HPLC测定委陵菜中委陵菜酸的含量*

邓仕任，王　鑫，梅晓丹，朱夏敏，夏林波

（辽宁中医药大学 药学院，辽宁 大连 116600）

HPLC测定委陵菜中委陵菜酸的含量*

邓仕任，王鑫，梅晓丹，朱夏敏，夏林波*

（辽宁中医药大学 药学院，辽宁 大连 116600）

目的：建立高效液相色谱测定委陵菜药材中委陵菜酸含量的方法，为委陵菜的合理质量控制提供依据。方法：采用Agilent XDB-C18色谱柱（4.6×150mm，5μm），流动相乙腈—水（60∶40，V∶V），检测波长206nm。结果：委陵菜酸在0.104～1.04mg·mL-1范围内线性关系良好，r=0.9997（n=6），加样回收率101.3%，RSD=1.87%（n=6）；3批委陵菜药材中委陵菜酸的含量为0.25～0.46mg·g-1。结论：委陵菜酸为委陵菜药材中的特征活性成分，所建立的含测方法操作简便，结果可靠，可作为委陵菜药材质量控制的指标性成分。

委陵菜；委陵菜酸；HPLC；含量测定

委陵菜为蔷薇科植物委陵菜Potentilla chinensis Ser.的干燥全草，其味苦、性寒，归肝、大肠经，具有清热解毒，凉血止痢的功效，常用于赤痢腹痛，痈肿疮毒等症［1］，是一味常用中草药。现代药理及临床研究表明，委陵菜尚具有一定的降糖功能，已在部分地区用于二型糖尿病的临床治疗［2］。我们的前期研究表明，委陵菜的醇提物对α-葡萄糖苷酶具有较好的体外抑制活性，这可能是其治疗糖尿病的作用机制之一。委陵菜的主要成分有黄酮类、三萜类、鞣质、有机酸等［3，4］。目前，对委陵菜的质量控制研究主要集中在黄酮类化合物中［5］，而基于其三萜类成分展开的研究几乎为空白。委陵菜酸为委陵菜中的特征三萜类成分，药理研究表明，其具有抗炎镇痛、抗菌、降糖、保肝、抗肿瘤等多方面生理活性［6-8］，为委陵菜的主要药效成分。本实验拟以委陵菜酸为指标成分，以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，建立委陵菜药材中委陵菜酸的HPLC分析方法，以期为委陵菜药材的合理质量控制提供相关科学依据。

1　实验部分

1.1仪器与试药

安捷伦1100高效液相色谱仪；FA1004B型电子天平（上海精密科学仪器有限公司）；DFT-100型手提式高速万能粉碎机（温岭市林大机械有限公司）；RE52CS型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；KQ2200型超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

委陵菜酸对照品（纯度大于98.5%美国BOC Sciences公司）；甲醇（AR）；乙腈（CP天津市大茂化学试剂厂）；水（娃哈哈纯净水）。

3批委陵菜药材均采集于辽宁省鞍山市千山地区，经辽宁中医药大学植物教研室王冰教授鉴定为蔷薇科植物委陵菜Potentilla chinensis Ser.的干燥全草。

1.2方法

1.2.1色谱条件

安捷伦XDB-C18色谱柱（4.6mm×150mm，5μm）；流动相乙腈-水（60∶40，V∶V）；流速1.0mL·min-1；检测波长206nm；柱温40℃；进样量20μL。

1.2.2对照品溶液制备及线性关系考察

取委陵菜酸对照品适量，精密称定，置10mL量瓶中，加甲醇溶解，稀释至刻度，得浓度为1.04mg· mL-1的对照品储备液。将该储备液用甲醇逐级稀释，配成浓度分别为 0.104、0.208、0.416、0.624、0.832、1.04mg·mL-1的系列对照品溶液。将上述对照品溶液依次注入液相色谱仪，进样量为20μL。以峰面积为纵坐标，样品浓度（mg·mL-1）为横坐标，得回归方程为y=1.61×106x+6632，委陵菜酸在0.10～1.04mg·mL-1范围内呈良好的线性关系（r=0.9997，n=6）。

1.2.3供试品溶液的制备

取委陵菜粉末（过40目筛）约2.0g，精密称定，置于锥形瓶中，加入100mL甲醇浸泡过夜，超声提取三次，每次20min，过滤合并提取液，减压浓缩至干后，以甲醇溶解后转入1mL容量瓶中，定容至刻度，测定前置于4℃保存备用，进样分析前经0.22μm滤膜过滤，作为供试品溶液。

2　实验结果

2.1精密度

精密称取同一委陵菜药材按1.2.3项下方法制成供试品溶液，连续进样6次，测得保留时间RSD=0.91%，峰面积RSD=0.69%，表明仪器精密度良好。

2.2稳定性试验

精密称取同一委陵菜药材按1.2.3项下方法制成供试品溶液，分别在0、2、4、8、12、24h测定峰面积。平均峰面积为811660，RSD=1.84%（n=6）。表明供试品溶液在24h内稳定。

2.3重复性试验

精密称取同一委陵菜药材6份，按1.2.3项下方法制成供试品溶液，测得样品中委陵菜酸含量的平均值为0.25mg·g-1，RSD=1.01%，证明本方法重复性良好。

2.4加样回收率试验

取已知委陵菜酸含量（0.25mg·g-1）的药材9份，每份约2g，精密称量，3份为一组，置具塞锥形瓶中，每组精密加入低、中、高浓度委陵菜酸对照品贮备液，按1.2.3项下方法制备供试品溶液，结果平均加样回收率101.3%，RSD=1.87%（n=9）。

