松针对免疫雏鸡新城疫抗体效价的影响

彭丽君，于菊霞（西平县畜牧局，河南，西平　462100）



松针对免疫雏鸡新城疫抗体效价的影响

彭丽君，于菊霞
（西平县畜牧局，河南，西平462100）

摘要：通过对200只健康罗曼公鸡随机分组饲喂和煎剂饮水松针粉试验，测定鸡血清新城疫抗体水平，探讨松针对免疫雏鸡新城疫抗体效价的影响。结果表明：不同剂量不同饲喂方法的松针在一定时期可以协同疫苗增强特异性免疫。

关键词：松针；雏鸡；新城疫抗体效价

1　材料与方法

1.1试验动物

1日龄经马立克疫苗免疫后的罗曼公鸡共200只。

1.2主要药品试剂

手工采摘新鲜的油松松针，新支二联冻干苗和新支二联油苗，新城疫检测抗原，PBS液。

1.3试验动物的分组与处理

200只健康罗曼公鸡，随机分成4组，其中组Ⅰ、组Ⅱ、组Ⅲ为试验组，组Ⅳ为对照组。饲养至14日龄全部用新支二联冻干苗（0.2 ml/只）滴鼻点眼首免、28日龄每羽肌肉注射0.3 ml新支二联油苗进行二免。在首次免疫的同时，组Ⅰ、组Ⅱ分别按松针粉0.5 g/只、1.0 g/只的剂量混入饲料饲喂；组Ⅲ按照0.5 g/只的剂量做煎剂饮水饲喂；组Ⅳ正常饮水喂料作对照组。4个组全部采用统一的饲养管理标准，环境条件相同。

分别于首次免疫后的第7天（D7）、第14天（D14）、第21天（D21）、第28天（D28）和第35天（D35），每组随机抽取4羽，心脏采血0.2ml，分离血清，4℃冰箱静置30 min，析出血清备用。

1.4鸡血清新城疫抗体效价检测

用β一微量法测定鸡新城疫血凝抑制（HI）抗体效价。用Log2表示。

1.4.11%红细胞悬液制备

先用灭菌注射器吸取3.8%柠檬酸钠溶液(其量为所需血液量的1/5)，取一只健康鸡，心脏采血5 ml，存于离心试管中。加PBS液为抗凝血的2倍，以3 000转/分，离心3 min，弃去上清液，如此反复洗涤3次，最后取下层压积红细胞，用PBS液调节红细胞悬液浓度为1%。

1.4.24单位抗原的滴定

在96孔微量血凝板上，从左到右每孔各加25 μl PBS液，另加一排作为重复。再向每排的第1孔加入25 μl新城疫病毒，依次向后倍比稀释直至第11孔，第12孔作为对照，无抗原液；然后向每孔加入25 μl 1%鸡红细胞悬液，将微量血凝板在微量振荡器上震动混匀后置于37℃温箱中感作30～40 min，待对照孔红细胞已经沉淀时观察结果。

结果判定，孔内红细胞呈网状为凝集，呈圆点状沉于孔底为沉淀。以100%凝集的抗原最大稀释孔为该抗原血凝价，即一个凝集单位；从该孔向前移2孔的抗原稀释度作为4单位抗原的稀释度。

1.4.34单位抗原的标定

由于抗体的测定是每隔7天进行一次，为了防止试验过程中误差的产生，故每次试验时要对已配好的4单位抗原重新进行标定。标定过程如下：在96孔微量血凝板上，从左到右每孔各加25 μl PBS液，另加3排作为重复，并设第1孔和第6孔分别为阳性和阴性对照组。再向每排的第1孔加入配好的4单位抗原25 μl，从第2孔依次向后倍比稀释直至第5孔；然后向每孔加入25 μl 1%鸡红细胞悬液，将微量板在微量振荡器上震动混匀后置于37℃温箱中感作20 min。如果前3孔有的不是100%凝集，说明抗原浓度小了，再加些许抗原。若4、5孔还未完全沉淀，则抗原浓度高了，应加些许稀释液，再进行校正，过程同上。

1.4.4样品的检测

在96孔微量血凝板上，从左到右每孔各加25μl PBS液，再向每排的第1孔加入25 μl的待检血清，依次向后倍比稀释直至第11孔，第12孔作为对照。然后向每孔加入25 μl 4单位抗原，在微量振荡器上振荡混匀后置于温箱中感作20 min。取出后向每孔加入25 μl 1%鸡红细胞悬液，同时设阳性血清、阴性血清及空白对照孔。振荡混匀后置于37℃温箱中感作30 min，待对照孔红细胞已经沉淀时观察结果。

