叶尔羌高原鳅“肠积水”病因调查及防治措施

2016-08-23雷曼红姜仁军陈生熬

水产养殖 2016年6期

关键词：胰脏塔里木琼脂

雷曼红，姜仁军，陈生熬

（1.塔里木大学动物科学学院，新疆　阿拉尔　843300；2.塔里木大学生命科学学院，新疆　阿拉尔　843300）

叶尔羌高原鳅“肠积水”病因调查及防治措施

雷曼红1，姜仁军2，陈生熬1

（1.塔里木大学动物科学学院，新疆阿拉尔843300；2.塔里木大学生命科学学院，新疆阿拉尔843300）

doi:10.3969/j.issn.1004-2091.2016.06.017

叶尔羌高原鳅 Triplophysa（Hedinichthgs）yarkandensis（Day），属鲤形目（Cyprinidformes），鳅科（Cobitidae），高原鳅属（Triplophysa），俗称“狗头鱼”，广泛分布于塔里木河流域，因其肉质细腻、味道鲜美、营养价值高，受到广大消费者的欢迎。由于资源锐减，近年来，有关人员从野外捕捞野生叶尔羌高原鳅进行驯养。人工养殖条件下，该鱼夏、秋季常暴发“肠积水”病，该病发病快，病死率高，几乎为100%，给生产造成了严重的损失。2014年，笔者项目组对该病从病原菌的分离鉴定、疾病防治措施等方面进行了研究，以期为叶尔羌高原鳅大规模人工养殖的病害防治提供一定的理论指导。

1　材料及方法

1.1材料

濒死的叶尔羌高原鳅，来自塔里木大学水产试验站，体长10～20 cm；健康的叶尔羌高原鳅为来自塔河的野生叶尔羌高原鳅，体长10～15 cm。

1.2症状观察

取濒临死亡的病鱼数尾进行体表及体内病症观察，以确定该病的典型症状。

1.3病原的分离与鉴定

1.3.1病毒学试验选取濒死高原鳅肝胰脏，加l mL生理盐水，在研钵中进行研磨，加入青、链霉素溶液，作用15 min后，4 000 r/min离心10 min，之后取上清液，注射10尾健康的高原鳅，每尾0.1 mL，然后饲养在盛有50 L水的鱼缸中，观察7 d。

1.3.2细菌的分离选取有典型病症的鱼，用70%的酒精擦拭体表，无菌操作取其肝胰脏、肾脏，于普通营养琼脂平板和兔血琼脂平板上划线分离，28℃恒温培养24 h后取优势菌进行纯化，最后转接到兔血琼脂平板上培养。

1.3.3回染试验实验用鱼为体长10～15 cm的健康无伤的叶尔羌高原鳅，从塔里木河捕捞，在鱼缸饲养30 d后进行回染试验，设实验组及对照组。每组实验鱼各10尾，实验水温28℃。

用无菌生理盐水清洗分离菌株的菌苔，用麦氏比浊法测定并调节菌悬液浓度为6×108cells/mL，然后对高原鳅进行腹腔注射，每尾注射0.1 mL；对照组注射相同剂量的无菌生理盐水。连续7 d观察鱼的发病症状及死亡情况，发现死鱼及时捞出，检查其体表及内脏器官的病变情况，同时做细菌分离。1.3.4病原菌鉴定将纯化的病原菌株置于兔血琼脂平板上培养，于28℃培养24 h，观察菌落特征，然后将病原菌株接种于鲜血琼脂平板上，28℃条件下培养24 h，挑取单菌落混于生理盐水中，用可见-紫外分光光度计测量并配成0.5×108cells/mL的菌悬液后，利用全自动微生物分析系统VITEKAMS仪、革兰阴性杆菌鉴定卡（GNI）进行鉴定。

1.3.5药敏试验用涂布法接种菌株，然后将药敏纸片（购自杭州天和微生物试剂有限公司）贴在培养基上，28℃条件下培养24 h后，测定抑菌圈直径，根据《现代诊断学手册》标准，判断致病菌株对药物的敏感程度。

