宫颈癌分子病理特征与其预后的相关性

樊孝琼



宫颈癌分子病理特征与其预后的相关性

樊孝琼

目的研究恩施地区宫颈癌患者的分子病理特征及其与预后的相关性。方法选取59例宫颈癌患者作为研究对象，对患者的survivin、p27、CD44v6、MMP-2、TIMP-2的蛋白表达情况和mRNA表达量与预后情况进行对比。结果患者5年总生存率为84.7%。患者survivin、MMP-2、CD44v6表达量与预后情况之间呈现负相关性(P<0.05)，TIMP-2蛋白和mRNA表达量与预后效果呈正相关(P<0.05)；p27表达量与预后效果无相关性(P>0.05)。结论恩施地区宫颈癌患者有良好的预后效果，其主要分子病理特点体现在survivin、MMP-2、TIMP-2、CD44v6的表达。

宫颈癌；分子病理特征；预后

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2016.07.012

(ThePracticalJournalofCancer,2016,31:1081～1083)

宫颈癌是妇科最为常见的1种恶性肿瘤，但临床特征不明显，而且其预后效果较差。近些年来宫颈癌发病呈现出低龄化的趋势，并且患病人数还在逐年上升[1]。恩施地区的居民有着自己独特的生活以及饮食习惯，调查显示此地区居民饮食中摄入微量元素硒的量远高于其他地区[2]，并且有报道指出微量元素硒以及其化合物对恶性肿瘤的增殖、浸润有着一定的抑制作用[3]。目前为止，宫颈癌患者的分子病理特征与预后不良的分子病理之间的相关性尚不明确。有鉴于此，本研究选择我院收治的59例宫颈癌患者作为研究组，对患者病理结果进行分析研究，现详细报告如下。

1　材料与方法

1.1一般资料

收集我院2008年7月-2010年6月收治的59例宫颈癌患者作为研究对象。患者年龄40～65岁，平均年龄为(51.9±13.8)岁，其中处于宫颈癌Ⅰa期的患者19例，Ⅰb期15例，Ⅱa期15例，Ⅱb期10例；病理类型：46例为鳞癌，13例为腺癌。以上患者的诊断病历资料以及病理诊断均分别由妇科及病理科医师进行整理核对，所有诊断均由宫颈癌HE病理切片诊断标准作为最终诊断依据，使用国际妇产科联盟制定的分期标准作为宫颈癌临床分期的评判标准。根据临床分期的不同采用不同的治疗方法：使用广泛子宫切除术对Ⅰa期患者进行治疗，使用子宫切除术加淋巴结清扫术对处于其他分期患者进行治疗。对所有患者进行长期随访，纳入本次研究的患者均获得长期随访资料。对患者的5年生存率进行统计学分析，作为评价预后的指标。

1.2研究方法

本次研究所使用的试剂盒survivin多克隆抗体、MMP-2、TIMP-2、CD44v6单克隆抗体、SP试剂盒以及DAB显色剂均采购自福州迈新公司，实验步骤按照试剂盒说明书要求进行操作。

定位于细胞胞质的是survivin、MMP-2、TIMP-2阳性染色，染色定位在细胞膜上的是CD44v6阳性染色。细胞阳性的判断标准为：胞膜、胞质或者细胞核出现淡黄到棕黄色颗粒者判断为阳性。使用图像分析仪对阳性信号进行采集并定量分析。

使用购自德国的Leica-Q500IW自动图像分析系统对免疫组化阳性信号进行图像分析处理，并在放大倍数为200的镜下随机挑选5个视野，系统自动随机测定每个视野中的3个不同部位，将阳性细胞提取后，测定其光密度值(OD)[4]。

