胃癌组织中NrF-2和Ho-1的表达及临床意义

宋洋，胡燕萍，王锐

(杭州市肿瘤医院 外科，浙江 杭州 310000)

胃癌组织中NrF-2和Ho-1的表达及临床意义

宋洋Δ，胡燕萍，王锐

(杭州市肿瘤医院 外科，浙江 杭州 310000)

目的 研究胃癌组织中核因子E-2相关因子2(nuclear factor E-2 related factor，NrF-2)和血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1，Ho-1)的表达并探讨其临床意义。方法 选取从2016年2月～2016年6月，杭州市肿瘤医院病理科存档的人胃组织蜡块176例，其中胃癌78例，正常组织78例。分别采用免疫组织化学法检测2组人胃组织中NrF-2和Ho-1的表达情况并进行分析。结果 胃癌组NrF-2和Ho-1水平分别为(0.752±0.098)、(0.862±0.081)，均显著高于正常组的(0.381±0.068)、(0.412±0.083)；NrF-2、Ho-1阳性表达率在胃壁侵犯程度为T3+T4、伴有淋巴结转移、NTM分期为Ⅲ、Ⅳ期胃癌组织中显著增高，上述差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 NrF-2和Ho-1在胃癌的发生发展中具有重要作用，且NrF-2、Ho-1在胃癌组织中的阳性表达率与胃壁侵犯程度、有无淋巴结转移、NTM分期存在密切相关。提示了临床诊断中若联合检测NrF-2和Ho-1，有利于对胃癌的早期诊断以及预后。

胃癌组织；核因子E-2相关因子2；血红素氧合酶-1

胃癌是临床上最为常见的恶性肿瘤之一，有研究报道表明，胃癌发病率呈逐年上升趋势，且我国胃癌患者死亡率位居首位，严重危及人类生命健康安全[1]。由于胃癌在发病早期临床症状并不典型，从而导致了临床诊断的难度增加[2]，大部分患者一旦确诊已进入中晚期，就丧失了最佳的手术治疗时机[3]。因此，通过提高临床上对胃癌患者的早期诊断率对提高胃癌患者临床治疗效果及生活质量具有极其重要的意义。鉴于此，本文通过研究胃癌组织中NrF-2和Ho-1的表达并探讨其临床意义,旨在为临床对胃癌进行早期有效的诊断寻找新的指标，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取从2016年2月～2016年6月，杭州市肿瘤医院病理科存档的人胃组织蜡块176例，其中胃癌78例，正常组织78例。

1.2 方法 采用免疫组织化学法对2组NrF-2和Ho-1表达情况进行检测：首先行常规切片，并将其表在免疫组化玻片上，放置在67 ℃的恒温箱中保存一夜，第2天进行脱蜡水化处理，并进行抗原修复。随后将切片置入80%甲醇溶液中持续孵育10 min左右，待到其内源性过氧化物酶完全灭活后使用PBS溶液(浓度为0.1M，pH 7.2～7.4)进行冲洗，所有切片均滴加适量稀释(1:100)的兔抗人NrF-2和兔抗人Ho-1，置于4 ℃恒温箱中过夜。次日使用PBS溶液进行冲洗，3 min/次，共3次，滴加第二代生物素化二抗工作液，置于37 ℃湿漉盒内进行30 min的孵育，放置于显微镜下滴加配置好的显色液，待显色充分终止后使用自来水进行冲洗。待上述步骤完成后使用苏木素进行染色，并加入乙醇进行脱水，最后浸泡二甲苯透明，以PBS液替代一抗作阴性对照组，在显微镜(OLYMPUS BX51 日本)下进行观察、记录。

2 结果

2.1 胃癌组织中NrF-2和Ho-1的表达 胃癌组织中NrF-2和Ho-1表达的免疫组化结果见图1。胃癌组NrF-2和Ho-1水平均显著高于正常组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。见表1。

图1 正常胃组织与胃癌组织中NrF-2及Ho-1的表达(×200)Fig.1 Expressions of NrF-2 and Ho-1 protein in normal gastric tissue and gastric carcinoma(×200)