2　结果

2.1症状

肉眼观察：病鱼腹部异常膨大，腹部两侧有点状出血，鳃部组织、体表黏液明显增多。解剖发现：病鱼腹腔中没有水，即不是“腹水病”。肠道明显鼓胀，充满大量淡黄色积水，肠壁很薄，伴有少量气体，大多数鱼肠道内没有食物，肠壁明显充血。肝胰脏呈砖红色，具淤血斑；肾充血、出血；腹腔内基本上看不到脂肪。

2.2病毒学试验结果

将10尾注射了灭菌组织悬液的叶尔羌高原鳅饲养两周，无一发病，也无其他异常，说明此病不是由病毒引起的。

2.3菌落形态

从病鱼肝胰脏中分别分离到2株优势菌XJ-I 和XJ-II。菌株XJ-I和XJ-II在血琼脂平板上培养24 h后均形成圆形、边缘整齐、表面光滑、隆起、有光泽、不易挑取的菌落。

2.4人工回归感染

将分离纯化的菌株XJ-I和XJ-II进行人工回归感染实验。结果表明，菌株XJ-I和XJ-II对叶尔羌高原鳅均具有致病作用（表1），而且实验致死鱼体死亡症状与自然发病鱼体死亡症状基本相同。另外，从人工感染的病鱼的肝胰脏中又分离到与实验菌株形态及菌落特征一致的菌株。由此表明，该病是由菌株XJ-I和XJ-II感染引起的。见表1。

2.5病原菌鉴定

表1　细菌的形态、菌落特征和致死情况

对供试菌株进行革兰染色、显微镜观察及氧化发酵试验，发现2株菌均为革兰阴性杆菌，无荚膜，无芽孢。氧化酶、触酶阳性，葡萄糖发酵型，经全自动微生物分析系统VITEK-AMS仪、革兰阴性杆菌鉴定卡（GNI）鉴定，2株菌均属于嗜水气单胞菌群，菌株XJ-I和XJ-II与《伯杰氏细菌手册》上描述的嗜水气单胞菌模式菌株（Aeramonas hydrophila）的生理生化形状基本一致（表2）。

2.6药敏实验

菌株对16种药物的药敏实验结果见表3。在16种药物中，菌株对新霉素、庆大霉素、奈啶酸、氟哌酸、恩诺沙星、磺胺对甲氧嘧啶6种药物高度敏感。

3　讨论

目前，尚无叶尔羌高原鳅“肠积水”病的相关资料报道。叶尔羌高原鳅生活在淡水中，体液渗透压大于体外养殖水体渗透压，为了平衡体内外渗透压，体外水分子通过鳃、皮肤进入体内，而不是口腔吞咽的环境中的水分子进入肠道，所以，肠道内的积水应该来自叶尔羌高原鳅机体的组织液。笔者认为有如下几个方面的原因引起：①养殖水温升高，叶尔羌高原鳅机体免疫力下降，条件致病菌有可能乘机而入。该病的发病时间呈现明显的季节性，通常集中在水温25℃以上的夏、秋季发病，而在水温较低的冬、春季节，几乎无该病的发生。由于叶尔羌高原鳅是冷水性鱼类，水温可能是诱导该病发生比较重要的因素之一，可能是水温升高造成叶尔羌高原鳅鱼体新陈代谢紊乱，导致胃、肠的蠕动频率和蠕动幅度降低，肠中的水分不能及时排出体外从而形成积水。由于消化道积水的存在，引起摄食量降低，所以，患病的叶尔羌高原鳅消化道中食物很少或没有，这使病情更加恶化，免疫力下降。嗜水气单胞菌是典型的条件致病菌，一般在鱼体免疫力下降时才会感染发病。②养殖密度高，水中的溶解氧偏低，鱼体机能下降。叶尔羌高原鳅是需氧较高的鱼类，溶氧一般不能低于5 mg/L。据观察，密度高的养殖池的“肠积水”病就较为严重，而密度低的鱼池发病率较低。因此，养殖密度也可能是影响该病发生的重要因素之一。