1.3mRNA提取检测

使用TrizolTM(Promega公司，美国)提取血液中总RNA，按照试剂盒说明书进行操作，并使用DNA/RNA测定仪对总RNA浓度和纯度进行测定。取3 μl总mRNA，70 ℃处理10 min后加入4 μl 25 mmol/L MgCl2,2 μl 10×缓冲液，2 μl浓度为10 mmol/L的脱氧核糖核苷三磷酸混合液(dNTP)，1 μl的0.5 g/L寡聚脱氧胸苷酸(Oligo-dT15)，0.5 μl的RNAsin Ribonuclease,0.6 μl浓度为25 U/μl AM逆转录酶以及6.9 μl的ddH2O，将混合液充分混合后60 min 42 ℃，5 min 95 ℃。

survivin、p27、CD44v6、MMP-2以及TIMP-2引物由北京奥科生物工程公司设计合成。Survivin基因引物序列上游为5'-CCCTGCCTGGCAGCCCTTTC-3'；下游为5'-CTGGCTCCCAGCCTTCCA-3'。P27基因引物序列上游为5'-ACGGAATTCATGT-3'；下游为5'-ACGCTCGAGTTACGTTTGACGTCTTCTGA-3'。CD44v6基因引物序列上游为5'-TCCAGGCAACTCCTGTTGTCGAA-3';下游为5'-ACAGAGTACTTGCGCTCAGGGAG-3'。MMP-2基因引物序列上游为5'-CACCTACACCAAGAACTTCC-3';下游为5'-GTTCCCCACGAATCAACGAGA-3'。TIMP-2基因引物序列上游为5'-ATGCCATCCTGCGTCTG-3';下游为5'-AACACAGCCTTCTCCTCCTG-3'。以β-actin作为内参照，上游引物为：5'-CAACTTCATCCACGTTCACC-3';下游为5'-GAAGAGCCAAGGACAGGTAC-3'。在总体积为25 μl的总反应体积中加入2 μl cDNA，各1 μl上下游引物，12.5 μl的PCR,Master Mix，在加入8.5 μl的去离子水，放于PCR仪中，反应条件设定为：10 min 95 ℃的预变性，30 s 95 ℃，30 s 72 ℃，进行40个循环，最后在72 ℃下延伸10 min。反应结束后采用琼脂糖凝胶电泳，使用软件自动读取灰度值。

1.4统计学方法

2　结果

2.1患者5年生存率

患者5年生存率为84.7%，其中鳞癌患者的5年生存率要高于腺癌患者，Ⅰ期患者生存率也要高于Ⅱ期患者。见表1。

表1　患者5年生存率(例，%)

2.2分子指标表达情况对比

研究组中survivin、MMP-2、CD44v6分子表达量明显随着分期的增高而增高(P<0.05)，TIMP-2在研究中表达量则表现出相反的趋势(P<0.05)；p27表达量之间无明显差异(P>0.05)。见表2。

表2　分子指标表达情况对比±s)

2.3Survivin、p27、CD44v6、MMP-2以及TIMP-2 mRNA表达对比

研究组中survivin、MMP-2、CD44v6表达量明显随着分期的增高而增高(P<0.05)，TIMP-2在研究中表达量则表现出相反的趋势(P<0.05)；P27mRNA表达量之间无明显差异(P>0.05)，见表3。

表3　Survivin、p27、CD44v6、MMP-2以及TIMP-2mRNA表达水平

3　讨论

宫颈癌预后效果较差，5年生存率相对较低，目前对其原因的研究发现主要是与其组织病理学有着密切的相关性[5]。 但是通过常年的临床观察发现，在我院所在的恩施地区，宫颈癌患者有良好的预后效果，并且患者预后5年生存率相对较高，对此进行研究可以对其他地域患病人群具有指导意义。

在给予相同的治疗方案进行治疗后，患者预后效果较差主要是由于局部控制较差和远处转移率较高所引起的，然而这两个因素与肿瘤的浸润转移和凋亡相关分子有着密切的联系[6]。Survivin是凋亡抑制蛋白(inhibition apoptosis protein,IAP)家族的同族体，其表达在恶性肿瘤中较为常见，在成人分化组织和癌旁正常组织中不表达。研究证实，其在肿瘤的发生、发展过程中有着极其重要的作用[7]。本次研究我们发现，恩施地区宫颈癌患者survivin蛋白阳性表达率明显增高。