组别例数NrF⁃2Ho⁃1正常组780 381±0 0680 412±0 083胃癌组780 752±0 098∗0 862±0 081∗

*P<0.05，与正常组比较，compared with normal group

2.2 NrF-2在胃癌组织中的阳性表达情况 NrF-2阳性表达率在胃壁侵犯程度为T3+T4、伴有淋巴结转移、NTM分期为Ⅲ、Ⅳ期胃癌组织中中显著增高，差异均有统计学意义(均P<0.05)。见表2。

表2 NrF-2在胃癌组织中的阳性表达情况[n(%)]

2.3 Ho-1在胃癌组织中的阳性表达情况 Ho-1阳性表达率在胃壁侵犯程度为T3+T4、伴有淋巴结转移、NTM分期为Ⅲ、Ⅳ期胃癌组织中中显著增高，差异均有统计学意义(均P<0.05)。见表3。

表3 Ho-1在胃癌组织中的阳性表达情况[n(%)]

3 讨论

胃癌是最为常见的消化道恶性肿瘤之一[4]，在所有癌症疾病中的病死率位居第二，其发生及发展主要涉及多种因素的共同作用、多种基因表达异常、多种因子相互影响的一个复杂过程[5]，这也就导致了临床上通过对单一因子的检测来对胃癌进行早期诊断有很大的局限性[6]。因此，寻找一种有效的检测手段不但可提供临床对早期胃癌的诊断率，也有利于对胃癌高危人群的筛选，进一步使得患者在疾病发展至中晚期前得到及时有效的诊治，最终提高患者生活质量及延长生命。NrF-2属于机体调节氧化应激平衡的一种重要转录因子，其主要在肝脏、消化道以及代谢性组织中表达[7]。而Ho-1主要作用机制是通过影响各种信号转到通路、抗凋亡、抑制炎性因子表达、抗氧化应激等一系列细胞分子，进而达到抗血管重构的作用[8]。通过对上述2种因子进行检测，或许可为临床对胃癌早期诊断及治疗寻找到新的指标靶点。

本文通过研究，结果发现胃癌组NrF-2和Ho-1水平均显著高于正常组。这提示了通过检测NrF-2和Ho-1，或许能对胃癌患者进行早期诊断及预后评估。同时也说明了NrF-2与Ho-1可能在胃癌的发生、发展中扮演着重要角色，临床治疗中若对NrF-2的表达进行有效抑制，或许可显著延缓或组织胃癌的发生、发展[9]。此外，NrF-2、Ho-1阳性表达率在胃壁侵犯程度为T3+T4、伴有淋巴结转移、NTM分期为Ⅲ、Ⅳ期胃癌组织中显著增高(均P<0.05)。这说明了NrF-2和Ho-1的表达与胃癌胃壁侵犯程度、淋巴结转移、TNM分期存在显著相关性，说明其可能是影响胃癌预后的因素之一。究其原因，笔者认为HO-1主要分布在人体多种组织细胞中，且大部分细胞在生理状态下均有少量表达，但胃肠道细胞除外。其中健康的胃肠道黏膜细胞中HO-1表达极少，只有当胃肠黏膜发生病变是，其才会被大量诱导产生，从而对受损的胃肠黏膜进行修复。而NrF-2属于和转录因子家族的成员之一，其主要作用是保护细胞，避免其遭受应激损伤。因此，在患者出现病变时，其表达也显著提高[10]。另有研究报道表明，Ho-1的表达可能与癌组织周围所发生的一系列炎性反应有关，其原因是由于癌旁组织产生的炎性细胞因子以及肿瘤病灶周围急剧的游离铁离子等对Ho-1表达具有一定的刺激作用[11-12]。Ho-1对肿瘤组织具有明显的保护作用，也为胃癌浸润转移提供了有利条件，临床治疗中可通过抑制其活性，提高对胃癌患者的治疗效果。

综上所述，对NrF-2和Ho-1进行联合检测，有利于临床检查中对胃癌高危人群进行筛查，且对胃癌早期诊断及预后评估具有重要意义。

[1] 季加孚，季鑫，步召德，等.从规范化到精准化：胃癌手术治疗的发展[J].中华外科杂志，2016，54(3)：164-168.

