育肥猪群猪圆环病毒与大肠杆菌混合感染的诊断

刘　涛，王　瑞，曲哲会，何书海，钟长银（信阳农林学院，河南信阳464000；.河南省正阳县畜牧局，河南正阳463600）



育肥猪群猪圆环病毒与大肠杆菌混合感染的诊断

刘涛1，王瑞1，曲哲会1，何书海1，钟长银2
（信阳农林学院，河南信阳464000；2.河南省正阳县畜牧局，河南正阳463600）

猪圆环病毒是动物病毒中最小的一员，研究发现PCV-2型对猪具有致病性，主要感染6～12周龄猪，可引起猪的先天性颤抖和猪断奶后多系统衰弱综合征等病型。而大肠杆菌在临床上主要是一种条件性致病菌，在遇到特殊情况，会产生多种毒素造成机体多种病变特征，其中以仔猪黄痢、仔猪白痢和仔猪水肿病最为常见，在育肥猪阶段发病较为少见。临床上引起育肥猪群腹泻的常见传染性因素主要是猪增生性回肠炎、温和性猪瘟。而由圆环病毒与大肠杆菌混合感染引起的育肥猪只腹泻病例较为少见，近期通过临床及实验室工作，笔者确诊一例规模化猪场育肥猪圆环病毒与大肠杆菌混合感染病例，现将该案例的诊治分析报告如下。

1　发病情况及临床症状

驻马店市正阳县一母猪存栏450头猪场，110～115日龄阶段的育肥猪从2014年10月中旬陆续开始出现顽固性腹泻，拉黄色稀粪，继而消瘦，衰竭而死，病程一般持续20 d左右。发病率在5%，死亡率在70%。该场在发病期间使用过氟苯尼考、替米考星、杨树花口服液，但治愈率很低。

2　病理变化

2.1大体病变尸体严重营养不良，明显消瘦，贫血，全身皮肤苍白，切开皮肤见皮下较干燥，从血管断端流出少量稀薄而凝固不全的血液。肺脏多膨胀不全、质地变实，肠系膜淋巴结肿大出血，结肠袢淡黄色胶胨样水肿（见中插彩版图1）。肝脏淤血、肿大，呈暗红色，胆汁瘀滞，胆囊萎缩（见中插彩版图2）。心脏暗红，外膜血管呈树枝状充血，心室扩张，尤以右心室明显，心尖变钝、质地较软。脾脏轻度肿大，因增生而质地坚实，切面干燥、平滑。胃内容物少，并因胃内有胆汁逆流而呈黄色。黏膜肿胀，有点状出血，黏膜面上覆有较多黏液，呈卡他性炎症变化，在胃的无腺部与有腺部的交界处可见有小溃疡。肠黏膜有点状出血，肠壁淋巴小结肿大。

2.2组织病变淋巴结被膜和实质中的血管充血，淋巴窦扩张，其内充满单核细胞和其他炎性细胞，并见大量含铁黄红素沉积。在单核细胞、淋巴细胞中可检出嗜碱性胞浆和核内包涵体。肾小管上皮发生严重的颗粒变性，部分脱落，肾间质中有大量结缔组织增生，伴有大量单核细胞和淋巴细胞浸润。肝窦内有较多的血液，肝细胞发生轻度的脂肪变性，小叶结缔组织增生。脾窦内有大量单核细胞浸润，脾白髓萎缩，网状细胞增生。

3　实验室检验

3.1主要试剂引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。动物总RNA快速提取试剂盒，购自上海捷瑞生物工程有限公司；基因组RNA反转录试剂盒，购自Thermo公司；2ⅹPower PCR Master Mix，购自北京百泰克生物技术公司；DNA Marker，购自宝生物工程（大连）有限公司。

3.2引物设计与合成根据GenBank已发表的序列，应用PrimerPremier5. 0软件设计猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒引物。上游引物：5′-CCTGCACCGCGTAGAACTG-3′，下游引物：5′-GCGAAACGCCTGGTAAGC-3′。引物扩增特异性目的片段，出现540 bp大小条带判断为PRRSV经典株阳性，出现450 bp大小条带判断为PRRSV缺失株阳性。上游引物5′-CTCCCTGGGT⁃GGTCTAAG-3′，下游引物：5′-GGTTCCTCCACTCCCATTG-3′。出现290 bp大小条带判断为CSFV阳性。上游引物：5′-ATGGGCATCGGCGACTACCT-3′；下游引物：5′-GCGAGAAGAGCTGCGAGTGGA-3′。引物扩增特异性目的片段，出现270 bp大小条带判断为PRV阳性。上游引物：5′-GTTATGGTATG⁃GCGGGAGG-3′；下游引物：5′-CCGCTCTGTGCCCTTTGA-3′。引物扩增特异性目的片段，出现189 bp大小条带判断为PCV阳性。

