体液中测定吗啡含量的不确定度评定

董 颖，栾玉静，杜鸿雁，常 靖，王瑞花



体液中测定吗啡含量的不确定度评定

董 颖，栾玉静，杜鸿雁，常 靖，王瑞花

（公安部物证鉴定中心，北京100038）

摘要：目的 依据测量不确定度的评定原则，对不确定度的评定方法进行探讨，建立液相色谱-质谱联用法测定体液中测定吗啡含量的不确定度分析方法。方法 采用液相色谱-质谱联用仪对体液中吗啡含量检测的不确定度进行评定，建立该方法测定体液中吗啡含量不确定度的数学模型，确定不确定度来源及分量，选择合理的评定方法，计算出检测结果的合成标准不确定度和扩展不确定度。结果 当体液中吗啡含量为224.3 ng/mL时，其扩展不确定度为5.4 ng/mL，k=2。其中，测量重复性对不确定度的影响最大。结论 采用液相色谱-质谱联用法测定体液中吗啡的含量应严格控制实验条件，要多人多次重复测量。

关键词：法医毒物分析；吗啡；不确定度

毒物分析结果往往成为司法判定的重要依据，其测量不确定度评定与表示具有重要意义。随着实验室认可活动的发展，越来越多的实验室都具有了方法确认的程序［1-4］，而测量不确定度的评定是其重要内容之一，但是很多实验室程序规定与现实脱节，不确定度的评定方法比较混乱。本文对体液（指血液或尿液）中吗啡含量测定方法的不确定度评定进行探讨，为定量测定生物体液中吗啡含量的不确定度评定提供参考模型。

1 材料与方法

1.1 主要仪器及试剂

液相色谱-质谱联用仪Waters Xevo TQ MS（Wat-ers，美国）；电子天平Sartotius BP210S（Sartotius，徳国）；所用试剂均为色谱纯，水为超纯水（18.2W）。

1.2 检测方法

测量方法参照本实验室IFSC 04-01-04-2011《生物样品中吗啡、单乙酰吗啡的液相色谱检验方法》。取生物体液检材1mL于15mL具塞试管中，加入乙腈，振荡、离心，分离有机相，浓缩至干，加1mL甲醇或乙腈溶液定容，0.22μ m微孔有机滤膜过滤，供仪器分析。取相应空白体液1mL，添加100ng吗啡，按上述操作规程与检材平行操作。检材溶液与添加吗啡的溶液分别进样3μ L，峰面积各取平均值，以外标峰面积比较法定量。

2 结果与讨论

2.1 数学模型

液相色谱质谱联用法测定体液中吗啡含量的定量数学模型为：

式中：w —体液中吗啡的质量分数，ng/mL；frep—重复性校正因子；

m—添加吗啡总量，ng；AT—添加色谱峰面积平均值；

Ai—检材色谱峰面积平均值；V—检材量，mL。

式中：m —添加吗啡总量，ng；—吗啡标准使用液的浓度，ng/mL；

Vi—移取标准使用液的体积，mL。

2.2 不确定度来源分析及量化合成

从测量过程和数学模型上分析来源并量化合成。

2.2.1 重复性校正因子freprep引入不确定度u（freprep）

来源于测量方法的重复性。取10份检材，按照1.2项下处理，10次测量平均值为224.3ng/mL，并根据贝塞尔公式计算标准偏差为7.15。

来源于标准储备液的制备和标准储备液稀释成标准使用液的过程。

2.2.2.1 标准储备液

称取吗啡纯品100mg置于100mL 容量瓶中配制成1mg/mL的溶液。

式中：c1—标准储备液的浓度，mg/mL ；m1—吗啡纯品的质量，g；

V1— 标准储备液定容体积，mL。

（1）m1引入标准不确定度u （m1）

（2）V1引入标准不确定度u （V1）1）校准对体积的影响u1（V1）：合格的A级100mL容量瓶，依据JJG196-2006《常用玻璃量器》，最大允差ΔV1为±0.10 mL，假定为矩形分布，则

