桑尺蠖微粒子病对家蚕的交叉传染性调查

蓝必忠，黄红燕，黄景滩，汤庆坤，贾雪峰，黄胜，李安华，陈枝，黄旭华

（广西壮族自治区蚕业技术推广总站，南宁市 530007）

桑尺蠖微粒子病对家蚕的交叉传染性调查

蓝必忠，黄红燕，黄景滩，汤庆坤，贾雪峰，黄胜，李安华，陈枝，黄旭华

（广西壮族自治区蚕业技术推广总站，南宁市 530007）

桑尺蠖是桑园常见的害虫，也是传播病原的主要昆虫之一。在广西蚕区调查了桑尺蠖微粒子病对家蚕的交叉传染性。调查结果发现桑尺蠖幼虫微粒子病自然感染率为0.54%；从桑尺蠖体内分离获得4株微孢子虫，编号分别为PaBM3、PaBM4、PaBM5和PaBM6，光学显微镜下观察PaBM3、PaBM5和PaBM6均为长卵圆形，与家蚕微孢子虫（Nb）存在明显差异；PaBM4为卵圆形，与Nb相似。通过生物试验测定，发现PaBM4微孢子虫对蚁蚕的半数感染浓度（IC50）为2.49×105个/mL，是Nb的4.64倍，说明其对家蚕也具有较强的食下感染力，而其对家蚕没有胚种传染性；PaBM3、PaBM5和PaBM6三种微孢子虫对家蚕均无感染力。因此，桑尺蠖微粒子病发生情况复杂，潜在对家蚕有交叉传染的风险，蚕种生产需要采取措施防控桑尺蠖的危害。

桑尺蠖；家蚕；微粒子病；交叉传染性

微孢子虫是一种嗜昆虫的病原微生物，据记载几乎所有昆虫物种都有被微孢子虫感染的情况，部分昆虫还受到1种以上微孢子虫感染[1]。根据众多研究调查发现微孢子虫在昆虫间还具有交叉传染现象，而野外昆虫微孢子虫对家蚕交叉传染就是引发家蚕微粒子病的重要方式[2]，很多研究者为预防这种交叉传染性的发生，对很多科昆虫微孢子虫进行了深入调查。桑尺蠖是一种常见的桑园害虫，其携带的微孢子虫也可能存在对家蚕交叉传染性，梅玲玲等[3]在浙江蚕区的桑尺蠖体内收集得到1株微孢子虫，发现该微孢子虫对家蚕无致病性，以孢子浓度为6×108个/mL给家蚕添食，蚕体发育依然正常，未检测出微孢子虫。沈中元等[4]也从桑尺蠖体内分离得到一株微孢子虫，调查发现该微孢子虫不但能感染寄生家蚕，导致蚕儿发病，且能引起家蚕胚种传染，而且在蚕体内继代后，对家蚕胚种传染率有增加的趋势，对蚕种生产造成严重影响；黄旭华等[5-7]在广西蚕区初步调查了桑尺蠖对家蚕的交叉传染性，发现桑尺蠖微粒子病自然感染率为3.74%，还从桑尺蠖体内分离得到2株微孢子虫（PaBMⅠ和PaBMⅡ），调查发现PaBMⅠ和PaBMⅡ微孢子虫对家蚕均具有一定的食下传染力，但均没有胚种传染性。

为了更加充分了解广西蚕区桑尺蠖微粒子病对家蚕的交叉传染性，本文选择在家蚕母种、原种生产应用的桑园内调查桑尺蠖微粒子病自然感染率，以及桑尺蠖微孢子虫对家蚕的致病性，以期为控制野外昆虫微粒子病对家蚕交叉传染提供依据。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 供试微孢子虫的来源和纯化 从广西蚕业技术推广总站武鸣基地桑园、石埠桑园和站内桑园捕捉的桑尺蠖幼虫体内分离得到的4株微孢子虫，暂命名为PaBM3、PaBM4、PaBM5和PaBM6；家蚕微孢子虫（Nosema bombycis，简称Nb）由广西壮族自治区蚕业技术推广总站蚕病研究室提供。参照文献[3]的方法，对PaBM3、PaBM4、PaBM5、PaBM6和Nb孢子进行提取、纯化。

1.1.2 供试家蚕品种 932×芙蓉。

1.2 方法

1.2.2 桑尺蠖微粒子病发生率调查 2015年5月至7月到广西蚕业技术推广总站武鸣基地桑园、石埠桑园和站内桑园捕捉的桑尺蠖幼虫，并采取逐只研磨镜检方式进行检验，调查桑尺蠖微粒子病自然感染率。

