解郁散有效部位抗抑郁作用比较

2016-08-08王玉露张淑玲福建中医药大学药学院福建福州350金陵药业股份有限公司福州梅峰制药厂福建福州35000

福建中医药 2016年2期

王玉露，贺　　侃，贾　　铷，张淑玲，陈　　燕（.福建中医药大学药学院，福建福州350；.金陵药业股份有限公司福州梅峰制药厂，福建福州35000）

解郁散有效部位抗抑郁作用比较

王玉露1，贺侃2，贾铷1，张淑玲1，陈燕1
（1.福建中医药大学药学院，福建福州350122；2.金陵药业股份有限公司福州梅峰制药厂，福建福州350002）

目的探讨解郁散乙酸乙酯和正丁醇有效部位的抗抑郁作用及其机制，为解郁散的进一步开发应用提供实验依据和理论基础。方法选择80只昆明种小鼠随机分为溶剂组、盐酸丙咪嗪组、正丁醇提取物高、中、低剂量组，乙酸乙酯提取物高、中、低剂量组共8组，每组各10只。采用小鼠悬尾试验、强迫游泳试验初步检测正丁醇提取物和乙酸乙酯提取物的抗抑郁效应，再通过5-HTP诱导的小鼠甩头试验和育亨宾毒性试验初步揭示其抗抑郁机制。结果小鼠悬尾不动时间和强迫游泳不动时间表明解郁散正丁醇低剂量组和乙酸乙酯高剂量组都有明显抗抑郁作用；5-HTP诱导小鼠甩头试验和育亨宾毒性试验结果发现两者均能增加小鼠甩头次数和增加育亨宾的致死率，其中正丁醇提取物和乙酸乙酯提取物中、高剂量组能明显增多小鼠甩头次数；同时，乙酸乙酯提取物均可以增加育亨宾的致死率，而正丁醇提取物中剂量组无此作用。结论解郁散乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物都有抗抑郁作用，均增加了小鼠甩头次数和育亨宾毒性，说明其作用机制可能与增加突触间隙单胺递质有关。从量效关系来看：乙酸乙酯提取物的量效关系更好。

解郁散；抑郁症；正丁醇提取物；乙酸乙酯提取物；抗抑郁

抑郁症是一种慢性、反复发作的情感性精神疾病，其主要临床表现为：情绪低落，消极待物，无助感，精力及注意力下降等。抑郁症是目前世界上最易致残的疾病之一［1］，因此，抑郁症越来越受到药理学、心理学及神经精神药理学专家的关注。

四逆散出自张仲景的《伤寒论》，主要成分包含柴胡、枳实、芍药、炙甘草，具有调和肝脾，透邪解郁，疏肝理脾之功效，主治阳郁厥逆证和肝脾气郁证，临床常用于治疗慢性肝炎、胆囊炎、胆石症、胆道蛔虫症、肋间神经痛、胃溃疡、胃炎等属肝胆气郁，肝胃不和者。本课题用方解郁散系引用著名中医学家施奠邦教授经验方，由四逆散加川合欢花组成。前期研究［2-4］首先验证了解郁散对郁症大鼠模型的抗抑郁作用，为了进一步确定其抗抑郁作用的有效部位，又提取其4个有效部位，通过小鼠强迫游泳和悬尾实验进行抗抑郁作用筛选，结果发现其中两种提取物抗抑郁作用显著，即乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物。为了研究其有效部位的抗抑郁作用机制，本实验用两种提取物对小鼠进行了进一步的抗抑郁研究，初步揭示其抗抑郁作用机制并比较其不同提取物的作用差异。

1材料与药品

1.1动物及分组昆明种雄性小鼠，体重（20±2）g，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，批号：SCXK（沪）2007-0005。小鼠按体重应用数字随机表随机分成8组，每组10只，室内适应性饲养7 d后开始正式实验，自由饮水进食。

