4种药用植物抗氧化活性的研究

卜凡强，杨超群，吕振兴，陈俊廷，张卫东，白丽明



4种药用植物抗氧化活性的研究

卜凡强1，杨超群1，吕振兴2，陈俊廷1，张卫东2，白丽明1

（齐齐哈尔大学 1. 化学与化工学院，2. 材料科学与工程学院，黑龙江 齐齐哈尔 161006）

采用DPPH法测定马兰、鼠曲草、刺五加和苍耳等4种药用植物醇提液的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和甲醇不同极性部位的抗氧化活性．结果表明，4种植物不同极性部位对DPPH均有清除作用，其中马兰的乙酸乙酯部位的清除作用最好．

马兰；刺五加；药用植物；DPPH；抗氧化活性

在人体产生的自由基及其诱导作用下，不仅能加速人体衰老还能引起多种疾病，抗氧化剂能有效清除自由基，延缓人体衰老和预防疾病．目前，常见的抗氧化剂多为合成制剂，动物实验研究表明，其对生物体有潜在的毒副作用[1-4]．因此，近年来寻找安全、无副作用的天然抗氧化剂逐渐成为研究热点[5-6]．我国是药用植物资源丰富的国家，丰富的中草药使用经验为寻找到天然抗氧化剂提供了便利条件．本文选取被传统医学认为兼具医疗和保健功效的４种中草药（马兰、鼠曲草、刺五加、苍耳），采用DPPH法，研究其不同极性部位的提取物清除自由基的抗氧化能力，旨在为上述药物的有效开发和利用提供理论依据．

1材料与试剂

1.1实验药材

马兰（2014年8月采于齐齐哈尔市嫩江江畔），鼠曲草、刺五加（购于江西药材批发中心），苍耳（采集于黑龙江省兰溪县）．经齐齐哈尔大学生命科学与农林学院杨晓杰教授鉴定为菊科马兰（），菊科鼠曲草（），五加科刺五加（），菊科苍耳（）．

1.2仪器与试剂

TU-1900型双光束紫外可见分光光度计（北京普希通用仪器有限公司）；HK-5200型超声波清洗器（上海汉克科学仪器有限公司）；HC-100型华晨高速多功能粉碎机（浙江省永康市金穗机械制造厂）；电子分析天平BS-124S（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）．DPPH（东京化工厂）；抗坏血酸（天津市光复精细化工研究所）；无水乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇等均为分析纯．

2实验方法

2.14种植物不同极性部位的制备

将干燥的4种植物各1 000 g粉碎，用乙醇（6 L）浸泡3 d后过滤，重复此过程4次，合并提取液，浓缩后加水依次用等体积石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取4次获得；甲醇部位是再次利用上述方法获得原浸膏后，利用硅胶柱色谱经100%乙酸乙酯洗脱后，再以100%甲醇作流动相洗脱得到的产物．将各部位萃取液水浴蒸干后减压干燥，置冰箱中冷藏，备用．

2.2DPPH溶液的配制及标准曲线的绘制

准确称取DPPH 0.002 0 g，加无水乙醇溶解，棕色瓶定容至50 mL，质量浓度为0.04 mg·L-1，作为储备液，最终以质量浓度依次为：0.002，0.004，0.008，0.010和0.015 mg·L-1作为实验测试质量浓度，并用紫外分光光度计在517 nm处测定其吸光度，绘制标准曲线．

2.3阳性对照品和样品溶液的配制

准确称取抗坏血酸标准品0.025 0 g，4种植物不同极性提取物各0.5 g，无水乙醇溶解，均以质量浓度5 mg·mL-1作为样品溶液，备用．

2.4DPPH自由基清除率的测定

在10 mL棕色容量瓶中，加入DPPH标准品储备液2 mL，再加入一定量的样品溶液，定容，最终各样品实验质量浓度分别为5，1，0.5，0.25，0.1，0.05和0.025 mg·mL-1，锡箔纸包裹避光，振荡并摇匀，静置30 min，置于1 cm比色皿中，波长517 nm处测得吸光度（i）；以无水乙醇2 mL代替DPPH重复上述实验，测得吸光度（j）；再分取无水乙醇、DPPH储备液2 mL，定容，测得吸光度（c）．平行测定3次．按公式计算样品溶液对DPPH自由基的清除率[7-8]．