1.2.2 4种微孢子虫孢子大小及形态观测 将纯化的PaBM3、PaBM4、PaBM5、PaBM6和Nb孢子液制成临时标本，置600倍相差显微镜（OLYMPUS BX51）下观察，分别用明美显微数码测量分析系统（V1.0）的测微尺测量各种孢子的长轴与短轴，每种孢子样品均测量30粒孢子。

1.2.3 4种微孢子虫对家蚕致病性

1.2.3.1 对家蚕的食下感染力测定 将 PaBM3、PaBM4、PaBM5、PaBM6和Nb微孢子虫孢子液梯度稀释成108～103个/mL系列稀释液，分别取各稀释浓度的孢子液0.1 mL，涂抹于面积为8 cm2的桑叶片，饲喂1区蚁蚕（30头），每种处理设3个重复。待蚁蚕吃净带毒桑叶后，改用经过含有效氯浓度为0.5%的漂白粉精溶液浸泡消毒10 min的无毒桑叶饲养至5龄起蚕，对试验区的每一头蚕逐一研磨镜检，调查感染率，以Nb感染组作为对照。用Reed-Muench法计算出半数感染浓度（IC50）[8]。

1.2.3.2 对家蚕的胚种传染调查 分别给2龄起蚕经口接种PaBM3、PaBM4、PaBM5、PaBM6微孢子虫孢子液（PaBM3、PaBM5和PaBM6浓度为1×108个/mL，PaBM4为1×107个/mL），常规条件下利用洁净桑叶饲育至上蔟，并保护至化蛹、化蛾，单蛾制种，单蛾手磨镜检，将感染孢子的母蛾所产的卵圈，进行卵面消毒、即时浸酸处理、催青，孵化蚁蚕，饲养至3龄起蚕，逐头镜检（包括死卵），计算孢子胚种传染率，每种微孢子虫调查5个卵圈。同时在5龄起蚕添食家蚕微孢子虫（Nb）孢子液（浓度为1×106个/mL）作为对照[9]。

2 结果与分析

2.1 桑尺蠖微粒子病发病率情况

调查广西桑园内桑尺蠖微粒子病发生情况。结果如表1，在不同地点的桑园内调查都发现桑尺蠖携带微孢子虫，且存在一定的野外自然感染率。

表1 桑园内桑尺蠖微粒子病自然发生率

2.2 4种微孢子虫的基本形状与大小

由表2和图1可知，PaBM3、PaBM5和PaBM6微孢子虫孢子呈长卵圆形，与Nb孢子的形状、大小有明显差异，3株微孢子虫间的大小也存在一定差异；PaBM4呈卵圆形，与Nb孢子的形状相似。各种微孢子虫孢子折光性强，在普通显微镜下观察呈淡绿色。

表2 各种微孢子虫的形态和大小

图1 PaBM3、PaBM4、PaBM5、PaBM6和Nb孢子的形态（×600）

2.3 4种桑尺蠖微孢子虫对家蚕的致病性

2.3.1 对家蚕的半数感染浓度（IC50） PaBM3、PaBM4、PaBM5、PaBM6和Nb对家蚕的食下感染力如表3，在4种桑尺蠖微孢子虫中，只有PaBM4对家蚕具有食下感染力，其IC50为2.49×105个/mL，而PaBM3、PaBM5、 PaBM6对家蚕没有感染力，即使添食高浓度（108个/mL）孢子液，3种孢子也未能感染家蚕；同一时间测定的Nb的IC50是5.36×104个/mL，PaBM4的IC50是Nb的4.64倍，说明PaBM4对家蚕也具有较强的食下感染力，只是稍微比Nb弱一些。

表3 各种微孢子虫对家蚕的食下传染力调查

2.3.2 对家蚕的胚种传染力 调查发现4种桑尺蠖微孢子虫感染家蚕后，在后代的蚕儿均未检出孢子，说明各种桑尺蠖微孢子虫对家蚕没有胚种传染力。而家蚕微孢子虫在卵壳、死卵、蚁蚕和3龄蚕均发现有孢子，检出率达到53.50%，对家蚕具有很强的胚种传染力。

3 讨论

桑尺蠖与家蚕一样是鳞翅目昆虫[4]，属于中等体型昆虫，繁殖能力极强，严重影响桑园桑叶产量及质量，特别是在蚕期，当桑园无法喷药，会造成短期暴发，如广西蚕业技术推广总站科技人员2008年5月底到武鸣原蚕基地调查时，发现桑尺蠖虫口密度尚小，但到7月中旬再次进行调查时就发现桑园中桑尺蠖为害大暴发[5]。如桑园内桑尺蠖发生微粒子病，通过虫体繁殖将快速扩散微孢子病原，对家蚕有交叉传染的风险。

