丹参中丹参酮IIA的快速提取方法的研究

谢显莉 张利

（四川省中江县农业局 四川中江 618100）

丹参中丹参酮IIA的快速提取方法的研究

谢显莉 张利

（四川省中江县农业局 四川中江 618100）

本研究对影响超声细胞粉碎法提取丹参酮ⅡA的多个因素进行研究，以丹参饮片作试材，优选料液比、乙醇浓度、颗粒大小、超声时间、超声功率五个工艺参数。丹参颗粒为60目，提取溶剂为50%乙醇，超声功率为1000W，超声时间4min，丹参酮ⅡA的最高提取率可达0.5316%；超声细胞粉碎法具有提取效率高、时间短、能耗低的优点，是丹参酮ⅡA提取的有效途径之一。

超声细胞粉碎法；丹参饮片；丹参酮ⅡA；工艺参数；快速提取

引言

中药丹参为唇形科（Lamiaceae）鼠尾草属多年生草本植物丹参（Salvia miltiorrhiza）的干燥根及根茎，是我国传统中药材。丹参有效成分中主要包括水溶性的酚酸类成分和脂溶性的丹参酮类成分。其中脂溶性成分存在于丹参根皮中，具有抑菌、抑制血小板聚集、耐缺氧、改善冠状动脉供血等药理作用[1]，主要是含菲醌类结构的丹参酮类化合物，代表成分为丹参酮I、丹参酮ⅡA和隐丹参酮。丹参中的丹参酮ⅡA含量较高，该成分也是判断丹参提取物提取效果和丹参药材品质的重要指标[2]。由于丹参酮ⅡA对光不稳定，且受热易分解[3]，因此传统的有机溶剂浸提法存在着有用量大、耗时长、工序多、产率低等问题。超声波提取法具有提取时间短、无需加热、产率高、污染少等优点[4～5]。超声细胞粉碎仪功率高且可调节，相比超声波清洗器能够显著缩短提取时间，探讨功率对其提取率的影响，得出的最适工艺参数更具可控性。

本研究通过超声波细胞粉碎仪从丹参饮片中提取丹参酮ⅡA，以确定最适的提取工艺，旨在为从丹参饮片中提取丹参酮ⅡA提供一个优良、便捷的提取方法，也为合理开发利用丹参资源开辟一条新的途径。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

丹参饮片购买于四川天然生中药饮片有限公司。

丹参酮ⅡA对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110766-200518）；乙醇（分析纯，成都科龙化工试剂有限公司）。

1.2 主要仪器

JP99-2D超声波细胞粉碎机（宁波新芝生物科技股份有限公司）；UV-3200PC紫外可见分光光度计（上海美谱达仪器有限公司）；LC-20A高效液相色谱仪系统（日本岛津公司），配备SPD-20A型紫外检测器、SIL-20A型自动进样器、LC-20AB型输液泵、CTO-10AS型柱温箱、DGU-20A3型在线脱气机；BT-124s分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；FW-100万能粉碎机（天津泰斯特仪器有限公司）；HG-9070电热恒温鼓风干燥箱（上海一恒科技有限公司）；Water Purifier实验室专用超纯水机（四川沃特尔科技发展有限公司）。

1.3 丹参酮ⅡA含量测定

1.3.1 色谱条件

色谱柱：Phenomenex C18（250mm×4.6mm，5μm，Torrance，USA）；流动相：甲醇：水（75：25）；检测波长：270nm；流速：1.0mL·min-1；柱温：35℃；进样量：10μL。理论塔板数按丹参酮ⅡA 峰不低于2000。

1.3.2 供试品溶液的制备

取丹参饮片置于60℃烘箱中干燥至质量恒定，粉碎，过筛，储于干燥器中备用。精确称取粉末1.000g于50mL具塞的锥形瓶中，加入适当浓度、适当体积的乙醇，密封称量溶液总质量并记录，超声波提取，静置至室温，用乙醇补足减失的重量。提取液摇匀、过滤，定容于25.00mL棕色容量瓶中，用孔径为0.45μm滤膜滤过，即得供试品溶液，待测[2]。