[2]吴东.努力发现早期胃癌，全科医师重任在肩[J].中华全科医师杂志，2016，15(4)：241-243.

[3]王宝华，王宁，冯雅靖，等.1990年与2013年中国人群胃癌疾病负担分析[J].中华流行病学杂志，2016，37(6)：763-767.

[4]贺慧鹏，文海泉.五种肿瘤标记物联合检测对胃癌的诊断价值[J].中国现代医生，2016，54(1)：109-111.

[5]Bao J,Ding R,Zou L,et al.Forsythiae Fructus Inhibits B16 Melanoma Growth Involving MAPKs/Nrf2/HO-1Mediated Anti-Oxidation and Anti-Inflammation[J].Am J Chin Med,2016,44(5):1043-1061.

[6]赵明，张建立，崔建，等.缺氧诱导因子-1α和血红素加氧酶-1在胃癌组织中的表达和临床意义[J].腹部外科，2014，27(1)：31-33.

[7]Lim HJ,Lee KS,Lee S,et al.15d-PGJ2 stimulates HO-1 expression through p38 MAP kinase and Nrf-2 pathway in rat vascular smooth muscle cells[J].Toxicol Appl Pharmacol,2007,223(1):20-27.

[8]Yin Y,Liu Q,Wang B,et al.Expression and function of heme oxygenase-1 in human gastric cancer[J].Exp Biol Med(Maywood),2012,237(4):362-371.

[9]舒文斌，毛盛勋，曹家庆，等.Nrf-2和Ras在胃癌中的表达及意义[J].广东医学，2016，37(4)：541-543.

[10]颜艺超，申占龙，姜可伟，等.次要组织相容性抗原13在胃癌中的表达及其与侵袭转移的关系[J].中华普通外科杂志，2015，30(9)：726-729.

[11]Motovali-Bashi M,Hamidy M.Association between GT-repeat polymorphism at heme oxygenase-1 gene promoter and gastric cancer and metastasis[J].Tumour Biol,2015,36(6):4757-4762.

[12]任乐豪，单可树，王金申，等.血红素氧化酶-1等细胞因子在腹腔镜辅助进展期胃癌根治术围手术期的表达[J].中华实验外科杂志，2016，33(1)：218-220.

(编校：王俨俨)

Expression and clinical significance of NrF-2 and Ho-1 in gastric carcinoma

SONG YangΔ, HU Yan-ping, WANG Rui

(Department of Surgery, HangzhouCancer Hospital in Zhejiang, Hangzhou 310000, China)

ObjectiveTo study nuclear factor E-2 related factor 2(NrF-2) and heme oxygenase -1(Ho-1) expression and to explore its clinical significance.MethodsFrom February 2016 to June 2016, 176 cases human gastric tissue paraffin blocks selected in department of pathology in Hangzhou Cancer Hospital, including 78 cases of gastric cancer, 78 cases of normal tissue were analyzed.And the expressions of NrF-2 and Ho-1 were detected by immunohistochemistry in two groups of human gastric tissue.ResultsThe levels of NrF-2 and Ho-1 in gastric cancer group were(0.752±0.098),(0.862±0.081) were significantly higher than those in normal group(0.381±0.068),(0.412±0.083); NrF-2, the positive expression rate of Ho-1 in gastric wall invasion degree of T3+T4 with lymph node metastasis, NTM stage III and IV gastric cancer tissues were significantly increased.The differences were statistically significant(P<0.05).ConclusionNrF-2 and Ho-1 play the important role in the development of gastric cancer and NrF-2, the positive expression rate of Ho-1 in the gastric carcinoma and gastric wall invasion, lymph node metastasis and NTM staging are closely related.The clinical diagnosis if the combined detection of NrF-2 and Ho-1, is conducive to the early diagnosis of gastric cancer and the prognosis of the disease.

gastric cancer tissue; nuclear factor E-2 related factor 2; heme synthase -1

10.3969/j.issn.1005-1678.2016.09.042

宋洋，通信作者，男，本科，主治医师，研究方向：甲状腺、乳腺及肝胆胃肠外科，E-mail：y137138@139.com。

R735.2

A