2.2.2.2 稀释过程

用100～1000mL可 调 移 液 器 吸 取V2=1mL标准储备液，置于100mL容量瓶中，稀释定容。再用100～1000mL可调移液器吸取1mL稀释液，置于100mL容量瓶中，稀释定容，制成标准工作液。

（1）100～1000mL可调移液器引入标准不确定度u（V2）

1）校准对体积的影响u1（V2）：已知100～1000mL可调移液器取1000mL样品时容量允差为±1.0%，取矩形分布，相对标准不确定度为：

将上述V2不确定度分量合成：

（2）100mL容量瓶引入标准不确定度

同u（V1），在重复性校正因子f rep引入不确定度u（f rep）中已考虑，此处不重复计算。

2.2.2.3 合成标准不确定度u（）

2.2.3 生物检材移取V引入标准不确定度

同u（V2），在重复性校正因子frep引入不确定度u（frep）中已考虑，此处不重复计算。

2.2.4 移取标准使用液Vi引入标准不确定度

同u（V2），在重复性校正因子frep引入不确定度u（frep）中已考虑，此处不重复计算。

2.2.5 合成标准不确定度的计算

表 1 不确定度分量表Table 1 Constituent factors of uncertainty

2.2.6 扩展不确定度的计算

2.2.7 测量结果表示

检材中吗啡的含量：（224.3±5.4）ng/mL，k=2

本文以测定体液中吗啡含量为例，讨论了不确定度的主要来源及其各不确定度分量评定方法。分析影响测量不确定度结果的各个因素，比较其对总测量不确定度的贡献。可以看出，主要来源是测量的重复性引起的。因此在吗啡类案件的检验鉴定中，要多人多次重复测量。

参考文献

［1］ 刘烁，花锋，唐丹舟，等. 法庭科学实验室质量控制研究综述. 刑事技术，2013（2）：3-10.

［2］ 刘烁，董颖，常靖，等. 毒物分析方法的确认.刑事技术，2013（5）：3-6.

［3］ 王桂强. 物证鉴定的技术方法确认和标准操作规程.刑事技术，2006（6）：3-8.

［4］ 花锋. 论法庭科学实验室认可的特殊要求. 刑事技术，2007（5）：3-7.

［5］ JCGM. International vocabulary of basic and general term in metrology（VIM）. 3nd ed. 2004.

［6］ JJF1001-2011， 通用计量术语和定义.

［7］ JJF1059.1-2012， 测量不确定度评定与表示.

中图分类号：DF795.1

文献标识号：A

文章编号：1008-3650（2016）01-0054-03

收稿日期：2014-12-22

基金项目：“十二五”国家科技支撑计划课题（2012BAK02B02）

作者简介：董 颖，副研究员，硕士，研究方向为毒物分析。 E-mail： dy@cifs.gov.cn

Evaluation of Measurement Uncertainty for the Determination of Morphine in body Fluids

DONG Ying，LUAN Yujing，DU Hongyan，CHANG Jing，WANG Ruihua （Institute of Forensic Science， Ministry of Public Security， Beijing 100038， China）

ABSTRACT：Objective To evaluate the measurement uncertainty for the determination of morphine content in body fl uids because of its great signifi cance in the fi eld of forensic toxicology. Methods A mathematical model of uncertainty evaluation was designed for the determination results of morphine in body fl uids performed with liquid chromatography-tandem mass spectrometry. The various sources and quantity of uncertainty were determined by the established mathematical model. A reasonable evaluation method was selected to calculate the combined standard uncertainty and expanded uncertainty. Results The expanded uncertainty of 5.4 ng/Ml （k=2） was derived with 224.3 ng/mL of morphine. The repeatability of detection was regarded as the major source of uncertainty of measurement. Conclusions It is necessary and important to control experimental conditions strictly and perform repeated measurements by different people to ensure the accuracy of the testing results.

KEY WORDS：forensic toxicology；morphine；uncertainty of measurement