1.2药品① 盐酸丙咪嗪，规格50 mg/片，购自上海劲马生物科技有限公司，批号：0160-9602，实验前用5%吐温溶液按30 mg·kg-1配成浓度1.5 mg· mL-1。②98%五羟色氨酸（5-HTP），购自阿法埃莎公司，批号：F6695A，按150 mg·kg-1配制成浓度7.5 mg·mL-1。③ 99%育亨宾，购自阿拉丁公司，批号：29107，按25 mg·kg-1配制成浓度1.25 mg·mL-1。④解郁散由枳实、柴胡、白芍、炙甘草、合欢花组成，所有药材均购自同春药业股份有限公司中药分公司，经福建中医药大学药学院中药鉴定教研室杨成梓副教授鉴定。枳实系芸香科植物酸橙Citrus aurantium L的干燥幼果；柴胡系伞形科植物柴胡Bupleurum chinense DC.的干燥根；白芍系毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.的干燥根；甘草系豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.的根及根茎；炙甘草是用蜜烘制的甘草；合欢花系豆科植物合欢Albizia julibrissin Durazz.的干燥花序。

1.2.1解郁散各萃取部位的制备依照文献［3］进行制备。本实验采用正丁醇部位和乙酸乙酯部位进行研究。

1.3实验材料悬尾装置自制：竹竿上用泡沫板隔离成5个分区，区与区之间用泡沫板挡住；胶带；2 000 mL烧杯10个；秒表10个；电子天平（型号：ES-C-600，湘仪天平仪器有限公司）；电热恒温水浴锅（型号：HH.S11-2，杭州汇尔仪器设备有限公司）；渗漉桶。

2方法

2.1分组将实验小鼠随机分成8组：溶剂对照组；盐酸丙咪嗪组；正丁醇提取物高、中、低剂量组（1.722 g/mL、0.861 g/mL、0.431 g/mL）；乙酸乙酯提取物高、中、低剂量组（3.81 g/mL、1.905 g/mL、0.953 g/mL），每组各10只。

2.2小鼠悬尾试验（tail suspension test，TST）参考文献［5］，连续给药7 d，末次给药1 h后，在小鼠尾部1 cm用胶带粘贴将小鼠悬挂于距离地面4～5 cm处，中间以不透明挡板隔离小鼠视线。悬尾时间6 min，秒表记录后 4 min内的不动时间。

2.3小鼠强迫游泳试验（forced swim test，FST）

［6］，连续给药7 d，末次给药1 h后，把小鼠置于高19 cm、直径12.5 cm的圆形烧杯中，保持水面高度15 cm，水温25℃，中间以不透明挡板隔离小鼠视线，观察6 min。秒表记录后 4 min内的不动时间。

2.4小鼠5-HTP增强试验参考文献［7］，连续给药7 d，末次给药1 h后，小鼠腹腔注射 5-HTP 150 mg·kg-1可引起甩头行为。记录每只动物给予5-HTP 后 15 min内的甩头次数。

2.5育亨宾毒性试验参照文献［8］并稍作修改，连续给药7 d，于末次给药1 h后各组动物分别皮下注射育亨宾 25 mg·kg-1，观察记录各组小鼠在1、2、4、5和24 h的死亡率。阳性对照丙咪嗪组（30 mg·kg-1）在注射育亨宾前 1 h单次给药。

2.6统计学处理用SPSS 11.5软件进行处理，计量资料属正态分布以±s表示，采用单因素方差分析。

3结果

3.1各组小鼠游泳不动时间和悬尾不动时间比较见表1。

表1　各组小鼠游泳不动时间和悬尾不动时间比较（±s）min

注：与盐酸丙咪嗪组比较，1）P＜0.05；与溶剂组比较，2）P＜0.05。

组别盐酸丙咪嗪组溶剂组正丁醇低剂量组正丁醇中剂量组正丁醇高剂量组乙酸乙酯低剂量组乙酸乙酯中剂量组乙酸乙酯高剂量组动物数/只10 10 10 10 10 10 10 10游泳不动时间46.50±27.362）134.30±15.641）39.80±32.152）86.60±38.891）2）57.00±26.972）75.70±26.951）2）64.10±16.852）44.20±26.672）悬尾不动时间67.80±23.682）126.50±21.421）83.40±18.772）109.40±22.551）123.70±25.891）117.40±33.311）111.20±24.291）84.90±22.702）

3.2解郁散有效部位对5-HP诱导小鼠甩头行为影响见表2。

表2　解郁散正丁醇和乙酸乙酯提取物对5-HTP诱导小鼠甩头行为的影响（±s）

注：与盐酸丙咪嗪组比较，1）P＜0.05；与溶剂组比较，2）P＜0.05。

组别盐酸丙咪嗪组溶剂组正丁醇低剂量组正丁醇中剂量组正丁醇高剂量组乙酸乙酯低剂量组乙酸乙酯中剂量组乙酸乙酯高剂量组动物数/只10 10 10 10 10 10 10 10甩头次数/5min 28.70±5.922）13.40±2.80 16.40±3.131）29.30±6.852）25.70±5.562）19.50±4.221）2）25.40±5.872）24.40±5.022）

