不同培养因素对黑玫瑰石竹丛生芽增殖的影响

张引引 孙宁 陈小强 张菁雯

摘 要：研究多种因素对黑玫瑰石竹组培快繁中丛生芽分化增殖培养的影响，结果表明：丛生芽增殖培养以MS为基本培养基时，增加或减少大量矿质元素不利于丛生芽的诱导；NAA/6-BA为0.1 mg·L-1/1.0 mg·L-1的激素配比有利于丛生芽的增殖，在此基础上添加谷氨酰胺100 mg·L-1，可提高增殖数达9.4；选用蔗糖15 g·L-1为增殖培养的碳源，在提高增殖效果的同时可有效降低成本。

关键词：黑玫瑰石竹；组织培养；丛生芽；增殖系数

中图分类号：S682.1+9 文献标识码：A DOI 编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2016.08.031

Abstract：The stems of Dianthus Linn were used as explants and the different effect factors on bud clusters propagation were studied. The results showed that the best medium was MS； NAA 0.1 mg·L-1 +6-BA 1.0 mg·L-1 + Gln 100 mg·L-1 was an optimum concentration for bud differentiation， the propagation coefficient was 9.4； the propagation coefficient could be remained at a high level and the cost could be reduced in sucrose 15 g·L-1.

Key words： Dianthus Linn； tissue culture； bud clusters； propagation coefficient

石竹科植物是重要的观赏园艺植物，全世界共75个属，约2 000种，我国有30属388种，分布于全国各地[1-2]。黑玫瑰石竹是石竹科石竹属多年生草本植物，重瓣花型，花瓣黑紫色嵌白边、质如丝绒，株高30～50 cm，各地可种植，可用作盆栽、切花、花坛等栽植，观赏价值极高。黑玫瑰石竹不易用种子繁殖，易产生品种混杂，不能保持原品种的优良品质，而传统扦插繁殖易造成病毒害，切花质量变劣，栽培质量下降[3-4]。对黑玫瑰石竹组织培养技术的研究，不仅可以开展种苗的快繁，而且还可以结合脱毒技术实现无毒苗的生产，研究结果可为这一新特花卉品种的规模化生产提供技术参考。本研究以黑玫瑰石竹试管苗茎段为试材，对外源激素、大量矿质元素、碳源、有机添加物及活性炭等多种因素对丛生芽增殖的影响进行了研究。

1 材料和方法

1.1 材 料

试验材料为市售北京花仙子园艺黑玫瑰石竹种子。

1.2 方 法

1.2.1 初代培养 选取颗粒饱满的黑玫瑰石竹种子，清水冲洗清洁，无菌条件下用70%乙醇浸泡30 s后，0.1%HgCl2浸泡7 min，无菌水冲洗4～5次。将表面灭菌后的种子接入初代培养基MS+蔗糖30 g·L-1，光照培养。

1.2.2 继代培养 黑玫瑰石竹种子经初代培养20～30 d，即可获得无菌实生苗。将初代培养获得的实生试管苗剪切为1.5～2 cm茎段，接入不同处理的继代增殖培养基中。接种后放于培养室中培养，培养条件为：（25±2） ℃、光照强度2 000～3 000 Lx、光照时长14 h·d-1。培养期间定期观察培养苗的生长状况，调查记录试管苗的株高、芽增殖数、生根情况等指标。

（1）外源激素处理。以MS为基本培养基，附加蔗糖30 g·L-1。NAA/6-BA和 NAA/KT 2种激素配比分别设置6个处理：①0.1 mg·L-1/0.5 mg·L-1；②0.1 mg·L-1/1.0 mg·L-1；③0.1 mg·L-1/1.5 mg·L-1；④0.2 mg·L-1/0.5 mg·L-1；⑤0.2 mg·L-1/1.0 mg·L-1；⑥0.2 mg·L-1/1.5 mg·L-1。

（2）碳源处理。采用MS为基本培养基，附加（1）中筛选的适宜激素配比。培养基蔗糖、白砂糖和麦芽糖为碳源，每种碳源设15 g·L-1和30 g·L-12个浓度处理。

（3）大量元素处理。分别采用MS、1/2 MS、1/4 MS和2 MS为基本培养基，附加（1）中筛选的适宜激素配比，蔗糖30 g·L-1。

（4）添加物处理。采用MS为基本培养基，附加（1）中筛选的适宜激素配比，蔗糖30 g·L-1。培养基中添加水解乳蛋白（LH，100 mg·L-1）、谷氨酰胺（Gln，100 mg·L-1）、椰汁（100 ml·L-1）和活性炭（2 g·L-1）共4个处理。

2 结果与分析

2.1 外源激素对丛生芽诱导与增殖的影响

培养基中添加植物生长素和细胞分裂素能促进芽或根的分化。不同的NAA/6-BA浓度比对黑玫瑰石竹的芽增殖及株高影响不同，具体影响结果见表1。

由表1可见，当NAA浓度一定时，随6-BA浓度的增大，茎长和增殖系数都有升高的趋势。当NAA 0.1 mg·L-1、6-BA 1.5 mg·L-1时，增殖系数高于其它各个处理，且平均株高最高，但此时由于6-BA浓度过高，部分植株出现玻璃化现象。处理3、5的NAA/6-BA比例均为0.2，其增殖系数相近，但处理5的试管苗茎细弱，不易移栽成活。因此，综合丛生芽增殖以及植株的生长情况，采用处理2即NAA/6-BA为0.1 mg·L-1/1.0 mg·L-1时，适宜黑玫瑰石竹丛生芽的分化增殖。

不同NAA/KT浓度比对黑玫瑰石竹试管苗芽增殖的影响见表2。