黄芪粗提物对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用

王　莹，　刘馨宇，　王沙沙，　郭　泽，　张雪梅

(延边大学农学院动物医学系，吉林 延吉 133002)



黄芪粗提物对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用

王莹，刘馨宇，王沙沙，郭泽，张雪梅*

(延边大学农学院动物医学系，吉林 延吉 133002)

摘要：通过连续灌胃酒精建立小鼠急性酒精性肝损伤模型，研究黄芪粗提物对小鼠肝脏的保护作用。设空白组、模型组、阳性组和黄芪粗提物高、中、低剂量组(8、4、2 g/kg)，分别检测肝脏指数，血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)以及肝脏中总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)的含量，采用HE染色观察肝脏损伤和脂肪变性情况。结果表明:黄芪粗提物下调肝脏指数，减少血清中ALT、AST以及肝脏中TC、TG的分泌，抑制肝脏损伤和脂肪变性形成，与模型组比较，黄芪粗提物高剂量组具有极显著差异(P<0.01)，黄芪粗提物中、低剂量组具有显著差异(P<0.05)。黄芪粗提物对小鼠急性酒精性肝损伤有保护作用，可为黄芪粗提物在临床上的应用提供理论指导。

关键词：急性酒精性肝损伤；黄芪粗提物；小鼠；脂肪变性

酒精性肝病(ALD)是由于长期大量饮酒而引起的肝脏损伤性疾病，也是我国常见的肝脏疾病之一[1]。根据病理组织学观察，酒精性肝损伤分为4个阶段：酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝纤维化和酒精性肝硬化[2]，其机制尚未完全阐明。目前研究表明，酒精在肝脏的代谢过程中干扰营养物质代谢并通过炎症和免疫反应产生肝脏损伤，同时局部缺氧和病毒叠加加重了肝脏损伤的进程[3]。黄芪(Astragalusmembranaceus)是最古老中草药之一，味甘、微温，归肺、脾经，咀嚼有微豆腥味[4]，具有升阳补气，固表止汗，脱毒排脓等功效[5]。现代药理学研究表明，黄芪具有保护心肌，降压舒张血管，改善代谢功能，能增强免疫细胞活性，止汗、利尿等多种作用[6]，但对酒精性肝病治疗方面的研究较少。本试验通过研究黄芪粗提物对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用，为黄芪在临床上的开发与应用提供可靠的理论依据。

1材料与方法

1.1供试动物

昆明种小鼠，雄性，(18±2) g(购自延边大学实验动物中心)。

1.2药品与试剂

黄芪(购于吉林省延吉市延西大药房)；56°红星二锅头(购于北京红星酿酒总厂)；联苯双酯滴丸[购于吉林省延吉市延西大药房(批号：A02141208)]；谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)试剂盒(均购于南京建成生物工程研究所)。

1.3黄芪粗提物的制备

黄芪饮片400 g, 浸泡过夜，加热回流，过滤，重复3次后，合并滤液，浓缩至1.8 g/L。

1.4试验分组、造模与给药

将30只小鼠随机分为空白组、模型组、阳性组和黄芪粗提物高、中、低剂量组，每组5只。除空白组外其余各组均灌胃56°红星二锅头20 mL/kg, 连续15 d。自造模第1天起，黄芪粗提物高、中、低剂量组及阳性组灌胃给药1次/d，药物组给予黄芪粗提物分别为8、4、2 g/kg，阳性组给予联苯双酯1.8 mg/kg，连续15 d，空白组和模型组灌胃等体积生理盐水。

1.5各指标检测

末次给药12 h后称重，眼球取血，制备血清，测定血清中AST和ALT的含量；剥离肝脏，称湿肝重，计算肝脏指数；用生理盐水制备10% 肝匀浆，测定肝匀浆中的TC和TG含量；部分肝脏固定，采用HE染色，观察肝脏损伤和脂肪变性等情况。