1.3.3 样品测定

将样品供试液注入高效液相色谱仪，在色谱条件下进行分析，测得的峰面积代入相应线性方程，并转化为浓度单位，并按照以下方程计算样品中丹参酮ⅡA的提取率。

式中：Y为丹参酮ⅡA的提取率（%）；C为由标准曲线得到丹参酮ⅡA的浓度（μg·mL-1）；N为丹参酮ⅡA的稀释倍数；V为供试品溶液的总体积（mL）；m为丹参饮片粉末质量。

1.4 实验设计

选取乙醇浓度（A）、颗粒大小（B）、超声时间（C）、超声功率（D）为因素，以丹参酮ⅡA的提取率为指标，进行L9（34）正交设计。实验所得数据采用正交设计助手Ⅱ（专业版）处理，以优选出丹参饮片中丹参酮ⅡA的最佳提取工艺。

2 结果和分析

在料液比固定为1：10的试验条件下，L9（34）正交试验与分析结果见表1，方差分析结果见表2。四因素的极差结果（表1）表明，影响超声波提取丹参酮ⅡA提取率的主次因素为：B（颗粒大小）>A（乙醇浓度）>C（超声时间）>D（超声功率），最适提取工艺条件为A1B3C2D2。乙醇浓度对提取效率影响虽然较大，但由于乙醇浓度为40%和50%时，提取效率相差不大，考虑到试剂的回收利用，乙醇浓度为50%较为合适。综合以上分析结果，以丹参酮ⅡA的提取率为考核指标，确定实际生产工艺条件为A2B3C2D2，即丹参颗粒为60目，提取溶剂为50%乙醇，超声功率为1000W，超声时间为4min。

表1 L9（34）正交试验结果

表2 方差分析

由于此最佳试验组合未出现在九次试验方案中，经验证后丹参酮ⅡA的提取率可达0.5316%。

3 结论与讨论

超声细胞粉碎法提取丹参饮片中丹参酮ⅡA的最适工艺参数为乙醇浓度50%，颗粒大小60目，超声时间4min，超声功率1000W。该结果与张琼引[6]报道的结论：以70%乙醇提取4次，30min/次有所差异，主要原因可能在于其使用的是超声波清洗器，功率较低，而本研究采用超声细胞粉碎法提取丹参酮ⅡA，显著减少提取时间，并考察了超声功率对丹参饮片中丹参酮ⅡA提取率的影响。因此，本研究可为丹参饮片中丹参酮ⅡA的快速提取及含量分析评价提供方法参考。通过验证，超声细胞粉碎法提取丹参饮片中丹参酮ⅡA取得了较好的效果。

[1]高玉贵，宋玉梅，杨友义，唐冀雪，刘文富.丹参酮的药理[J].药学学报，1979，14（2）：75～82.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：化学工业出版社，2015.

[3]林恒标，林恒宽.丹参酮ⅡA 的稳定性研究[J].中医研究，2005，18（8）：16.

[4]毕跃峰，贾陆，张小娟，孙孝丽，刘宏民.不同提取方法对丹参中丹参酮ⅡA和丹酚酸 B 含量测定的影响[J].药物分析杂志，2009，29（7）：1209～1212.

[5]Dong J，Liu YB，Liang ZS，Wang WL.Investigation on ultrasound-assisted extraction of salvianolic acid B from Salvia miltiorrhiza root[J].Ultrasonics Sonochemistry，2010，17：61～65.

[6]张琼引，顾燕.超声法提取丹参药材中丹参酮ⅡA的工艺优化[J].中南医学，2009，12（7）：918～919.

R284

A

1005-7897（2016）10-0097-02

2016-5-10

谢显莉，女，四川中江人，农艺师，从事经济作物技术推广工作。