拉米夫定联合阿德福韦对乙型肝炎患者免疫应答与浆细胞样树突状细胞功能变化的研究

陈晓春，黄昌靖

(1.浙江省衢州市人民医院 感染科，浙江 衢州 324000，2.湖北工业大学 生物工程学院，湖北 武汉 430070)

拉米夫定联合阿德福韦对乙型肝炎患者免疫应答与浆细胞样树突状细胞功能变化的研究

陈晓春1Δ，黄昌靖2

(1.浙江省衢州市人民医院 感染科，浙江 衢州 324000，2.湖北工业大学 生物工程学院，湖北 武汉 430070)

目的 探讨拉米夫定联合阿德福韦对乙型肝炎患者免疫应答与浆细胞样树突状细胞功能变化的影响。方法 收集48例慢性乙型肝炎患者，随机分为对照组和实验组，每组各24例，在常规治疗基础上，对照组患者给予拉米夫定治疗，实验组在对照组基础上给予阿德福韦治疗，治疗结束后，对所有患者的血清AST、ALT、IFN-α水平及外周血CD4+、CD8+T细胞、CD4+/CD8+、pDCs水平进行检测。结果 治疗后，与对照组比较，实验组患者的外周血CD4+T细胞及CD4+/CD8+水平较高(P<0.05)；实验组患者的血清IFN-α及外周血pDCs水平较高(P<0.05)；实验组患者的血清AST、ALT水平较低(P<0.05)。结论 拉米夫定联合阿德福韦能够显著提高乙型肝炎患者的免疫应答以及浆细胞样树突状细胞功能，改善肝功能。

拉米夫定；阿德福韦；乙型肝炎；免疫应答；浆细胞样树突状细胞功能

乙型肝炎由乙肝病毒(hepatitis B virus，HBV))引起的、以肝脏炎性病变为主并可引起多器官损害的一种传染病[1]。本病属于世界流行性传染病，资料显示，全球约有20亿人已感染HBV，其中3.5亿～4亿人患有慢性肝脏感染，每年约有600万人死于急性或慢性乙型肝炎[2]。而我国是乙型肝炎的高发区，目前有2000多万慢性乙肝(chronic hepatitis B，CHB)患者，每年因乙肝相关疾病死亡的约有23.7万人，其中有15.6万人死于肝癌[3]，并且发病率呈逐年上升的趋势。CHB具有传染性，控制不良容易反复发作，进展为肝硬化，甚至肝癌，严重威胁患者生命。因此，早期合理有效的治疗尤为重要。对于慢性乙型肝炎，临床上尚无特异性的治疗手段，主要使用拉米夫定、干扰素-α进行抗病毒治疗，但是，拉米夫定长期应用容易出现病毒变异和临床抗药性[4]，干扰素的近期治疗效果也不甚理想。阿德福韦属于新型的核苷类抗病毒药物，有研究显示，阿德福韦对HBV野毒株和对拉米夫定耐药的突变株均具有显著的治疗作用[5]。因此，本研究通过观察治疗前后患者血清谷草转氨酶(aspartate aminotransferase，AST)、谷丙转氨酶(Alanine transaminase，ALT)、干扰素-α(interferon-α，IFN-α)水平及外周血辅助性T细胞CD4(monoclonal antibody to CD4，CD4+)、辅助性T细胞CD8(monoclonal antibody to CD8， CD8+T)细胞、CD4+/CD8+、浆细胞样树突状细胞(Plasma cell like dendritic cells，pDCs)水平的变化，探讨拉米夫定联合阿德福韦对患者免疫应答与浆细胞样树突状细胞功能的影响。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集浙江省衢州市人民医院感染科2013年12月～2014年12月的确诊为慢性乙型肝炎的患者48例，随机分为实验组和对照组。实验组患者24例，男性15例，女性9例，年龄22～70岁，平均年龄(39.6±12.1)岁，平均病程(8.5±4.2)月。对照组患者24例，男性16例，女性8例，年龄24～68岁，平均年龄(38.7±11.6)岁，平均病程(8.9±4.1)月。2组患者的性别组成、年龄分布、平均病程等一般临床资料差异无统计学意义，具有可比性，本实验经本院伦理协会批准，患者签署知情同意书。诊断及排除标准：诊断依据根据2010年中华医学会肝病学分会制订的《慢性乙型肝炎防治指南(2010年版)》关于慢性慢性乙型肝炎的诊断标准[6]，并经实验室检查确诊；排除标准：①乙肝病毒表面抗原(HbeAg)阴性；②合并其他慢性肝病、丙型肝炎、丁型肝炎、自身免疫性肝病等；③合并恶性肿瘤；④合并心力衰竭、肾功能不全等；⑤近期服用抗病毒药物；⑥对研究中所涉及药物过敏的患者。

