲师，主要从事中药质量标准研究。

R284.1

A

1001-9677(2016)07-0080-03