羊四苗分点同时免疫与单苗免疫对比试验

姚菊霞，祁广仪，任宝玺，朱 瑗，刘芳农（.定西市动物疫病预防控制中心，甘肃定西743000；.通渭县畜牧兽医服务中心）

羊四苗分点同时免疫与单苗免疫对比试验

姚菊霞1，祁广仪2，任宝玺2，朱 瑗1，刘芳农1
（1.定西市动物疫病预防控制中心，甘肃定西743000；2.通渭县畜牧兽医服务中心）

为探索不同组合的免疫方法对其抗体产生的影响，确立合理有效的免疫程序。试验将口蹄疫、羊三联四防、小反刍兽疫和羊痘4种疫苗进行不同组合，即分别进行单苗单独、两两组合、三三组合、4种疫苗同时分点注射，共分为15组，每组20只，对各组免疫后副反应观察和抗体水平检测。结果表明：口蹄疫、三联四防、小反刍兽疫和羊痘4种疫苗分点同时注射组产生的抗体水平，与单苗注射组相比，差异不显著（P﹥0.05），疫苗注射后产生的抗体效价相对较高且稳定，不同疫苗产生的抗体之间相互干扰、拮抗作用不明显，抗体合格率分别在70%以上，均能达到国家规定的免疫要求，因此该免疫接种方法在实际工作中可推广应用。

羊疫苗；不同组合；分点注射；免疫抗体；合格率

近年来，国家对动物疫病防控工作高度重视，实施强制免疫的动物疫苗种类较多且逐年增加，目前正在使用的羊疫苗主要有口蹄疫、三联四防、小反刍兽疫、羊痘4种疫苗。每年春秋两季按照“一畜一针，分次注射”传统免疫方法程序复杂，基层动物防疫工作量大，重复注射次数多，耗费时间长，工作效率低，免疫效果差，人力、物力、财力资源浪费严重，直接影响动物防疫水平和防疫质量。为了探索和创新动物免疫新方法，改进和提高动物防疫水平，2013 ～2015年在通渭县开展了羊口蹄疫苗、三联四防苗、小反刍兽疫苗、羊痘苗分组分点同时免疫试验以及扩大群体试验研究，从而确定羊4种疫苗分点同时免疫的新型免疫操作程序。

1 材料与方法

1.1 试验动物

在通渭县辖区随机选择5个存栏量100只左右的养羊场，选取2～3月龄未经任何疫苗免疫的健康绵羊300只作为试验羊，免疫前对试验羊进行基础抗体滴度测定，所选试验羊布鲁氏菌病抗体阴性，口蹄疫感染抗体阴性，免疫抗体滴度低于1∶16的选择为试验对象。

1.2 试验疫苗

口蹄疫O型－亚洲I型二价灭活疫苗（OS＋JS株），中牧实业股份有限公司兰州生物制药厂生产，批号1412003；羊快疫、猝狙、羔羊痢疾、肠毒血症三联四防灭活疫苗，山东绿都生物科技有限公司生产，批号1407009；小反刍兽疫活疫苗，新疆天康畜牧生物技术股份有限公司生产，批号2014046－2；山羊痘活菌苗，哈尔滨维科生物技术开发公司生产，批号2014008。

1.3 检测试剂

口蹄疫O型抗体检测试剂盒，购自兰州兽医研究所，批号2015550511201；小反刍兽疫竞争ELISA抗体检测试剂盒，购自兰州兽医研究所，批号20150529118；山羊痘间接ELISA抗体检测试剂盒，购自兰州兽医研究所，批号20150603119；暂无羊三联抗体检测试剂盒。

1.4 试验分组

将选取5个养羊场的300只试验羊，分别编号1～300号，随机分成15组，每组20只，依次为第1 组1～20号、第二组2～40号……第15组281～300号。

1.5 免疫方法

按照表1所示进行1～4种疫苗注射。单组疫苗免疫，注射部位为左右颈部；3种疫苗和4种疫苗同时分点免疫，注射部位为颈部左右和臀部左右各注射一针。注射时严格消毒，规范操作。免疫剂量：口蹄疫疫苗1mL／只，羊三联灭活苗5mL／只，小反刍兽疫活疫苗1mL／只，山羊痘活菌苗1mL／只。

表1 试验羊疫苗注射分组表

1.6 临床不良反应观察

所有试验羊在免疫注射后进行临床观察7～10 d，主要观察羊只的精神状况、采食、体温是否正常和是否有其他严重不良反应等。

1.7 免疫抗体检测

分别于免疫后15、30、45d和60d经前腔静脉采血，分离血清，用于抗体检测。（1）O型口蹄疫抗体检测：采用正向间接血凝试验，具体操作参照试剂盒说明书进行。判定标准：抗体效价≥1∶32，抗体阳性；抗体效价＜1∶32，抗体阴性。（2）羊痘抗体检测：采用间接ELISA方法检测，具体操作参照试剂盒说明书进行。判定标准：OD450≥0.25，抗体阳性；OD450≤0.2，抗体阴性。（3）小反刍兽疫抗体检测：采用竞争ELISA方法，具体操作参照试剂盒说明书进行。判定标准：PI≥45%，抗体阳性，PI＜45%，抗体阴性。