1.2 方法

1.2.1 治疗方法：根据临床用药指南，2组患者均常规给予肝保护以及对症治疗，在此基础上，对照组患者给予拉米夫定片(安徽贝克生物制药有限公司，国药准字H20103618)100 mg，1次/天口服；实验组患者在对照组治疗的基础上给予阿德福韦酯片(江苏天士力帝益药业有限公司，国药准字H20080365)10 mg，1次/天口服。2组患者均治疗1年。

1.2.2 血清指标采集：治疗前后，所有研究对象均采集空腹12小时后静脉血5 mL，通过离心机分离血清，采用OLYMPUSAU5400全自动生化分析仪，通过速率法检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)及门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平；采用美国BioTek Synergy H1全功能酶标仪，严格按照试剂盒说明操作，通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中干扰素α(IFN-α)水平。

1.2.3 细胞学检测：治疗前后，采集所有患者空腹静脉血3 mL，置于抗凝管中，采用贝克曼库尔特Gallios流式细胞仪。检测外周血中CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4+/CD8+比值及浆细胞样树突状细胞(pDCs)水平

2 结果

2.1 治疗前后2组患者外周血CD4+、CD8+T细胞及CD4+/CD8+水平比较 治疗后2组患者的外周血CD4+T细胞及CD4+/CD8+水平与治疗前比较均明显升高，与对照组比较，实验组患者的外周血CD4+T细胞及CD4+/CD8+水平明显较高(P<0.05)；治疗后2组患者的外周血CD8+T细胞水平与治疗前比较差异无统计学意义。见表1。

表1 治疗前后2组患者外周血CD4+、CD8+ T细胞及 CD4+/CD8+水平比较

*P<0.05，与同组治疗前比较，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，与对照组治疗后比较，compared with control group post-treatment

2.2 治疗前后2组患者血清IFN-α及外周血pDCs水平比较 治疗后2组患者的血清IFN-α及外周血pDCs水平与治疗前比较均明显升高，与对照组比较，实验组患者的血清IFN-α及外周血pDCs水平明显较高(P<0.05)。见表2。

表2 治疗前后2组患者血清IFN-α及外周血pDCs水平比较±s)

*P<0.05，与同组治疗前比较，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，与对照组治疗后比较，compared with control group post-treatment

2.3 治疗前后2组患者血清AST、ALT水平比较 治疗后2组患者的血清AST、ALT水平与治疗前比较均明显降低，与对照组比较，实验组患者的血清AST、ALT水平明显较低(P<0.05)。见表3。

组别 例数时间ASTALT对照组24治疗前98 85±11 58147 98±21 05治疗后43 67±6 21∗56 34±8 04∗实验组24治疗前99 73±12 48148 65±21 22治疗后32 75±4 35∗#47 38±6 41∗#

*P<0.05，与同组治疗前比较，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，与对照组治疗后比较，compared with control group post-treatment

3 讨论

近年来，随着我国乙肝疫苗接种的不断普遍，CHB的发病情况虽然得到一定控制，但发病率及死亡率仍不断上升，居于各种传染病之首，给患者带来很大的痛苦。CHB临床主要表现为畏食、乏力、腹胀、恶心、肝区疼痛等[7]，严重者可出现肝脾肿大、黄疸、肝区疼痛，引发脂肪肝、肝硬化、肝癌等严重并发症，危及患者生命。本病主要通过血液、母婴、性接触等途径传播，其发病与HBV在机体内持续复制和机体免疫清除功能障碍两个要素有关，所以，抗病毒是CHB最主要的治疗手段。抗病毒药物种类较多，但单药应用临床疗效并不理想，抗病毒药物联合应用目前已成为临床研究热点之一[8]。拉米夫定是双脱氧核苷类似物，能够竞争性的抑制HBV病毒DNA链的合成和延长，减少HBV复制，起到抗病毒的作用。拉米夫定治疗CHB需要长期应用才能实现理想治疗作用，但是，随着用药时间的延长很容易出现病毒耐药[9]。阿德福韦是新型的腺嘌呤核苷类似物，能够与腺苷酸竞争性掺入病毒DNA链，抑制DNA聚合酶，从而抑制病毒复制，同时可以刺激机体的免疫反应，具有较强的抗病毒作用。有研究显示[10]，拉米夫定耐药慢性乙型肝炎患者采用阿德福韦和拉米夫定联合治疗有效。所以，在本实验中，笔者通过观察患者治疗前后免疫应答与浆细胞样树突状细胞功能的变化，探讨拉米夫定联合阿德福韦对慢性乙肝患者的治疗效果及作用机理。

