血清白血病抑制因子在体外受精-胚胎移植中的预测价值

俞 佳

血清白血病抑制因子在体外受精-胚胎移植中的预测价值

俞 佳

体外受精；胚胎移植；辅助生殖技术；白血病抑制因子

体外受精-胚胎移植（in vitro fertilization and embryo transfer，IVF-ET）是辅助生殖技术的核心部分，也是治疗不孕症的有效方法之一，但IVF-ET存在低妊娠率及高流产率。白血病抑制因子（leukemia inhibitory factor，LIF）是一种分泌型糖蛋白，在分泌期的中、晚期子宫内膜中，LIF呈短暂性、爆发性增高，水平增至增生期的4～5倍。LIF在大量表达的同时，伴随胚泡白血病抑制因子受体（LIFR）的表达，这有利于胚泡与子宫内膜的结合。在着床过程中，LIF和LIFR结合激发着床，还可刺激滋养层细胞分泌纤连蛋白，使胚泡容易与子宫内膜接触、黏附，且同时形成物质交换的通道，促进胚胎着床的成功。因此，通过检测LIF，及早有效预测IVF-ET结局，对防治先兆流产，及早诊断异位妊娠，改善妊娠结局，降低自然流产率具有重要的临床意义。

1 临床资料

1.1 一般资料2013年1月—2014年12月在我院生殖医学科就诊的体外受精-胚胎移植患者。据胚胎移植后14天血人绒毛膜促性腺激素（HCG）水平，将入组的患者分为妊娠组（HCG≥10IU/L）、未妊娠组（HCG＜10IU/L），各30例。妊娠组年龄20～35岁，平均（28.11±2.23）岁；不孕病程1～9年，平均（3.71± 1.51）年；既往生育0～1个，平均生育（0.21±0.04）个。移植后14天血HCG 259.5～902.2IU/L，平均血HCG（421.01±55.67）IU/L。未妊娠组年龄21～34岁，平均（27.69±2.54）岁；不孕病程1～8年，平均（3.90±1.67）年；既往生育0～1个，平均生育（0.22±0.03）个。移植后14天血HCG 0.1～9.3IU/L，平均血HCG（2.2± 1.48）IU/L。两组既往无肝脏、心脏、肾脏和脑原发疾病，近6个月未使用过免疫抑制药物，无中毒及自身免疫性疾病史者。

1.2 诊断标准体外受精-胚胎移植西医诊断标准参照《妇产科学》[1]相关内容制定：从妇女卵巢内取出卵子，在体外与精子受精并培养一阶段（包括卵细胞浆内单精子注射），再将发育到一定时期的胚胎移植到宫腔内，使其着床发育成胎儿的全过程。

1.3 纳入、排除标准纳入标准符合上述诊断标准，患者知情并同意进入观察随访者。排除标准：生殖器官发育异常者；未按规定来院随访，无法判断结果，或者资料不全无法判断结果者；参加其他临床试验的患者。

2 治疗方法

患者体外受精-胚胎移植后予黄体酮针40mg，1天2次，肌肉注射，地屈孕酮片10mg，1天2次，口服；补佳乐片3mg，1天2次口服治疗。

观察指标：于胚胎移植后7天、14天抽取静脉血5mL，采用ELISA法检测LIF水平。比较妊娠组与未妊娠组间胚胎移植后7天、14天血LIF水平。随访妊娠组患者，比较异位妊娠组与正常宫内妊娠组间胚胎移植后7天、14天血LIF水平。人白血病抑制因子（LIF）ELISA试剂盒由上海将来实业有限公司提供（批号201408，微孔板号140827002-LIF）。

统计学方法：应用SPSS17.0统计软件进行处理数据，计量资料以均数±标准差（x±s） 表示。组间比较采用成组t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

3 结果

妊娠组与未妊娠组移植后7天LIF比较，差异有统计学意义（P＜0.05），两组间移植后14天LIF比较，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。两组移植后7天与14天LIF比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。正常宫内妊娠组与异位妊娠组移植后7天LIF比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；两组14天LIF比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。两组移植后7天与14天LIF比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

表1 妊娠组、未妊娠组移植后7天、14天血LIF比较（x±s）

表2 正常宫内妊娠组、异位妊娠组移植后7天、14天LIF比较（ng/L，x±s）

4 讨论

体外受精-胚胎移植技术经过几十年的快速发展，随着临床促排卵方案及实验室胚胎培养体系的不断进步与完善，IVF-ET成功率从最初20%提高到目前的50%[2]。但因其流产率较高，活产率低，对IVF-ET患者的精神心理及经济上都有极大的负担。