CD44属于粘附分子家族，CD44v6可能是判断肿瘤生物学行为及预后因素的重要指标[8]。在本次研究中，恩施地区宫颈癌患者CD44v6蛋白阳性表达率明显增高，此结果提示恩施地区宫颈癌患者CD44v6蛋白具有显著的地区特征，其有可能也是导致恩施地区宫颈癌患者预后良好的原因之一。

通过大量的临床发现，肿瘤发生转移以及预后效果较差与基质金属蛋白酶的过度表达有着直接的关系，故此在判断肿瘤预后效果以及生物学特征时，基质蛋白酶便成为了一个重要的指标[9]。其中MMPs和TIMPs之间的动态平衡的破坏是导致肿瘤继续发展的重要因素之一，因此可以通过抑制MMP-2的活性，使其不能和TIMP-2结合，进而使得肿瘤血管的生成受到抑制，最终达到控制肿瘤浸润的效果[10]。

[1]徐妍婷，蔡为民，耿建祥，等.健康妇女及宫颈癌患者HPV感染基因型分布的研究〔J〕.国际检验医学杂志，2014,35(22)：3022-3024.

[2]张欣，牟敏，彭祚全.恩施高硒区居民膳食硒摄入量监测报告〔J〕.微量元素与健康研究，2013，30(3)：42-44.

[3]雷杨，路喜安，齐广强，等.硒结合蛋白-1在宫颈癌中的表达及意义〔J〕.中国药物与临床，2010,10(3)：496-498.

[4]罗仪,王剑,赵昌银,等.35岁以下宫颈癌患者的分子病理高危因素分析〔J〕.中国肿瘤临床,2006,33(21):1221-1224.

[5]继勇，陈雪莲.青年人宫颈癌临床病理特征和预后的研究〔J〕.临床肿瘤学杂志，2005，10(1)：45-48.

[6]张美琴，陈鸣之.年轻妇女子宫颈癌174例临床及预后分析〔J〕.中华妇产科杂志，2003，38(11)：689-693.

[7]Chakravarti A，Noll E，Black PM，et al.Quantitatively determined surviving expression levels are of prognostic value in human gliomas〔J〕.Clin Oncol，2002，20(4)：1063-1068.

[8]Ponta H，Sherman L，Herrlich PA.CD44：from adhesion m-

olecules to signaling regulators〔J〕.Nat Rev Mol Cell Biol，2003，4(1)：33-45.

[9]Adachi Y，Yamamoto H，Itoh F，et al.Clinicopathologic and prognostic significance of matrilysin expression at the invasive front in human colorectal cancers〔J〕.Int J Cancer，2001，95(5)：290-294.

[10]Yamamoto H，hoh F，Iku S，et al.Expression of matrix metalloproteinases and tissue inhibitors of metalloproteinases in human pancreatic adenocarcinomas：dinicopathologic and prognostic significance of matrilysin expression〔J〕.J Clin Oncol，2001，19(4)：1118-1127.

(编辑：甘艳)

Correlation between Molecular Pathologic Features and Prognosis of Cervical Carcinoma

FANXiaoqiong.

AffiliatedHospitalofHubeiInstituteforNationalities,Enshi,445000

ObjectiveTo study the correlation between molecular and pathological factors of cervical cancer in Enshi area.Methods59 cases of cervical cancer patients were selected as the research object,the p27,CD44v6,survivin,MMP-2,TIMP-2 protein expression and prognosis were compared.ResultsThe overall 5-year survival rate of patients was 84.7%.The expression levels of survivin,MMP-2,CD44v6 were negatively correlated with the prognosis(P<0.05).The expression of TIMP-2 in patients with mRNA was positively correlated with the prognosis(P<0.05);the expression of p27 was not correlated with the prognosis(P>0.05).ConclusionThe prognosis of cervical cancer patients in Enshi region is good,and the main molecular pathological features of cervical cancer patients are survivin,TIMP-2,MMP-2 and CD44v6.

Cervical cancer;Molecular pathological features;Prognosis

445000 湖北民族学院附属民大医院

R737.33

A

1001-5930(2016)07-1081-03

2015-09-07

2016-05-05)