银耳多糖对反复脑缺血再灌注小鼠学习记忆的影响*

马素好, 赵建华

(1.新乡医学院，河南 新乡 453003；2.河南省人民医院，郑州 450003)

基础医学

银耳多糖对反复脑缺血再灌注小鼠学习记忆的影响*

马素好1, 赵建华2△

(1.新乡医学院，河南 新乡 453003；2.河南省人民医院，郑州 450003)

[摘要]目的探讨银耳多糖对反复脑缺血再灌注小鼠学习记忆的影响。方法小鼠随机分为大、中、小剂量银耳多糖组，空白组，模型组和尼莫地平组6组，采用针灸针阻断双侧颈总动脉,建立脑缺血学习记忆障碍小鼠模型。尼莫地平组和银耳多糖组分别灌服尼莫地平片混悬液及大、中、小剂量银耳多糖，空白组和模型组给予同体积生理盐水，每日1次，连续给药10 d，术后48 h用避暗法对其进行行为学检测。观察并记录小鼠首次进入暗室的潜伏期及5 min内进入暗室遭电击的次数，并对乳酸(LD)、乳酸脱氢酶(LDH)进行检测。结果与模型组相比，尼莫地平组和银耳多糖大剂量组可以显著增加小鼠的潜伏期(P<0.01)、显著降低小鼠错误反应发生的次数(P<0.01)。尼莫地平组、银耳多糖中、小剂量组均可显著减少小鼠LD的含量(P<0.01)，尼莫地平组、银耳多糖大、中剂量组均可以显著升高小鼠LDH的活力(P<0.01)。结论银耳多糖对反复脑缺血再灌注小鼠学习记忆具有一定的改善作用。

[关键词]银耳多糖；反复脑缺血再灌；学习记忆

目前，脑血管疾病的发病率逐年提高。由于脑缺血而引发的智力障碍，严重影响了人们的工作学习，给社会和家庭造成了沉重的负担。对于脑血管疾病的治疗，目前西医仅以对症治疗为主[1]，但大多数药物不良反应较多。近年来，有人对银耳多糖的药理活性进行了研究[2]，发现其具有抗脑缺血作用。基于此，笔者以反复脑缺血再灌注致记忆障碍模型小鼠为模型，探讨了银耳多糖对小鼠学习记忆的影响，以期为临床应用提供实验数据。

以节水型社会建设统揽全局，拓展分区治水新思路，以人与自然和谐相处为出发点，以水资源的合理利用为中心，统筹城乡水利、流域水利、区域水利，坚持 “山上的问题山下解决，面上的问题点线解决，山内的问题山外解决”的思路，以骨干工程为支撑，分散集水为保障，遵循“因地制宜，宜蓄则蓄，宜引则引，宜提则提，‘三水’齐用，多法并举”的原则，兴建一批供蓄水工程，充分利用雨洪资源，基本解决山区群众的饮水问题，为区域经济发展和新农村建设提供水资源支持。

1材料与方法

1.1实验动物60只小鼠，昆明种，雌雄各半，体质量19～22 g，购自山东鲁抗医药股份有限公司实验动物室，生产许可证号：SCXK(鲁)20130001。

图3显示了工况二时，幅流风机作用下的满载地铁车厢截面半个周期的风速分布云图。由图3可以清楚地看出，幅流风机在由7 s向左下方吹风转换到23 s向右下方吹风的整个变化过程中时，最大风速出现在幅流风机出风口处，约为2.8 m/s，当靠近人体区域时，风速已经减弱到2 m/s以下，截面平均风速约为0.50 m/s，符合人体舒适性要求。

数量边际 （Qjm）是指在相同出口产品种类中，中国与世界对m国出口的产品数量比值的加权值，Qjm越大，说明中国对m国出口的机械运输设备产品的数量越多。价格边际 （Pjm）是指在相同出口产品种类中，中国与世界对m国产品出口价格比值的加权值，Pjm越大，说明中国对m国出口机械运输设备产品相比于世界的平均出口价格越高。

2.2银耳多糖对小鼠脑组织中LD、LDH的影响与空白组相比，模型组小鼠LD的含量明显提高(P<0.01)、小鼠LDH的活力明显降低(P<0.01)，说明本实验造模成功。与模型组相比，尼莫地平组、银耳多糖中、小剂量组小鼠LD的含量显著减少(P<0.01)，尼莫地平组、银耳多糖大、中剂量组均小鼠LDH的活力(P<0.01)显著升高。见表2。