本文试验结果发现在广西各地桑园内的桑尺蠖均具有一定的微粒子病自然感染率，在3个地方收集得到4株感染桑尺蠖的微孢子虫，从形态上比较，有3株微孢子虫（PaBM3、PaBM5和PaBM6）相似，均属于长卵圆形，但也稍微有一些差异，而且该3株微孢子虫对家蚕没有致病性；另外1株微孢子虫（PaBM4）形态与家蚕微孢子虫（Nb）相似，属于卵圆形，而且对家蚕具有较强的食下感染力，但没有胚胎传染性。根据初步分析认为PaBM3、PaBM5和PaBM6等3株微孢子虫，可能是桑尺蠖微孢子虫的原始种；而PaBM4微孢子虫很可能原来就是由家蚕微孢子虫感染给桑尺蠖的。PaBM3、PaBM5和PaBM6是否是同一株微孢子虫？PaBM4是否是一株家蚕微粒子孢子，有待对各类微孢子虫进行分子遗传学研究才能够得到确切结论。

综上所述，广西桑园桑尺蠖携带的微孢子虫分布复杂，存在对家蚕交叉传染的风险，在蚕种生产中应引起足够重视，并加强防范。

［1］蒲蛰龙.昆虫病理学[M].广州：广东科技出版社，1992，405 -464.

［2］郑祥明，杨琼，方定坚，等.广东省昆虫微孢子虫资源调查及交叉感染的研究[J].蚕业科学，2003，29（4）：380-383.

［3］梅玲玲，金伟.家蚕微孢子虫和桑尺蠖微孢子虫的研究[J].蚕业科学1989，15:135-138.

［4］沈中元，徐莉，刘挺，等.桑尺蠖和丝棉木金星尺蠖的微孢子虫对家蚕病原性和胚种传染性研究[J].蚕业科学，1996，22（1）：36-41.

［5］黄旭华，朱方容，刘吉平，等.广西桑尺蠖微孢子虫的初步研究[C].中国蚕学会桑树病虫害防治学术研讨会论文集，2008：165-170.

［6］黄旭华，潘志新，朱方容，等.广西野外昆虫微孢子虫对家蚕交叉感染情况调查[J].广西蚕业，2010，47（4）：15-20.

［7］黄旭华，潘志新，朱方容，等.不同来源的昆虫微孢子虫对家蚕的感染力与体外发芽率调查[J].蚕业科学，2011，37（1）：138-141.

［8］浙江大学.家蚕病理学[M].北京：中国农业出版社，2000：242-243.

［9］黄旭华，朱方容，刘吉平，等.广西菜粉蝶微孢子虫对家蚕的病原性研究[J].广西农业科学，2009，40（4）：415-419.

2016年全区蚕种生产形势分析暨产销交流会在南宁召开

2016年2月29日下午，广西蚕种业协会在南宁召开2016年全区蚕种生产形势分析暨产销交流会。自治区农业厅经作处吴孝文副处长、广西蚕业技术推广总站有关领导及全区24家蚕种生产会员单位代表共39人参加了会议。

广西蚕种业协会潘志新理事长在会上作2015年协会工作总结。会议肯定了协会及全区各蚕种生产单位相关蚕业工作者去年一年来的工作成绩，并结合2015年的生产发放情况和当前整个行业的生产形势，对2016年我区蚕种生产总体形势作出预测分析。潘志新理事长在会上指出，去年受全球经济下滑影响，蚕茧价格持续走低，蚕农积极性受到打击，茧丝绸行业面临着严峻考验，今年随着各级党委政府重视和国家一路一带经济政策的推行，再加上外围经济逐步复苏和我国经济继续保持持续、健康、稳定的增长，预计2016年干茧、生丝价格从历史高位回调震荡加固后会再次走高。蚕种生产单位应该树立信心，共同维护市场稳定，加强生产管理，保障全区蚕种生产安全和足量供应。

会议还就今年上半年全区蚕种生产计划、指导价格、质量保障，蚕种场设施设备更新和蚕种市场管理等事项进行了商讨，达成共识。

最后，会议对2016年全区蚕种质量评比获奖单位进行了颁奖。其中，有3家蚕种场获得一等奖，7家蚕种场获得二等奖，13家蚕种场获得三等奖。

（广西蚕业技术推广总站 苏林）

S884.21；

A；

1006-1657（2016）01-0012-4

2016-01-05；

2016-2-20

广西科学研究与技术开发计划项目（No.桂科重14121002-4-2）；国家自然科学基金项目（No.31560048）；广西农业重点科技计划项目（No.201508）。

信息］蓝必忠（1985—），男，本科，农艺师，从事栽桑养蚕与桑蚕良种繁育推广工作。E-mail:longbishan1@163.com

信息］黄旭华（1978—），男，硕士研究生，高级农艺师。E-mail:40304713@qq.com