结果判定，以100%抑制凝集的血清最大稀释度为该血清的抗体滴度，每组以4只鸡血清抗体滴度的平均值表示该组的抗体水平。

1.5数据分析

数据以Means±SD（平均数±标准偏差）表示，用SPSS软件进行Duncan’s Multiple Range Test（即多组样本间差异显著性分析），从而对抗体变化的情况进行比较。

2　结果

经SPSS处理后的结果如下表所示:首次免疫后的第7天，组Ⅰ和组Ⅲ的抗体效价与对照组差异显著（P＜0.05），但试验组抗体效价略低于对照组；第14天、第21天和第35天，各组的抗体效价差异均不显著（P＞0.05）；仅在免疫后的第28天，试验组Ⅱ的抗体效价水平显著高于对照组Ⅳ（P＜0.05）。

表　各组血清ND-HI抗体效价的动态变化

3　讨论与分析

体液免疫是机体抗御传染病的主要因素之一，抗体效价的高低直接反应机体的体液免疫状态。微量血凝抑制法是一种简单方便的方法，因此该试验采用检测抗体效价作为评价免疫增强剂增强疫苗的免疫作用的指标。体液免疫是由B淋巴细胞介导通过分泌抗体而进行的免疫应答。新城疫抗体水平是反映新支二联冻干苗和油苗免疫后鸡特异性体液免疫功能的指标。

测定结果显示，在首次免疫后的第7天，组Ⅰ和组Ⅲ的抗体效价与对照组差异显著，且各组的抗体效价水平均比较低；第14天，各组的抗体效价差异虽不显著，但抗体水平开始有所上升，而且松针饮水组的抗体效价水平上升幅度较其他3组快。第21～35天，各组的抗体效价均达到高峰期，且在免疫后的第28天，试验组Ⅱ的抗体效价明显高于对照组。第28～35天，各组的抗体效价虽不显著，但组Ⅰ和组Ⅱ的抗体水平略高于对照组。

陈宝江、王建辉（2000）［1］发现，在雏鸡日粮中添加3%松针粉，结果表明，试验组较对照组：新城疫（ND）抗体效价水平平均增加了24.30%，差异极显著（P＜0.01），且试验组ND抗体峰值高，高峰（>5 Log2）维持时间为12 d，极显著高于对照组的3 d（P<0.01），表明松针粉能提高ND抗体水平，增强机体特异性免疫功能，有效抵制新城疫的发生，试验结论与该文中所得结论部分相似。两者出现相似点的原因可能是：由于松针粉中含有大量的VE［2］，VE作为免疫佐剂能增加体液免疫反应，可提高辅助T细胞数量，使机体由合成IgG为主转为合成IgM为主，还可减少血液皮质酮（免疫抑制剂）含量；而且松针粉中的VC［3］，可羟化分解家禽应激状态下产生的皮质酮，进而血清ND抗体水平较对照组有所提高。两者出现不同点的原因可能是：不同的雏鸡品种对松针的敏感性不同，进而使新城疫抗体效价的提高幅度和维持时间也不同；天气的多变，室内温度的高低，饲养方式的不同等对鸡都产生了一定的影响，进而对鸡的采食量也产生了影响；而且，该试验过程中雏鸡日粮分别添加了0.5 g/只和1.0 g/只的松针粉，对于中草药来说，不同的饲喂剂量对家禽的影响差异是很大的，进而导致了该试验的结果与研究结果的差异。综上可得：合适剂量的松针煮水和松针粉饲喂雏鸡均能增强雏鸡的特异性免疫应答反应，提高疫苗的免疫效力，松针煮水有可能更利于机体吸收，进而使抗体上升速度快。但由于实验室空间条件有限，试验群体较少，且松针煮水和松针粉的饲喂剂量只有0.5 g/只和1.0 g/只的添加水平，对其最佳饲喂剂量，有待进一步的研究。

参考文献：

［1］陈宝江，王建辉，李树友，等.松针粉对雏鸡生长及免疫力影响的研究［J］.科技简报，2000，（4）：28-30.

［2］张履忠.维生素E对畜禽免疫力的影响［J］.现代农业科技，2007，（20）.

［3］董晓玲.免疫应激对肉仔鸡血液指标及肉品质的影响［D］.中国农业科学院，2007.

信息博览

中图分类号：S859.79

文献标识码：B

文章编号：1004-5090（2016）01-0013-02

收稿日期：（2015-11-11）