2.5抗坏血酸对DPPH自由基的清除率

自由基清除率的测定：将质量浓度为5 mg·mL-1的抗坏血酸按2.4方法进行测定，对照溶液最终稀释浓度为5，1，0.5，0.25，0.1，0.05和0.025 mg·mL-1，并计算其清除率．

3结果与讨论

3.1DPPH标准工作曲线

取DPPH待测液，用无水乙醇溶剂作为空白参比，波长517 nm处测得各待测液吸光度．以DPPH质量浓度（mg·mL-1）为横坐标，吸光度为纵坐标做标准曲线（见图1）．标准曲线方程为：=493.43-0.070 1，2=0.997 7．

3.2不同部位提取物的清除率曲线

根据2.4的测定方法，测定了4种植物不同极性部位不同质量浓度的吸光度，并计算清除率，以清除率对各部位质量浓度作图，得到不同部位提取物的清除率曲线（见图2~5）．

由图2~5可见，在一定质量浓度范围内，DPPH的清除率（）与各部位的质量浓度（）呈正相关，4种植物4种极性部位在0.025~5 mg·mL-1质量浓度范围内，均有一定的清除DPPH自由基的能力，其中以植物马兰总体的清除率为最高，0.05 mg·mL-1质量浓度时，各极性部位的清除率已到达50%以上，且当质量浓度增大到5 mg·mL-1时，清除率几乎达到100%，超过阳性对照品c．不同极性部位不同质量浓度下4种植物表现出的对DPPH自由基清除效果不同，在所测试的0.025~5 mg·mL-1质量浓度范围内，石油醚和乙酸乙酯部位的清除率顺序均为：马兰＞刺五加＞苍耳＞鼠曲草；正丁醇和甲醇部位的清除率顺序均为：马兰＞刺五加﹥鼠曲草﹥苍耳；同时，在高质量浓度时，鼠曲草的清除活性有较大的增强．

4结语

通过测定4种天然药用植物和抗坏血酸对DPPH自由基的清除率，得出4种药用植物对DPPH自由基均有消除效果．而作为生长广泛，常被用于药食两用的植物马兰则表现出较强的抗氧化活性，有望通过分离获得安全、无毒的抗氧化化合物．

[1] 王和才，胡秋辉．DPPH法测定紫红薯提取物清除自由基的能力[J]．食品研究与开发，2010，31（1）：132-135

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[3] 林诗云，王炯，冯桂权，等．6种天然药提取物清除自由基和抗氧化活性研究[J]．云南民族大学学报：自然科学版，2010，19（3）：204-206

[4] 刘玉鹏，刘梅．30种中草药的抗氧化活性研究[J]．烟台大学学报：自然科学与工程版，2000，13（1）：70-73

[5] 陈玫，张海德，陈敏，等．几种中药的不同溶剂组分的抗氧化活性研究[J]．中山大学学报：自然科学版，2006，45（6）：131-134

[6] 谢学明，钟远声，李熙灿．22种华南地产药材的抗氧化性研究[J]．中药药理与临床，2006，22（1）：48-52

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Anti-oxidative activity of four medicinal plants

BU Fan-qiang1，YANG Chao-qun1，Lü Zhen-xing2，CHEN Jun-ting1，ZHANG Wei-dong2，BAI Li-ming1

（1. School of Chemistry and Chemical Engineering，2. School of Materials Science and Engineering，Qiqihar University，Qiqihar 161006，China）

To investigate the antioxidant activity of different polarities of four medicinal plants（，，，. Antioxidant activity of the petroleum ether fraction（EVP），acetic ether fraction（EVE），-butanol fraction（EVB）and methanol fraction（EVM） were determined by the DPPH assay. The results showed that different polarities of four medicinal plants are capable of clearing DPPH，among which the acetic ether fractionfromis the most effective.

；；medicinal plants；DPPH；antioxidant activity

Q946

A

10.3969/j.issn.1007-9831.2016.04.009

2016-02-17

黑龙江省大学生创新创业训练计划项目（201510221021）

卜凡强（1994-），男，黑龙江鸡西人，在读本科生．E-mail：669027608@qq.com

白丽明（1968-），女，黑龙江齐齐哈尔人，教授，博士，主要从事天然产物化学研究．E-mail：blm68@163.com

1007-9831（2016）04-0035-03