1.6统计学分析

2结果与分析

2.1黄芪粗提物对急性酒精性肝损伤小鼠肝脏指数的影响

由表1可知,模型组与空白组比较，差异极显著(P<0.01)。黄芪粗提物高、中剂量组与模型组比较差异极显著(P<0.01)，低剂量组与模型组比较差异显著(P<0.05)。结果表明：黄芪粗提物能够显著下调肝脏指数，且高、中、低剂量组呈一定的量效关系。

表1　黄芪粗提物对小鼠肝脏指数的影响

注：与空白组比较，##表示P<0.01；与模型组比较，*表示P<0.05，**表示P<0.01。

2.2黄芪粗提物对急性酒精性肝损伤小鼠血清中ALT、AST及肝脏中TC、TG的影响

由表2可知,各因子模型组与空白组比较，差异极显著(P<0.01)。黄芪粗提物高、中剂量组与模型组比较差异极显著(P<0.01)，低剂量组与模型组比较差异显著(P<0.05)。结果表明：黄芪粗提物能够抑制血清中ALT、AST以及肝脏中TC、TG的分泌，且黄芪粗提物高、中、低剂量组呈一定量效关系。

表2　黄芪粗提物对血清中ALT和AST以及肝脏中TC和TG的影响

注：与空白组比较，##表示P<0.01；与模型组比较，*表示P<0.05，**表示P<0.01。

2.3黄芪粗提物对急性酒精性肝损伤小鼠病理组织学的影响

肝组织HE染色结果见图1。空白组肝细胞基本完整，肝小叶清晰，肝索以中央静脉为中心呈放射状排列(图1a)。模型组肝细胞排列紊乱，肝小叶结构模糊，核碎裂、溶解，可见颗粒变性、炎性细胞浸润和点、片状坏死，胞浆、胞核淡染，且有细小脂滴蓄积(图1b)。阳性组肝细胞结构接近于完整(图1c)。黄芪粗提物高、中、低剂量组依次减轻肝细胞坏死程度，颗粒变性、炎细胞浸润和点状坏死明显减少，肝细胞脂肪变性程度依次减轻(图1d～f)。结果表明，黄芪粗提物高、中、低剂量组可不同程度抑制肝细胞坏死和脂肪变性形成。

图1　黄芪粗提物对小鼠脂肪变性的影响(100×)

2.4黄芪粗提物对急性酒精性肝损伤小鼠脂肪变性分级的影响

根据变性程度分为5级,0级：肝细胞正常，肝小叶结构清晰，肝索排列整齐；1级：肝细胞少部分溶解，略见细小脂滴，病变占体积1/3；2级：部分肝组织内见细小脂滴，病变占体积1/2；3级：肝组织内见较大脂滴，部分肝细胞坏死，病变占体积3/4；4级：肝组织内见大小不等脂滴交替出现，大量肝细胞坏死。平均级数=(各级分值×本级动物总合)/本组动物总数。由表3可知，模型组脂肪变性平均级数为3.2，空白组脂肪变性平均级数为0，黄芪粗提物高、中、低剂量组平均级数分别为1.2、1.4和2.6，表明黄芪粗提物高、中、低剂量组肝细胞坏死程度和脂肪变性程度依次减轻。

表3　黄芪粗提物小鼠脂肪变性分级的影响

3讨论与结论

机体摄入酒精后，90%以上在肝脏中代谢，肝损伤也是酒精的主要毒性作用之一[7]。低剂量摄入会有减少紧张、产生兴奋、精力无法集中、反应延长、协调能力下降等效果，高剂量摄入会造成眩晕、呕吐、呼吸困难甚至休克等情况[8]。本试验中发现，小鼠摄入酒精后出现摄食量减少、被毛无光泽、共济失调、翻正反射消失等情况。

黄芪味甘、性微温，归肺、脾、肝、肾经，益气固表，补气养血，降血压，还能治疗心脏疾病，消除肾炎患者的蛋白尿[9]。杜宇琼等的研究表明，黄芪能够明显抑制大鼠肝纤维化模型中TIMP-1及MMP-1，提示黄芪具有抗肝纤维化的作用[10]。佟宇等研究也表明，黄芪可以保护脂多糖诱导的肝细胞损伤，提示黄芪具有修复肝细胞的能力[11]。本试验以急性酒精性肝损伤为模型，通过观察肝脏指数、肝脏脂肪变性和对ALT、AST、TC、TC因子含量的测定，研究黄芪粗提物对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用。

