超声提取法测定大别山区金樱子多糖的含量*

周恩红，李　峰

(皖西卫生职业学院，安徽　六安　237005)



超声提取法测定大别山区金樱子多糖的含量*

周恩红，李峰

(皖西卫生职业学院，安徽六安237005)

采用超声波法设计其正交试验，以大别山区金樱子多糖的含量检测为指标,在超声温度80 ℃，大别山金樱子原料液比1:20，超声功率180 W，超声时间20 min条件下，测得金樱子多糖的平均含量为30.56%，与实验中最佳条件下测定值基本一致。通过探讨其回收和稳定性实验效果，进一步说明此方法准确度较高、重现性较好。

大别山金樱子；超声法；正交试验；多糖测定

大别山地处鄂豫皖三省交界处，是全国药源宝库之一，据《大别山药物志》等相关文献记载，整个大别山地区分布的药用物种共有1413种，而金樱子在大别山区更是常见。著名的《本草纲目》中有着这样的记载:金樱子，性酸，涩，平，无毒；主治脾泻下痢，止水便利，涩精气；久服，令人耐寒轻身，补血益精，有奇效[1]。现代有研究表明,金樱子中含有丰富的多糖、黄酮等物质，通过药理实验发现金樱子中的多糖具有抗炎、抗菌、抗病毒等作用[2～4],具有广泛的应用价值,因此运用简便有效的方法提取金樱子中多糖具有重要意义。本研究将超声波运用于金樱子中多糖的提取,通过阅读相关文献找出单个因素对提取效果的影响,再将其进行正交试验确定最佳的实验条件，为大别山区金樱子资源开发提供一定的实验依据。

1　实　验

1.1材料、试剂

金樱子，购于大别山区药材市场，经药学系中药专业教师鉴定为金樱子果实。

实验中所用的苯酚、浓硫酸、葡萄糖、乙醚、乙醇等试剂均为分析纯。

1.2主要仪器

755B紫外可见分光光度计，北京普析通用仪器有限公司；KQ2200DE型数控超声波清洗器，昆山超声仪器有限公司。

1.3原料处理及检测方法

1.3.1原料处理

将金樱子干燥后粉碎过40目筛，制成干粉放入棕色试剂瓶中备用。

1.3.2检测方法

1.3.2.1标准曲线的绘制

标准溶液的制备：以葡萄糖为标准物质配置浓度为0.01 mg/mL的标准溶液。

标准曲线的绘制：采用文献[5]中苯酚-浓硫酸法，准确移取葡糖糖标液0.5，1.5，3，4.5，6，7.5 mL分别置于25 mL带塞子试管中标上1、2、3、4、5、6号, 然后在各编号试管中,加入2.5 mL5%苯酚溶液,充分震荡,然后再加入10 mL的浓硫酸,摇匀盖上塞子,放置30 min后备用。选用3号标准溶液在400～600 nm波长处测定其吸收率, 通过光谱曲线确定在490 nm条件下测定1、2、3、4、5、6号标准液的吸光度。

1.3.2.2超声波法的正交试验

表1　超声波法的正交试验

1.3.2.3回收实验

为了判断分析过程是否存在系统误差，本实验选择同样3组金樱子样品，分别向样品加入一定量的标准葡萄糖溶液进行回收实验。

1.3.2.4稳定性实验

为了说明我们选择的方法简单、易操作、稳定好，本实验选择同样的金樱子样品，分别在让6组12名2014级药学系药物分析专业学生按照最佳条件进行重复性实验。

2　结果与讨论

2.1标准曲线

以配制的葡萄糖标准溶液浓度c(mg/mL)为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘出标准曲线，从图1中可以看出在490 nm处，运用苯酚-浓硫酸法测定的葡萄糖含量线性范围较宽，方法准确可行，其回归方程为A=10.6c-13.4。

图1　葡萄糖的标准曲线

2.2超声法正交试验的结果

采用超声提取法进行正交试验，从表2中的数据可以直观的看出，本研究所选择的4个影响因素对金樱子多糖含量的测定效果为B>A>C>D。其中料液比(B)和反应温度(A)影响最为明显，金樱子多糖提取率都在20 mg/mL以上，超声功率(C)和超声时间(D)对样品中多糖的提取影响稍小，一般在20 mg/mL以下。综合这4种因素的影响，本实验选择最佳组合为：A3B1C3D2。故本实验测定大别山金樱子多糖含量选取在超声温度80 ℃，料液比1:20，超声功率180 W，超声时间20 min下进行，提取率最高。