3.3解郁散有效部位对育亨宾毒性影响见表3。

4讨论

4.1强迫游泳［9］和悬尾模型［5］试验主要是用于检测药物的抗抑郁活性，多用于一些抗抑郁药物的初期筛选。在这些实验中，实验动物处于一个不能逃避的应激环境，当动物处于绝望状态时会放弃挣扎，表现出抑郁状态，因此可以用实验动物的不动时间来判断其抑郁状态，不动时间越长说明抑郁状态越严重。解郁散正丁醇提取物和乙酸乙酯提取物均能显著缩短小鼠悬尾和小鼠强迫游泳的不动时间，表明这两种提取物均具有显著的抗抑郁作用。

表3　解郁散正丁醇和乙酸乙酯提取物对育亨宾毒性影响

在小鼠悬尾试验中乙酸乙酯提取物高剂量组和正丁醇提取物低剂量组与溶剂组相比明显缩短了小鼠不动时间，说明二者均有抗抑郁作用。从作用效果比较来看，乙酸乙酯提取物高剂量组和正丁醇提取物低剂量组对不动时间的影响效果相近，从量效关系来看，乙酸乙酯的量效关系比正丁醇的量效关系更好。

4.2中医药对此有确切的效果［10］，实验证实四逆散及其加味都具有抗抑郁作用。有研究发现四逆散的有效成分有抗抑郁作用［11-12］。而谢忠礼研究的加味四逆散（四逆散加桂枝、石菖蒲）能平衡额叶单胺能神经的功能状态并影响纹状体区单胺能神经的功能状态［13-14］，还可以使动物的自发活动和糖水消耗量增加［8，15］。另外，徐志伟研究的由柴胡、白芍、枳壳、枸杞子、栀子、熟地黄、石决明等组成的加味四逆散对慢性心理应激损伤也有较好的调治作用［16］。由此可见，四逆散加味的抗抑郁作用已经非常明确。合欢花可以舒郁、理气、安神、活络，用于心神不安、忧郁失眠，与四逆散合用，可显著增强其抗抑郁作用，具有透邪解郁、疏肝理脾的功效。因此本试验在四逆散中加入了合欢花，并在前期试验中证实了其抗抑郁作用。该试验主要从药物对单胺递质的影响探讨其作用机制，并对比其不同提取物的作用特点。

4.3单胺学说是公认的抑郁症病因说之一，而且多数临床使用的抗抑郁药物的治疗作用都是通过直接或间接增加突触间隙中NE和5-HT而发挥作用［13，17］。本试验主要从药物对单胺递质的影响来探讨其抗抑郁作用机制。在5-HTP诱导小鼠甩头试验结果中发现解郁散正丁醇提取物中、高剂量组和乙酸乙酯提取物低、中、高剂量组都能明显增多小鼠甩头次数，说明两种提取物都有增加突触间隙5-HT的作用，剂量越高作用越强，其中乙酸乙酯提取物的作用要优于正丁醇提取物。在育亨宾毒性试验中，发现两种提取物均能增强育亨宾的毒性，导致动物死亡率增加。其中，正丁醇提取物各组比较以低剂量组作用最强；乙酸乙酯提取物高、中、低剂量均可以增强育亨宾的作用，且效果较正丁醇明显，其中高剂量组作用最强，说明乙酸乙酯提取物有明显的量效关系。

从药效学的角度来看，药物的效应在一定范围内会随药物浓度的增加而增强，乙酸乙酯提取物在不同试验中均表现出高剂量作用更强，因此乙酸乙酯提取物有比较明显的量效关系。而正丁醇提取物小剂量组明显缩短了小鼠的游泳不动时间和悬尾不动时间，也增加了育亨宾的毒性作用，效果明显优于中、高剂量组，由此可推测出正丁醇提取物抗抑郁的量效也可能呈相反关系。

综上所述，解郁散正丁醇提取物和乙酸乙酯提取物均有抗抑郁作用，其抗抑郁机制可能与增加突出间隙单胺递质有关，其中，乙酸乙酯提取物表现出较好的量效关系。更深入的作用靶点和机制还需进一步研究。

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R285.5

1000-338X（2016）02-0029-03

2016-01-22