2.5样品含量的测定

分别取3批委陵菜药材约各2g，精密称定，按2.3项下方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下进行分析，其色谱峰见图1。

图1　委陵菜药材HPLC图Fig.1　HPLC chromatography of Potentilla chinensis Ser

记录下峰面积，代入标准曲线，计算出样品中含有委陵菜酸的含量，结果见表1。

表1　委陵菜药材中委陵菜酸含量测定结果Tab.1　Content of tormentic acid in Potentilla chinensis Ser

3　结论

（1）委陵菜为多年生草本，全国大部分地区有分布，主产于山东、辽宁、安徽等地。祖国传统医学认为，委陵菜具有清热解毒，凉血止痢等作用，主要用于治痢疾，风湿筋骨疼痛，瘫痪，癫痫，疮疥等症。在对辽宁千山地区的道地辽药进行降糖活性的筛选过程中，我们发现委陵菜具有较强的α-葡萄糖苷酶体外抑制活性，该结果提示其可能对二型糖尿病具有一定的治疗作用。相关文献［2］也表明，在京津地区，委陵菜已在临床上被用作二型糖尿病的治疗药物。

（2）委陵菜酸为19α-羟基乌苏烷型三萜化合物，是委陵菜药材中的特征成分。有文献［6］表明，从西班牙Poterium ancistroides Deaf植物的地上部分所分离出来的委陵菜酸能够降低正常大鼠与葡萄糖诱发的高血糖大鼠的血糖浓度，同时升高胰岛素浓度，为降糖活性成分。还有研究［7］表明，从委陵菜中所纯化的委陵菜酸能够减轻脂多糖引起的小鼠急性肝损伤，具有保肝作用。此外，委陵菜酸的抗菌、抗氧化、抗炎镇痛、抗肿瘤等药理作用也时有报道［8］。由此可见，委陵菜酸为委陵菜的特征药效成分，以此作为委陵菜质量评价的指标性成分是比较合理的。

（3）本文首次采取HPLC法，对3批产自辽宁千山地区的委陵菜药材中的委陵菜酸进行了含量测定，结果分布在0.25～0.46mg·g-1范围内。我们所建立的检测方法简便、稳定、灵敏度高，可为委陵菜药材的质量评价提供科学依据。

［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［M］.北京：中国医药科技出版社，2015.214.

［2］ 陆璐，李素君，刘宗林，等.委陵菜降血糖成分的机理研究［J］.食品科学，2008，29（6）：387-391.

［3］ 高雯.委陵菜的化学成分研究［D］.沈阳药科大学，2007.

［4］ 刘普，段宏泉，潘勤，等.委陵菜三萜成分研究［J］.中国中药杂志，2006，22：1875-1879.

［5］ 孙晓阳，刘玉凯，缪月英，等.委陵菜中黄酮类成分HPLC指纹图谱的研究［J］.广东化工，2015，42（18）：13-14.

［6］ 周和平.委陵菜酸对离体大鼠胰岛的胰岛素分泌的影响［J］.现代药物与临床，1990，（2），43-44.

［7］ Lin X，Zhang S，Huang R，et al.Protective effect of tormentic acid from Potentillachinensisagain stlipopoly saccharide/D-galactosamine induced fulminant hepatic failure in mice［J］.International immunopharmacology，2014，19（2）：365-372.

［8］ 张晶，刘洋，李灵芝.委陵菜酸药理活性研究现状［J］.武警后勤学院学报（医学版），2016，（1）：67-69.

Determination of tormentic acid in Potentilla chinensis Ser by HPLC*

DENG Shi-ren，WANG Xin，MEI Xiao-dan，ZHU Xia-min，XIA Lin-bo*
（College of Pharmacy，Liaoning Uniuersity of Traditional Medicine，Dalian 116600，China）

Objective：An HPLC method for determination of tormentic acid in Potentilla chinensis Ser.was developed to provide a quality control method for Potentilla chinensis Ser.Methods：The chromatography was carried out on an Agilent XDB-C18column（4.6×150mm，5μm）with acetonitrile-water（60∶40，V∶V）as the mobile phase，the detection wavelength was set at 206 nm.Results：Tormentic acid could be successfully determined and the linear rang was 0.104～1.04μg·mL-1（r=0.9997）.The average recoveries（n=6）of the tormentic acid was 101.3%，RSD=1.87%.The content of tormentic acid in 3 batches was 0.25～0.46mg·g-1.Conclusion：Tormentic acid was the specific ingredient in Potentilla chinensis Ser.The method is accurate，reliable and sensitive for quality control of Potentilla chinensis Ser.

Potentilla chinensis Ser；tormentic acid；HPLC；determination

R284.1

A

10.16247/j.cnki.23-1171/tq.20160725

2016-03-02

国家自然科学基金项目（81202857）；辽宁省自然科学基金（2015020713）；辽宁省高等学校优秀人才支持计划（LJ Q2015070）

邓仕任（1979-），男，博士，副教授，研究方向：中药药效物质基础研究。

夏林波（1977-），女，博士，副教授。