2.1银耳多糖对小鼠行为学的影响与空白组相比，模型组可显著降低小鼠的潜伏期(P<0.01)、显著升高小鼠的错误反应次数(P<0.01)，说明该实验造模成功。与模型组相比，尼莫地平组可以显著增加小鼠的潜伏期(P<0.01)、显著降低小鼠错误反应发生的次数(P<0.01)，银耳多糖大剂量组可以明显增加小鼠潜伏期(P<0.05)，能显著降低小鼠错误反应发生的次数(P<0.01)。见表1。

2结果

1.3实验方法60只小鼠随机分成6组(雌、雄分笼饲养)，分别为：空白组、模型组、尼莫地平组、银耳多糖大、中、小剂量组，每组10只。除空白组和模型组外，尼莫地平组小鼠灌服尼莫地平混悬液(0.02 g·kg-1，0.2 mL·10 g-1)，银耳多糖各组分别灌服银耳多糖大、中、小剂量(0.4 g·kg-1、0.2 g·kg-1、0.1 g·kg-1，0.2 mL·10 g-1)。空白组和模型组给予同体积生理盐水，每日1次，连续给药10 d，除空白组外各组动物用10%的水合氯醛进行麻醉，将上述小鼠仰位固定在鼠板上，行颈部切口，分离双侧颈总动脉，穿线备用。然后用针灸针阻断双侧颈总动脉，10 min后松开针灸针，使血液再灌注10 min，反复进行2次。手术之后的创口以碘附消毒，最后缝合伤口。术后24 h，上述各组小鼠均进行行为学测定(避暗法)[3]，将小鼠头部背向洞口放入明室，然后通以36 V的电压，同时启动计时器，小鼠一进入立即受到电击，而计时器则同时停止计时。取出小鼠，记录每鼠从放入明室至进入暗室遇到电击所需的时间，此即潜伏期。24 h后重新测验，记录潜伏期和5 min内的电击次数。将完成行为学测定的小鼠断头取脑，其中一半称重，加9倍的生理盐水制成10%的脑匀浆，以备测乳酸(LD)、乳酸脱氢酶(LDH)，上述测定方法均按各自的试剂盒说明书进行。

注：与模型组相比，1)P<0.05，2)P<0.01。

1.2药品、仪器与试剂银耳多糖(西安天园生物制剂厂生产，批号20130726)。尼莫地平片(西安博爱制药有限公司，批号：E1506006)，规格30 mg/片。小鼠条件反射箱，淮北正华生物仪器设备有限公司。LDH测试盒, 购自上海恒远生物科技有限公司；乳酸(LD)测试盒, 购自上海恒远生物科技有限公司。

表2　银耳多糖对小鼠脑组织中LD、LDH的影响

注：与模型组相比，1)P<0.05，2)P<0.01。

3讨论

随着我国人口老龄化的进一步加剧，脑血管疾病已经成为危害人类健康的主要疾病之一[4]。目前，对于缺血性脑血管病研究的最大困难是缺少与临床接近的动物模型。现有应用较广泛的、常用的脑缺血动物模型主要有血管闭塞法以及局限性大脑中动脉缺血等模型[5]，但是上述模型有自身的缺陷和不足，造模时间长，较为复杂，手术难度高，创伤性大。本实验采用的造模方法有自身的优势，简单、可操作，采用在解剖学上与人比较接近的小鼠作为研究对象，在动物的死亡率上得到了控制，并且实验结果稳定、可靠，为临床治疗提供较可靠的依据。

有研究认为[6]，如果脑内血流被阻断，5 s内脑神经元的代谢就会受到影响，1～2 min脑部电活动就会停止，6 min开始脑的能量代谢以及电解质平衡将会被打破，致使脑内ATP被大量的耗竭，细胞膜的离子泵功能出现障碍，K+外流、Na+、Cl-和水大量进入细胞内，如果这种现象持续6～15 min，脑神经元就会发生不可逆的损害。有专家[7]在采用双侧颈总动脉结扎致脑缺血模型的研究中发现，大脑的严重缺血会导致乳酸升高，乳酸脱氢酶活力降低，严重损伤脑的功能。银耳多糖是银耳中的一种有效成分，有滋阴清热、润肺止咳、养胃生津、益气和血、补肾强心、健脑提神、消除疲劳等功效。近年来，张泽生等[8]研究发现，银耳多糖具有抗脑缺血作用。本结果显示，与模型组相比，尼莫地平组可以显著增加小鼠的潜伏期、降低小鼠错误反应发生的次数，银耳多糖大剂量组可明显增加小鼠潜伏期，显著降低小鼠错误反应发生的次数。尼莫地平组、银耳多糖中、小剂量组均可显著减少小鼠LD的含量，尼莫地平组、银耳多糖大、中剂量组均可以显著升高小鼠LDH的活力。

