黑虎泉及白石泉泉水中细菌总数的检测

迟双会　陈芳

【摘 要】黑虎泉属于“泉城”济南的“七十二名泉”之一，很多游客慕名品尝。随着环境污染的加剧，泉水还能饮用吗？本实验利用平板菌落计数法测定了黑虎泉泉水、白石泉泉水和黑虎泉直饮水中细菌总数，为泉水的饮用提供参考依据。结果显示，黑虎泉泉水和白石泉泉水细菌总数超过国家饮用水标准，不适合直接饮用。而黑虎泉直饮水的细菌总数符合国家饮用水标准，可以直接饮用。

【关键词】黑虎泉；白石泉；细菌总数

0 引言

黑虎泉是济南著名旅游景点，位于黑虎泉西路。明代晏壁在《七十二泉》诗云：“石水府色苍苍，深处浑如黑虎藏。半夜朔风吹石裂，一声清啸月无光。”诸泉参差错落不已，泉既汇成河，河复又蕴泉，争相辉映各得佳趣。泉群附近假山平台，回廊曲径，夏日绿树荫荫，鸟语蝉鸣，适宜品茗观景。附近还有玛瑙、白石、九女、琵琶、南珍珠、任泉、溪中、苗家、胤嗣、汇波、对波、金虎诸名泉及无名泉一处组成黑虎泉群。早在金代以前，黑虎泉已闻名于世。泉水出于深凹形洞穴，通过3个石雕虎头泉水喷出，波澜汹汹，水声喧喧。每年都会吸引大量游客来此游玩。

随着越来越多游客的到来，我们发现有很多人直接饮用黑虎泉的泉水。虽然泉水常年恒温18℃，看起来清澈透明，入口也甘甜。很多济南当地人去接泉水直接回家喝。2015年，济南市政府在黑虎泉设置了很多直饮水点，很多游客都会慕名品尝一下甘甜的泉水。未污染的泉水矿物质含量丰富，有机物含量少，但随着环境污染的加剧，泉水中可能含有大量来自土壤、尘埃、垃圾和污水的细菌，黑虎泉的水还能直接饮用吗？

如果泉水中细菌总数超标，可能会引起介水传染病[1]。根据我国饮用水标准，饮用水中细菌总数每ml不超过100个。我国现行的生活饮用水标准检验方法GB5750—85中规定，水样中细菌总数测定是1ml水样在普通营养琼脂培养基中37℃经24小时培养所生长的细菌菌落的总数。细菌总数是评价水质污染程度的主要卫生指标。所测定的细菌总数增多说明水被生活废弃物污染。

本文利用平板菌落计数法检测黑虎泉泉水中细菌总数，对黑虎泉泉水、白石泉泉水和黑虎泉的直饮水的细菌总数进行测定，为人们的饮水安全提供理论和实践依据。

1 实验方法

1.1 实验样品及药品

黑虎泉泉水、白石泉泉水、黑虎泉直饮水。营养琼脂

1.2实验仪器设备

高压灭菌锅、超净工作台、恒温培养箱、烧杯、玻璃棒、锥形瓶、电子秤、酒精灯、石棉网、量筒、滴管、打火机、酒精、带塞试管、吸量管

1.3 实验方法

1.3.1 实验方法

采用平板涂布培养计数法进行计数[2]。

1.3.2 取样

综合考虑市民饮用的泉水量相对多的位置、人群分布、地理环境等因素后， 按照市民取用泉水的习惯，从黑虎泉、白石泉和黑虎泉直饮水采集泉水样品共3个。按《生活饮用水标准检验方法、水样的采集和保存》进行水样的采集、保存和运送。

取样时必须注意尽量选择在人们经常喝水的地方。

黑虎泉的取样点选择黑虎泉最大的取水点，盛于无菌取样管内。取样时动作要轻，尽量避免底泥浮起影响水质。

黑虎泉附近的直饮水取样，水样不能太满，置于取样的无菌管内，做好标记。

黑虎泉群的白石泉取样，不要采取有杂质的水源。取完样后应立即进行记录，内容包括样品编号，采样地点。以免混淆。运输过程中注意防震，以免样品损坏而损坏样品取样的误差会影响结果。