肝脏是酒精代谢的重要场所，肝脏指数可在一定程度上反映出酒精肝损伤时肝脏增重的情况[12]，本试验中，模型组小鼠肝脏指数高于正常组，黄芪粗提物高、中、低剂量组对急性酒精性肝损伤小鼠肝脏指数起到不同程度的抑制作用。ALT主要分布于肝脏、骨骼、心肌和肾脏等组织器官中，是早期诊断肝损伤的重要指标，在急慢性肝炎以及肝硬化中，ALT均可升高[13]。在诊断肝损伤方面，AST升高的意义与ALT相似，当肝细胞受损时，此酶可释放进入血液，使血液中酶浓度增高，同时可反映出肝细胞受损程度[14]。TC和TG对维持正常细胞结构、细胞内信号传导以及能量代谢等都起到非常重要的作用，二者密切联系[15]。血浆胆固醇主要来自肝脏的合成，肝组织中脂肪变性不仅血浆TC和TG含量上升，肝细胞中TC和TG含量也上升，因此，胆固醇代谢紊乱与肝脂肪变性密切相关[16]。在本试验中，黄芪粗提物高、中剂量组对ALT、AST、TC和TG均能起到极显著抑制作用，低剂量组均能起到显著抑制作用，说明黄芪粗提物对急性酒精性肝损伤小鼠起到保护作用。病理组织学检查结果显示，模型组肝小叶结构模糊，核碎裂、溶解，颗粒变性，炎性细胞浸润和点、片状坏死，胞浆、胞核淡染，且有细小脂滴蓄积，黄芪粗提物高、中、低剂量组小鼠肝细胞坏死程度和脂肪变性程度依次减轻，表明黄芪粗提物对酒精诱导的小鼠急性肝损伤具有一定的保护作用，与肝脏ALT、AST、TC和TG含量变化所反映的结果基本一致。

总之，黄芪粗提物通过下调肝脏指数，抑制血清中ALT、AST以及肝脏中TC、TG的分泌，减轻肝细胞坏死和脂肪变性程度，从而对急性酒精性肝损伤小鼠起到保护作用，且黄芪粗提物高、中、低剂量组呈一定量效关系。

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收稿日期：2016-03-06基金项目：国家自然科学基金项目(31260622)；国家自然科学基金项目(31060349)

作者简介：王莹(1992—)，女，吉林长春人，在读硕士，研究方向为动物医学研究。张雪梅为通信作者， E-mail:zhangxm@ybu.edu.cn

文章编号：1004-7999(2016)02-0105-04

DOI:10.13478/j.cnki.jasyu.2016.02.003

中图分类号：R258

文献标识码：A

Treatment effect of Astragalus extract on acute alcoholic liver injury in mice

WANG Ying,LIU Xinyu,WANG Shasha,GUO Ze,ZHANG Xuemei*

(DepartmentofAnimalMedicine,AgriculturalCollegeofYanbianUniversity,YanjiJilin133002，China)

Abstract：The model of acute alcoholic liver injury in mice was established by giving alcohol continuously, the protective effect of Astragalus extract on the liver of mice was investigated.The mice were divided into blank group, model group, positive group and Astragalus extract high, medium and low dose groups (8, 4, 2 g/kg). The liver index was determined, the content of ALT and AST in serum was investigated, the content of TC and AST in liver was determined.The degree of hepatic steatosis was determined using HE staining. The result showed that Astragalus extract could treat acute alcoholic liver injury by abating liver index, reducing the secretion of AST and AST in serum and the secretion of TC and TG in liver of mice, inhibiting the injury of liver and the form of hepatic steatosis. Compared with model group,Astragalus extract high dose group had very significant difference(P<0.01), medium and low dose groups had significant difference(P<0.05). It suggests that Astragalus extract has certain protective effect on acute alcoholic liver injury of mice and provides a theoretical guidance.

Key words:acute alcoholic liver injury; Astragalus extract; mice; hepatic steatosis