Fascin-1蛋白在结直肠癌中的表达及其临床意义

孔凡良,胡丽霞,李成发,黄孟芹,蒋英俊,缪华纬,吴　燕,王凤云

(安徽省合肥市第二人民医院血液肿瘤科　230011)



Fascin-1蛋白在结直肠癌中的表达及其临床意义

孔凡良,胡丽霞,李成发,黄孟芹,蒋英俊,缪华纬,吴燕,王凤云

(安徽省合肥市第二人民医院血液肿瘤科230011)

[摘要]目的探讨Fascin-1蛋白在结直肠癌中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化MaxVision 两步法检测87例结直肠癌和28例癌旁正常组织中Fascin-1 蛋白的表达情况，分析Fascin-1蛋白表达与结直肠癌临床病理特征的关系。Kaplan-Meier和Cox回归模型分析Fascin-1蛋白表达与结直肠患者生存的相关性。结果Fascin-1 在结直肠癌组织和癌旁正常组织中的阳性表达率分别为43.7%(38/87)和7.1%(2/28)，二者差异有统计学意义(P<0.05)。Fascin-1 蛋白表达在不同年龄、TNM分期、淋巴结转移及远处转移间差异均有统计学意义(P<0.05)，但是在不同性别、病理类型、肿瘤位置、分化程度间差异无统计学意义(P>0.05)；Kaplan-Meier分析显示Fascin-1蛋白高表达组患者的总生存率明显低于低表达组(P=0.009)。多因素Cox回归分析表明Fascin-1蛋白高表达是影响结直肠癌患者预后的独立危险因素(相对危险度[HR]=2.087，95%CI：1.196～3.642，P=0.010)。结论Fascin-1蛋白在结直肠癌组织中呈高表达，其与患者的远期生存率相关。Fascin-1蛋白可能是影响结直肠癌患者预后的独立危险因素。

[关键词]Fascin-1；结直肠肿瘤；免疫组织化学；远期生存率

Fascin-1蛋白的主要功能是与肌动蛋白结合，其在人类诸多肿瘤中表达上调，包括结直肠癌[1]。但目前对于Fascin-1蛋白的表达与结直肠癌患者的远期生存率之间的确切关联鲜有研究。本研究采用免疫组化法检测结直肠癌组织和癌旁正常组织中Fascin-1的表达差异，并通过对患者的长期随访，对Fascin-1与患者的远期生存率之间的关联进行研究，进一步探讨Fascin-1蛋白在结直肠癌中的表达及其临床意义，以期对该病的治疗及预后判断提供科学依据。

1资料与方法

1.1一般资料选择2009年6月至2014年7月本院病理科诊断为结直肠癌的临床与病理资料齐全的石蜡组织标本87份，患者术前均未接受过任何抗肿瘤治疗。其中男46例，女41例；年龄36～77岁,中位年龄63岁。同时从距肿瘤至少3 cm处取相应癌旁组织28份，并经病理检查确认无癌细胞浸润，作为对照组。所有标本均用10%中性缓冲福尔马林溶液固定，经石蜡包埋，4 μm 连续切片采用免疫组化染色。

1.2主要试剂免疫组化试剂使用免疫组化浓缩型兔抗人Fascin-1单克隆抗体(cp-6848)购自德国Celplor公司，免疫组化检测试剂盒为即用型快捷免疫组化MaxVision 试剂盒和DAB 显色试剂盒均购自福州迈新公司。

1.3方法免疫组化染色方法参照使用说明书操作，采用MaxVision两步法进行免疫组化染色，简要步骤按如下操作：柠檬酸钠缓冲液高压抗原修复，切片中滴加Fascin-1一抗，4 ℃过夜，去除一抗后滴加二抗，然后试剂盒室温下孵育20 min，用DAB显色，苏木精对比染色。Fascin-1在间质的表达为自身切片的阳性对照，PBS液取代一抗作阴性对照。

1.4结果判断免疫组化以癌及癌旁细胞质中出现棕黄色或棕褐色颗粒为阳性染色。免疫组化评定方法参考文献标准[2-3]。按染色强度记分：无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；按染色程度记分：无阳性细胞数为0分，阳性细胞数1%～25%为1分，>25%～50% 为2分，>50%～75%为3分，>75%～100%为4分。两项相加得分(0～7分)，≥3分为高表达。