表2　超声提取法正交试验及金樱子多糖含量

2.3超声法回收实验的结果

将3组相同的样品编上编号1、2、3分别在超声温度80 ℃，料液比1:20，超声功率180 W，超声时间20 min下依照本实验中多糖含量测定方法进行回收实验。从表3可以看出，样品中大别山金樱子多糖的初始含量分别为30.57%、30.55%、30.58%，与上面正交试验序号7基本一致，然后向样品中分别加入初始量的0.5、1.0、1.5倍后再测定其样品中回收的总糖量分别达到47.50%、64.29%、74.74%，计算出回收率103.6%、105.2%、97.8%，从1、2、3号样品的相对标准偏差RSD值2.5%、2.7%、2.6%可以看出非常接近，因此，我们有理由认为本实验无明显系统误差，方法可行，结果可靠。

表3　超声法回收实验结果

2.4超声法稳定性实验的结果

在2014级药物分析专业学生中抽取12名学生，将其分均为6组，再将金樱子样品分配给各小组，然后依照本实验中最佳的条件进行多糖含量的测定，结果见表4。从表4的数据中明显反应出，6组学生进行实验分别测定的金樱子多糖含量为30.53%、30.61%、30.55%、30.57%、30.54%、30.56%，6组值之间相差甚小且都与正交试验第7组接近，再计算此方法的相对标准偏差RSD为0.32%，因此，进一步说明本实验得出在超声温度80 ℃，料液比1:20，超声功率180 W，超声时间20 min下进行金樱子多糖含量测定，方法稳定，结果可信。

表4　超声法稳定性实验结果

3　结　论

本实验旨在发展经济普适的金樱子多糖提取工艺，在查阅相关文献的基础上，以大别山区常见的药材金樱子为样本，通过选用超声波法设计其正交试验，以最终样品中多糖的含量为检测指标,筛选出最佳的工艺条件：超声温度80℃，大别山金樱子原料液比1:20，超声功率180 W，超声时间20 min。在此提取条件下,测得大别山区金樱子多糖的平均含量为30.56%。通过其回收和稳定性实验，进一步验证了采用超声波法，在最佳的提取条件下，测定大别山金樱子多糖的含量，具有简便、易操作、稳定性好、准确度较高的特点，为大别山区药材的开发利用提供一定的实验基础。

[1]李时珍.本草纲目(下册)[M].北京:人民卫生出版社,1978:2096-2097.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社,2010.

[3]赵云涛,国兴明,李付振.金樱子多糖的抗氧化作用[J].生物学杂志，2003，20(2):23-24.

[4]刘晓红,肖凯军.金樱子粗多糖的脱蛋白研究[J].食品科技,2007(1):102-104.

[5]文全泰，潘廷啟，颜祖弟,等.正交设计优化金樱子多糖的酶提取工艺研究[J].右江民族医学院学报,2012(4):465-467.

[6]王建安,苑光辉，李艳芝,等.超声法提取金叶女贞果实中多糖工艺的研究[J].南京师大学报(自然科学版),2012,35(4):73-76．

Content of Polysaccharides from Rosa laevigata Michx by Ultrasonic Extraction Method*

ZHOUEn-hong,LIFeng

(West Anhui Health Vocational College, Anhui Lu’an 237005，China)

In order to detection the content of polysaccharide form the fructus of Rosa laevigata Michx in the dabie mountain area, the orthogonal experiment should be designed by ultrasound method. The average content was 30.56% of the polysaccharide from Rosa laevigata Michx, under the determination conditions of 80 ℃, the ratio of liquid raw material about 1:20, with ultrasonic power of 180 W, ultrasonic time of 20 min. The result was closed with the best possible experimental conditions. Therefore, by discussing the recovery and stability of the experiment effect, the result showed that this method was high accuracy and good reproducibility.

fructus rosae laevigatae of dabie mountains; ultrasonic method; orthogonal experiment; determination of polysaccharide

安徽省教育厅自然科学研究一般项目(KJ2011B203)；安徽省2015年度高校自然科学研究基金重点项目(No:KJ2015A427)；2016年度安徽省自然科学研究一般项目(KJ2016B02)。

周恩红(1983-)，女，讲师，主要从事环境分析及药物分析。

O656.3

A

1001-9677(2016)07-0067-03