综上，银耳多糖能减少LD的含量，提高LDH的活力，明显改善小鼠的学习记忆，但其作用机制有待进一步深入研究。

参考文献：

[1]刘瑾,刘永伟,李岩,等.桑椹补脑膏对东食蓉碱所致记忆获得障碍小鼠学习记忆能力影响[J].辽宁中医药大学学报,2015,17(1):22-24.

[2]李小黎,叶翠飞,张丽,等.山茱萸环烯醚萜苷对脑缺血沙土鼠学习记忆能力和脑内神经营养因子的影响[J].中华中医药学刊,2012,29(2 ):263-264.

[3]贾学敏,韦登明.电针改善卒中后脑学习记忆能力的研究进展[J].中华中医药学刊.2012,29(5): 1082-1083.

[4]李焰,刘风丽,王培培,等.姜黄素对局灶缺血再灌注损伤小鼠学习记忆功能caspase-8的影响[J].河北医药,2015,37(1):12-13.

[5]吴建明,马娜,张鸿程,等.舒肝解郁胶囊对老年痴呆小鼠学习记忆能力的改善作用[J].中国实验方剂学杂志,2015,21(1):126-127.

[6]王万铭,王金芳.仙人掌多糖对慢性脑低灌注小鼠学习记忆损伤的改善作用.神经损伤与功能重建,2015,10(1):68-69.

[7]肖鹏,冲梅莉,王召军,等.帕瑞昔布对大鼠全脑缺血再灌注损伤中学习和记忆能力的保护作用.实用医学杂志,2014,30(24):3922-3923.

[8]张泽生,孙东,徐梦莹,等.银耳多糖抗氧化作用的研究.食品研究与开发,2014,35(18):10-12.

[责任编校：李宜培]

Influence on the learning and Memory of Tremella Polysaccharides on Repeated Cerebral Ischemia and Reperfusion in Mice

MA Su-hao1，ZHAO Jian-hun2#

(1.XinxiangMedicalCollege,XinxiangHenan453003,China;2.HenanProvincialPeople'sHospital,ZhengzhouHenan450003,China)

[Abstract]ObjectiveTo investigate the influence on the learning and memory of tremella polysaccharides on repeated cerebral ischemia and reperfusion in mice. MethodThe mice were randomly divided into 6 groups,and the model of brain ischemia learning and memory impairment model was established.The mice were treated with the service of nimodipine tablets suspension liquid and large, medium and small doses of tremella polysaccharide, the blank group and model group were given the same volume of physiological saline, once a day, continuous administration for 10 days, postoperative 24h with dark avoidance test on the behavior detection. The mice were observed and recorded first entered the 5 min and the latency of the darkroom enter number of the darkroom of lightning stroke, and of LD and LDH were detected. ResultsCompared with the model group, nimodipine group could significantly increase the mouse latency and could significantly reduce mouse error reaction times (P<0.01) ,and tremella polysaccharide high dose group could significantly increase the latency of mice and significantly reduced mice with low error reaction times (P<0.05). Compared with the model group,nimodipine group,tremella polysaccharide,small dose group could significantly reduce the content of LD in mice (P<0.01), nimodipine group,tremella polysaccharide high,medium dose group could significantly increase the activity of LDH in mice(P<0.01). ConclusionTremella polysaccharide has certain improving effect on the learning and memory on repeated cerebral ischemia and reperfusion in mice.

[Key words]Tremella Polysaccharide; repeated cerebral ischemia and reperfusion;learning and memory

收稿日期：2015-06-22

作者简介：马素好(1969-)，女，河南省平顶山人，学士，讲师，从事心脑血管内科临床工作。 △通讯作者：赵建华，Email:sink2011@163.com。

*基金项目：郑州市科技创新团队(编号：121PCXTD520)。

[中图分类号]R 285.5

[文献标识码]A

[文章编号]1008-9276(2016)02-0065-03