1.8 数据统计与分析

检测数据按接种疫苗的种类进行分类统计，口蹄疫、羊痘和小反刍兽疫均以抗体阳性率表示，并应用DPS数据处理系统中单因素随机分组方法进行方差分析。

2 结果与分析

2.1 临床观察

4种疫苗分组试验注射后，在24h内个别羊只陆续出现精神沉郁、体温升高、慢草不食、饮水少量、跛行等副反应现象；有副反应症状的主要是口蹄疫疫苗注射组，羊三联苗注射组个别羊只有跛行症状，其它组未见明显临床症状。多种疫苗注射组与单苗注射组出现临床症状的副反应率没有明显差异，平均副反应率15%以下。有临床症状的羊只48h内全部恢复正常，未出现过敏死亡情况。

2.2 不同免疫组口蹄疫抗体产生情况

从表2可以看出，每组试验于15d时抗体水平基本都达到最高值，且维持时间较长，第60d时仍维持较高水平，抗体阳性率均在70%以上。与其他组相比，第1组抗体水平较低，下降较快，且第1组与第15组之间差异显著（P＜0.05），除第1组外其他各组之间差异不显著（P＞0.05）。

表2 口蹄疫抗体检测结果

2.3 不同免疫组羊痘抗体产生情况

从表3中可以看出，第10组抗体产生时间早，15d达到最高值，第9组、12组、14组在30d时抗体达到最高值，第4组、7组、13组、15组在45d时抗体达到最高值，除第4组和第7组外其余试验组抗体合格率于15d均已达到了国家规定70%的免疫要求，且维持时间较长。方差分析显示，第15组与其他各组之间差异不显著（P＞0.05）。

2.4 不同免疫组小反刍兽疫抗体产生情况

从表4中可以看出，每组试验动物在15d时已产生较高水平的抗体，30～45d抗体达到最高值，60d时抗体水平仍保持较高水平稳定态势。方差分析显示，第15组与其他各组之间差异不显著（P ＞0.05）。

表3 山羊痘抗体检测结果

表4 小反刍兽疫抗体检测结果

3 结论

口蹄疫、羊三联、小反刍兽疫、羊痘4种疫苗两两组合、三三组合、或4种疫苗同时分点注射，副反应率15%以下，与单苗注射组相比，临床症状差异不显著，未见不良反应加重现象。

第15组口蹄疫免疫抗体水平高于第1组，维持时间较长且稳定，表明口蹄疫、羊三联、小反刍兽疫、羊痘同时分点免疫的抗体水平要优于单苗免疫组。羊痘苗、小反刍兽疫苗产生的抗体效价均较高，在抗体产生的整个时期，单苗注射组和4种疫苗同时注射组在抗体达到最高值时抗体合格率都在75%以上，均能达到或超过国家规定的免疫标准70%以上，且维持时间也较长。从本次试验结果来看，一畜2苗、3苗、4苗分点同时注射后抗体产生过程中不会产生拮抗作用，反而在一定程度上还有促进协同作用。

通过对通渭县辖区30万只羊实施“一畜多苗多点同时联合注射效果研究”扩群试验，疫苗注射副反应率在15%以下，疫苗反应死亡率在1／10 000以下，血清抽样检测抗体合格率达70%以上。

口蹄疫、羊三联、小反刍兽疫和羊痘分点同时免疫对4种抗体的产生没有显著影响，没有增加免疫副反应，通过综合分析，可在实际工作中大规模推广“羊一畜多苗多点同时联合注射”免疫操作程序。

本次试验不足之处在于缺少羊三联抗体诊断试剂，项目实施中对羊三联的免疫效果未进行评价，影响试验的完整性；由于试验规模较大，对抗体监测时间较短，对分点免疫注射后抗体消长规律未能进行深入跟踪检测，有待在今后的工作中进一步完善。

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Contrast Test of Four Vaccine Immune Simultaneously at Different Points and Single Vaccine Immune in Sheep

YAO Ju－xia1，QI Guang－yi2，REN Bao－xi2，ZHU Yuan1，LIU Fang－nong1
（1.Dingxi Animal Disease Prevention and Control Center，Dingxi Gansu 743000 China；2.Tongwei Animal Disease Prevention and Control Center）

In order to determine the reasonable and effective immunization program，the different unities of vaccines impacting on the antibody production were explored.Four kinds of vaccines，including FMD vaccine，Combined Ovine／Caprine Clostridial Diseases Vaccine，Peste Des Petits Ruminants and Capripox，were immunized sheep through the procedures with respective single injection，every two or every three combinations and four vaccines immunized at the same time.The experiments were divided into 15groups，each group with 20sheep.The negetive effects and antibody levels in each group after immunization were observed.The results showed that antibody levels produced by four vaccines immunized at the same time had no significant differences in the antibody titers compared to that in single vaccine injection group.The mutual interference and antagonistic effects were not revealed between different vaccinations.The effective immune rate could reach more than 70%，which was coincided with the country standards.Therefore，the vaccination procedure can be popularized and applied in practical work.

Vaccines for sheep；different combinations of vaccines；injection at different points；antibody；qualified rate

S 852.4＋3

B

1004－6704（2016）03－0044－04

2015－09－17

姚菊霞1（1986－），女，甘肃通渭人，硕士，兽医师，主要从事动物疫病防治技术研究推广工作。