1.5随访截至最后随访时间2015年2月，全部患者中位随访时间为43.1个月(7～68个月)。患者总的生存时间定义为从手术之日起至末次随访或死亡之日。

1.6统计学处理采用SPSS16.0进行统计学分析。Fascin-1表达与各个临床病理因素的分析采用χ2检验，生存分析采用Kaplan-Meier方法和Log-rank检验。Fascin-1表达与预后的关系采用单因素和多因素Cox回归模型进行分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1Fascin-1蛋白在结直肠癌及癌旁组织中的表达和分布Fascin-1免疫组化染色在结直肠癌中主要定位于细胞质或细胞膜上，呈局灶性或弥漫性黄色颗粒状，在结直肠正常组织中仅少量表达于细胞。87份结直肠癌组织中，38份(43.7%)Fascin-1 蛋白高表达，见图1；28份癌旁组织中，2份(7.1%)Fascin-1 蛋白高表达，二者比较差异有统计学意义(χ2=12.465，P<0.05)。

A：癌旁正常组织；B：结直肠癌组织。

图1结直肠癌组织及癌旁正常组织中Fascin-1蛋白的表达(×100)

2.2Fascin-1蛋白的表达与结直肠癌患者临床特征的关系Fascin-1蛋白表达在不同年龄、TNM分期、淋巴结转移及远处转移间比较差异有统计学意义(P<0.05)；但是在不同性别、病理类型、肿瘤位置、分化程度间比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1　结直肠癌中Fascin-1蛋白表达与临床病理特征的关系

续表1　结直肠癌中Fascin-1蛋白表达与临床病理特征的关系

2.3Fascin-1蛋白的表达与患者预后的关系对87例获得随访结果的结直肠癌患者进行Kaplan-Meier生存分析，结果显示Fascin-1蛋白低表达组患者的总生存率明显高于高表达组，用Log-rank检验进行组间生存率检验结果显示χ2=6.833，P=0.009，即Fascin-1蛋白高表达与结直肠癌预后不良有关(图2)。经Cox比例风险回归模型分析，单因素分析显示，Fascin-1蛋白表达、远处转移与患者预后相关(P<0.05)，见表2。多因素Cox回归分析，Fascin-1蛋白高表达是影响结直肠癌患者预后的独立危险因素[相对危险度(HR)=2.087，95%CI：1.196～3.642,P=0.01]。

low：Fascin-1蛋白低表达；high：Fascin-1蛋白高表达。

图2结直肠癌中Fascin-1蛋白表达与患者生存状况的关系

表2　结直肠癌预后Cox模型分析

续表2　结直肠癌预后Cox模型分析

3讨论

结直肠癌是全球第三大最常见恶性肿瘤，其死亡率在西方国家中位居第二[4]。结直肠癌在我国大城市其发病率也逐年升高，已跃居癌症死亡率的第三位[5]。近十年来随着手术技术的改进，以及化疗方案的不断更新，对于结直肠癌的治疗虽取得了重要的进展，但由于多数结直肠癌患者在行根治性手术时已发生微转移，以及患者对化疗药物产生耐药等的出现，复发和转移的结直肠癌往往难以治疗，使得患者的总生存率并没有显著改善[6]。因此，寻找更有效的生物标志物预测结直肠癌患者预后仍是目前治疗的重点[7]。在这些标志物分子中，Fascin参与形成以肌动蛋白为基础的细胞组织结构，包括皮质细胞突起(如丝状伪足、树突和微绒毛等)和胞质微丝束[8]。肿瘤细胞侵袭表型的一个重要标志是丝状伪足这一感觉细胞器的丰富性表达。体内和体外实验同时表明丝状伪足的形成的关键因素之一是肌动蛋白纤维的有效聚合[9]。Fascin-1是目前惟一已知的定位在整个丝状伪足上的肌动蛋白结合蛋白，通过siRNA干扰其缺失后则导致丝状伪足的持续性减少[9]。此外一些研究表明Fascin-1能够显著增加细胞迁移[10-11]。因此，Fascin-1可能促进细胞迁移参与丝状伪足的形成。人类Fascin-1 基因在1994 年被克隆，其染色体位于7q22，该基因编码分子量为5.5×104ku 的细胞骨架蛋白，其主要作用就是与F-肌动蛋白结合。Fascin-1蛋白的第39位的丝氨酸是蛋白激酶C(PKC)的磷酸化位点，磷酸化后的该位点可调节Fascin-1蛋白与F-肌动蛋白的结合活性，抑制Fascin-1肌钙蛋白的组装功能并影响到细胞膜表面伪足和微棘的形成[12]。