本研究结果发现，实验组患者的外周血CD4+T细胞及CD4+/CD8+水平与对照组比较明显较高，证实了拉米夫定联合阿德福韦能够提高患者的免疫功能。T淋巴细胞是构成机体免疫系统的主要部分，能够反应机体的免疫状态，在CHB患者体内，CD4+T细胞能够促进B淋巴细胞产生抗体，清除HBV；CD8+T细胞能够识别病毒与肝细胞结合形成的复合物，对肝细胞产生破坏，有报道称，体内高水平的病毒载量导致持续低下的T淋巴细胞反应[11]，使得血清CD4+T细胞水平、CD4+/CD8+比值降低，免疫功能下降。

pDCs是一种天然抗原提呈细胞，能够合成释放大量IFN-α。IFN-α能够诱导细胞合成抗病毒蛋白，抑制乙肝病毒的复制，发挥广谱抗病毒作用。有研究显示，在CHB患者体内pDCs数量和功能都有所降低[12]。本研究结果显示，实验组患者的血清IFN-α及外周血pDCs水平与对照组比较明显较高(P<0.05)，表明拉米夫定联合阿德福韦能够能够提高pDCs功能，恢复机体抗病毒效应。所以，实验组患者的血清AST、ALT水平与对照组比较明显较低(P<0.05)，患者的肝功能得到恢复。

本实验通过48例慢性乙型肝炎患者血清AST、ALT、IFN-α水平及外周血CD4+、CD8+T细胞、CD4+/CD8+、pDCs水平的检测结果进行分析，证实了拉米夫定联合阿德福韦能够显著提高乙型肝炎患者的免疫应答以及浆细胞样树突状细胞功能，改善肝功能，对临床有指导意义，在下一步研究中，将进行分子机制方面研究，为本实验所反映的现象做出进一步论证和分析。

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(编校：谭玲)

Effect of lamivudine combined with adefovir on changes of immune response and plasmacytoid dendritic cell function in patients with hepatitis B

CHEN Xiao-chun1Δ, HUANG Chang-jing2

(1.Department of Infectious Diseases, Quzhou People’s Hospital of Zhejiang Province, Quzhou 324000, China; 2.Institute of Biological Engineering, Hubei University of Technology, Wuhan 430070, China)

ObjectiveTo analysis the effect of lamivudine combined with adefovir on changes of immune response and plasmacytoid dendritic cell function in patients with hepatitis B.Methods48 patients who were diagnosed with chronic hepatitis B were randomly divided into experimental group and control group,24 cases in each group.On the basis of conventional treatment, patients in the control group

lamivudine therapy, patients in the experimental group were treated with adefovir on the basis of the control group, after the treatment, the serum levels of AST,ALT,IFN-α and peripheral blood CD4+, CD8+T cells, CD4+/CD8+and pDCs levels were detected in all patients.ResultsAfter treatment, compared with control group,the peripheral blood level of CD4+T cells and CD4+/CD8+were higher in the experimental group,and the difference was statistically significant (P<0.05);the serum level of IFN-α and peripheral blood level of pDCs were higher in the experimental group (P<0.05);the serum levels of AST and ALT were lower in the experimental group (P<0.05).ConclusionThe lamivudine combined with adefovir can significantly improve the immune response and the function of plasma cell like dendritic cells in patients with hepatitis B, improve liver function.

lamivudine; adefovir; hepatitis B; immune response; plasmacytoid dendritic cell function

浙江省中医药科技计划项目(2007CB199)

陈晓春，通信作者，女，主治医师，本科，研究方向：肝炎结核及感染性疾病，E-mail：zjchenxiaochun@163.com。

R978.1

A

1005-1678(2016)02-0125-03