LIF是白细胞介素-6家族中的一员。研究证实，LIF的异常表达与肿瘤、异位妊娠等多种疾病的发病有着密切的关联[3]。究其原因在于LIF不仅能抑制白血病细胞的增殖，还能调节包括原始生殖细胞、胚胎干细胞、肝细胞以及内皮细胞等在内的多种细胞其生长、发育、分化及着床等过程[4]。LIF与受体结合后，激活了细胞膜上gpl 30蛋白，从而形成二聚体。它能让细胞内一群非受体的酪氨酸激酶磷酸化，同时激活下游的转录因子，促进滋养细胞分泌及内细胞团生长[5]。转基因动物实验证实，敲除LIF基因的小鼠能产生胚泡，但不能着床，如将此胚泡植入到野生型假孕小鼠体内，则能着床并成功发育[6]。因此，在辅助生殖技术中，LIF表达峰值与着床时间的一致，是着床的关键因素，影响着体外受精-胚胎移植的最终结局。

本研究通过观察LIF在IVF-ET结局中的预测价值，尝试探讨其作用机制。研究中，妊娠组与未妊娠组分别在胚胎移植后7天、14天的LIF值比较均有统计学意义（P＜0.05）。一般情况下，在胚胎移植入宫腔后会游走2～3天，寻找适合着床的位置，在此过程中，亦会游走至子宫体以外的部位着床，异位妊娠因此发生。妊娠组胚胎移植后7天、14天血LIF值明显高于未妊娠组，且差异有统计学意义，说明在妊娠组患者中，血清LIF表达率较高，胚胎着床率较高。妊娠组移植后7天与14天比较差异无统计学意义，这说明LIF在移植后7天已处于一个较高表达的状态，这与胚胎着床的时间相一致。对照未妊娠组，移植后7天、14天血LIF均处于一个较低的水平，LIF分泌不足，也间接印证了LIF的表达与胚胎着床息息相关。胚胎着床后，着床部位很大程度上决定了妊娠的走向。本研究发现，正常宫内妊娠组，移植后7天与14天血LIF均处于一个较高且较稳定的水平，这在一定程度上提示胚胎的后续发育良好。异位妊娠组，移植后7天LIF同正常宫内妊娠组一样，处于一个较高水平，移植后14天时数值较前下降，但差异无统计学意义。移植后14天正常宫内妊娠组LIF与异位妊娠组相比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。异位妊娠患者血LIF水平低，这与Wegner等[7]研究结果相似。晏长荣等[8]研究亦发现，血清LIF在正常宫内妊娠组水平最高，先兆流产组次之，异位妊娠组最低。这可能是因为异位妊娠时受精卵植入环境恶劣，即便在着床前期异位妊娠部位产生LIF较正常的水平高，但其血清的LIF水平与正常宫内妊娠比较，仍偏低。而且在胚胎着床以后，异位妊娠组的LIF下降与宫内妊娠组比较更明显。上述结果提示我们，随着妊娠的持续进行，异常部位的妊娠不能引起LIF的持续高表达，这能在一定程度上预测胚胎移植的结局，及早进行干预及处理，改善妊娠结局，同时避免在异位妊娠中出现包块破裂、大出血、甚至危及生命等情况。

本研究结果表明，LIF能在一定程度上预测胚胎移植后的结局，这与LIF参与胚胎生长、发育、分化及着床等过程有密切关系。但其对自然流产率、活产率等数据的预测价值，仍需进一步的研究。（本研究受到杭州市红十字会医院院内课题研究项目资助[（No.hhyn201202）]

［1］乐杰，谢幸，林仲秋，等.妇产科学［M］.第7版.北京：人民卫生出版社，2008：354.

［2］邓伟民，赵彦鹏，葛明晓，等.益气血补肝肾中药对再次体外受精-胚胎移植妊娠率的影响［J］.广州中医药大学学报.2011，28（2）：20-23.

［3］Shin JE，Su HP，Jang YK.Epigenetic up-regulation of leukemia inhibitory factor（LIF）gene during the progression to breast cancer［J］.Molecules&Cells，2011，31(2)：181-189.

［4］钟富琴，刘荣华.白血病抑制因子在输卵管妊娠的表达及其在诊断方面的意义［J］.中国妇幼保健，2006，23（21）：3287.

［5］Wanggren K，Lalitkumar PG，Hambiliki F，et aI.Leukaemia inhibitory factor receptor and gpl30 in the human fallopian tube and endometrium before and after mifepristone treatment and in the human preimplantation embryo［J］.Mol Hum Reprod，2007，13（6）：391-397.

［6］Aghajanova L，AItmae S，Bjuresten K，et aI．Disturbances in the LIF pathway In the endometrium among women with unexplained infertility［J］.Fertil Steril，2009，91（6）：2602-2610.

［7］Wegner NT，Mcrshon JL.Evaluation of leukemia inhibitory factor as a marker of ectopic pregnancy［J］.Am J Obstet Gynecol.2001，184（6）：1074-1076.

［8］晏长荣，陈砚芬，郭青平.血清E2、P及LIF在异位妊娠早期诊断中的作用［J］.山西医科大学学报，2014，45（7）：615-617.

（收稿：2016-06-05修回：2016-07-05）

杭州市红十字会医院生殖医学科（杭州310003）

俞佳，Tel：13588150156；E-mail：cruzj@163.com