既往的研究发现，Fascin-1蛋白在成人的上皮组织中低表达或不表达，在许多上皮来源的(如肺癌、卵巢癌、胃癌及食管癌等)肿瘤细胞系及肿瘤组织中表达明显上调[13]，并可能与肿瘤侵袭及转移有关。本研究中在28份正常结直肠黏膜标本中有2份(7.1%)Fascin-1 蛋白呈高表达，在87份结直肠癌标本共38份(43.7%)Fascin-1蛋白呈现高表达，二者比较差异有统计学意义(P<0.05)。本结果显示，结直肠癌患者肿瘤组织中的Fascin-1蛋白表达明显高于癌旁组织，提示组织中Fascin-1蛋白的高水平表达可能在结直肠癌的发生和发展过程中发挥着重要作用，这与文献[1]的研究一致。进一步分析Fascin-1蛋白的表达与结直肠癌患者临床特征的关系发现，Fascin-1蛋白表达在不同性别、TNM分期、淋巴结转移及远处转移间比较差异有统计学意义(P<0.05)，表明Fascin-1蛋白的表达与结直肠癌生长、TNM分期和远处转移具有相关性。

近年来发现，Fascin-1蛋白表达与一些非结直肠癌患者的预后不良和(或)低的生存率呈正相关[14-15]，这与本研究结果一致。本研究通过长期随访，进一步探讨了Fascin-1蛋白表达与结直肠癌患者的远期生存率之间的关联。随访资料的Kaplan-Meier分析、单因素Cox回归分析及多因素Cox回归分析显示Fascin-1蛋白表达与结直肠癌的预后有关，Fascin-1蛋白高表达提示患者预后差，因此Fasin-1蛋白表达可作为结直肠癌预后的指标之一。另外，单因素及多因素Cox分析显示远处转移与预后相关，说明远处转移状态是影响结直肠癌预后的重要因素，提示早期诊断、早期干预能够提高患者的生存率。

本研究证实Fascin-1蛋白在结直肠癌组织中呈高表达，与结直肠癌的远期生存率相关，其可能成为结直肠癌的预防及治疗提供新的靶点。

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The expression of Fascin-1 in colorectal cancer and its clinical significance

Kong Fanliang,Hu Lixia,Li Chengfa,Huang Mengqin,Jiang Yingjun,Miao Huawei,Wu Yan,Wang Fengyun

(Department of Hematology and Oncology,the Second People′s Hospital of Hefei,Hefei,Anhui 230011,China)

[Abstract]ObjectiveTo investigate the expression of Fascin-1 in colorectal cancer (CRC) and its clinical significance.MethodsImmunohistochemistry MaxVision method was adopted to detect the protein expression of Fascin-1 in 87 CRC tissues and 28 para-cancer tissues,and analyzed the expressions of them and the relations to clinicopathologic characteristics.Kaplan-Meier plots and Cox proportional hazards regression model were used to analyze the prognostic value of Fascin-1 expression.ResultsThe positive rates of Fascin-1 expression in CRC tissues and para-cancer tissues were 43.7%(38/87) and 7.1%(2/28) respectively,with significant difference (P<0.05).Fascin-1 expression was correlated with age,TNM staging,regional lymph node metastasis and distant metastasis,with significant difference (P<0.05),whereas it was not correlated with gender,tumor location,pathologic differentiation and pathology type,with no statistical difference(P>0.05).In the Kaplan-Meier analysis,patients with Fascin-1 over-expression had significantly shorter overall survival than those patients with negative Fascin-1 expression (P=0.009).Multivariable analysis by Cox regression model further showed that Fascin-1 over-expression was a significantly independent predictor of poorer overall survival (HR=2.087;95%CI:1.196-3.642,P=0.010).ConclusionThe expression of Fascin-1 is high and its related to the long-term survival time of patients with CRC.It is an independent prognostic factor for CRC.

[Key words]Fascin-1;colorectal neoplasms;immunohistochemistry;long-term survival time

doi:论著·临床研究10.3969/j.issn.1671-8348.2016.11.023

作者简介：孔凡良(1963-)，副主任医师，本科，主要从事血液肿瘤方向研究。

[中图分类号]R73-31

[文献标识码]A

[文章编号]1671-8348(2016)11-1519-03

(收稿日期：2015-10-26修回日期：2016-01-10)