1.3.3 梯度稀释

从10ml黑虎泉原液中取1ml，置于相应的含有9ml无菌蒸馏水试管中得到10-1浓度的稀释原液，再按上述方法依次做成10-2、10-3等一系列梯度稀释液。其他样本也按上述方法操作。

1.3.4 菌落计数

涂布培养后，计数每个平板上的菌落数。可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落总数后，求出同稀释度的各平板平均菌落数，计算原始样品中每ml的菌落数，进行报告。

2 实验结果及分析

采用黑虎泉泉水、白石泉泉水和黑虎泉直饮水三个水样的10-3稀释培养液。培养24h后取出，进行菌落计数。计数结果如下表1：

表1

通过上面的表格可以看出，黑虎泉泉水和白石泉泉水的细菌总数分别为113cfu/ml和123cfu/ml，对照生活用水国际GB5749-85中规定的菌落总数不超过100cfu/ml，不符合饮用水标准，不能直接饮用，但是可以经过消毒后饮用。黑虎泉直饮水的细菌总数为82cfu/ml，小于100cfu/ml，可以直接饮用。

本实验选用涂布法检验水中细菌总数。标准平板计数法的缺点是一些需氧菌在营养琼脂深层不易生长，以及一些对热敏感的细菌在用热琼脂倾注时受热冲击致死，造成菌数降低，因此选用涂布法检验水中细菌总数。

由于本实验是一个检测的实验，存在一个严格灭菌的过程。从采样，到最后的分析，整个过程不仅不能让其他杂菌污染，而且还得保证样品中本身细菌的总数基本不损失。

梯度稀释时分别将黑虎泉泉水、白石泉泉水和黑虎泉直饮水三个水样培养24h后稀释至10-3。根据饮用水标准，稀释至10-3已经足够，因为饮用水中细菌总数不超过100个/ml，也就是说稀释至10-3后菌落数会在100个以内。而我们菌落计数的标准是30-300个之间。若所有稀释度均不在计数区间。如均大于300，则取最高稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数报告。如均小于30，则以最低稀释度的平均菌落数乘稀释倍数报告。如菌落数有的大于300，有的又小于30，但均不在30-300之间，则应以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告。如所有稀释度均无菌落生长，则应按小于1乘以最低稀释倍数报告。

3 讨论

黑虎泉直饮水符合泉水我国生活用水饮用水的细菌总数标准，可以直接饮用。但黑虎泉泉水和白石泉泉水的细菌总数超标，不能直接饮用。但可以经煮沸法消毒后使用。本实验由于试验因此条件的局限性以及操作技术水平的局限，可能存在一些误差。但是对于泉水的饮用有一定的参考价值。

应用平板计数技术测定水中细菌总数时，由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖。因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。水中细菌总数测定是测定水中需氧菌、兼性厌氧菌和异养菌的总数。水中细菌总数可作为判定被检水样被有机物污染程度的标志，作为日常检测的七项指标（色度、浊度、细菌总数、大肠菌群、余氯、铁、锰）之一的细菌总数，能非常直观地反映水被细菌污染的程度[3]。细菌数量越多，则水中有机质含量越大。但关于水中其他指标的检测因为时间和实验条件的限制我们并没有进行，以后有时间我们会进行水中大肠菌群的数量的测定，水中大肠菌群数可用来判断水源是否被粪便污染，并可间接推测水源受肠道病原菌污染的可能。这也是我们评估黑虎泉泉水是否可以安全饮用的标准之一。

【参考文献】

[1]刘凤莲，吴惠忠，许秉忠，齐爱，李雪，卢世勇.宁夏城市饮用水微生物学指标与介水传染病的相关性[J].环境与健康杂志，2014，31（9）：827-828.

[2]管远志，王艾琳，李坚.医学微生物学实验技术[M].北京：化学工业出版社，2006：84-85.

[3]蒋增辉，王幸艳.介绍几种新的水中细菌总数检测方法[J].城市给排水.2005，19（2）：15-16.

[责任编辑：张涛]