3.3细菌分离无菌采集病猪的脾、肝、淋巴结、肺脏及结肠胶胨样渗出物若干份。无菌操作，分别接种于麦康凯培养基、高盐琼脂培养基上，37.5℃，培养24 h。麦康凯培养基上长出粉红色菌落，高盐培养基上不生长。涂片、革兰染色、镜检，可见到革兰阴性短杆菌。

3.4生化试验革兰阴性分离菌发酵乳糖、阿拉伯糖、甘露醇、半乳糖、甘露糖，产酸产气，发酵木糖，不发酵山梨醇，水解水杨苷。综合其培养特性鉴定为大肠杆菌。

3.5药敏试验用下列药物进行药敏试验，包括恩诺沙星、氧氟沙星、环丙沙星、诺氟沙星、大观霉素、新霉素、链霉素、氨苄青霉素、舒巴坦钠、丁胺卡那霉素、庆大霉素、强力霉素、林可霉素、阿莫西林、头孢拉啶、菌必治。药敏结果显示菌必治、舒巴坦钠及恩诺沙星高敏。

图3　PCR扩增产物的电泳M：DNA分子质量标准；1：PRV PCR产物；2：PCV2 PCR产物；3：CSFV-PRRSV PCR产物

3.6猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒检测结果。

4　讨论

结合临床、病理变化及实验室病原检测工作，显示该猪场发病猪只感染有圆环病毒及大肠杆菌。

圆环病毒在自然界广泛存在（Allan和Ellis，2000），据欧美一些国家报道，在一些圆环病毒控制较差的猪场，保育猪和生长猪肠炎的发病率明显增加，究其原因同饲料中添加抗生素的限制和圆环病毒2型所造成的免疫抑制有关，从而导致肠道病原菌的增殖和危害。常见的病原菌有细胞内劳森菌、密螺旋体、沙门菌等。而此次从发病场分离出来的则是大肠杆菌。

大肠杆菌性腹泻与病菌、环境条件和宿主因素的相互作用有关。一般认为产志贺毒素大肠杆菌或产vero毒素大肠杆菌可诱发病灶水肿。

本例中病猪胆囊萎缩或胆汁瘀滞，表明胆汁分泌严重不足及胆道被阻塞。胆汁对脂肪的消化和吸收具有重要作用。当胆道被阻塞，胆汁不能进入十二指肠时，脂肪的消化和吸收就会发生障碍，可引起脂肪痢。胆盐能抑制结肠对钠和水的吸收，如果小肠吸收胆盐发生障碍，大量胆盐进入结肠，常引起水泻。

因此该场对本病的控制应从对因和对症两方面入手：（1）对因控制：据了解，该场并未使用圆环疫苗进行免疫接种。从检测情况看，建议该场今后将圆环疫苗引入免疫程序中，针对圆环病毒的感染，建议在80日龄开始使用七清败毒颗粒连续用药10～15 d。结合该场运行时间已超过10年，猪舍老化较为严重，建议加强生物安全和饲养管理措施。猪舍应当保持一定程度的清洁卫生，饲养密度适中，严禁与早已断奶的育肥猪混群饲养，同时严格把握好原料关，减少或杜绝霉变原料进场。注意对猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、伪狂犬病、气喘病的疫苗接种，提高群体的免疫水平，减少圆环病毒的发病风险。另可根据药敏结果，使用阿莫西林含舒巴坦钠及恩诺沙星联合用药；（2）对症：选用龙胆泻肝散来疏肝利胆，喂以麸皮粥，或喂给适量的盐类泻剂，如芒硝、硫酸镁等，帮助病猪进行胃肠调理。后期喂以微生态制剂，调节肠道菌群，促进康复。

参考文献：

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中图分类号：S858.28

文献标志码：B

文章编号：0529-6005（2016）05-0050-02

收稿日期：2015-01-09

基金项目：信阳市科技攻关项目（130017）

作者简介：刘涛（1979-）男，副教授，硕士，研究方向为规模化猪场疫病控制技术，E-mail：decai178@163.com