Sema3A在正畸牙移动免疫组化中作用的研究

白秋野　阎秀林



Sema3A在正畸牙移动免疫组化中作用的研究

白秋野阎秀林

【摘要】目的 探讨正畸牙移动骨改建过程中Sema3A表达的规律性。方法 将36只wildtype小鼠成功建立正畸牙移动模型后，在上颌左侧施加机械力（加力组）；上颌右侧未作其他处理（对照组），在建模后第1 d、7 d以及14 d分别处死12只小鼠，制作石蜡组织切片进行免疫组织化学染色观察牙周组织的组织形态改变。结果 在建模后第1 d，两组间牙周组织形态、OB细胞数目无明显差异；第7 d，加力组牙周组织形态排列紊乱，OB细胞数目高于对照组；在第14 d，两组间各项观察指标相近，无明显差异。结论 Sema3A对于正畸牙移动骨改建过程中重要调节作用，其表达水平具有时空规律性，建议临床深入研究。

【关键词】正畸牙移动；牙周组织改建；骨改建；骨保护素；Sema3A

作者单位：中国医科大学附属口腔医院正畸科，辽宁 沈阳 110002

正畸牙移动过程实质为牙槽骨改建过程，在此过程中新骨形成和破骨吸收应始终保持动态平衡。分泌性蛋白Sema3A不仅能够影响神经系统功能，而且被证实具有介导免疫调控、参与心血管内皮形成、调节骨组织改建等多种作用效果［1-3］。本研究通过建立小鼠正畸牙移动模型，旨在明确牙周组织Sema3A表达变化和规律性。

1　材料与方法

1.1实验动物

36只清洁级wildtype（C57BL/6）小鼠，体重18～22 g，鼠龄4～8 W，动物皮毛光泽度佳，反应迅速，饮食、二便均正常，且排除疾病鼠。在上颌左侧第一磨牙和切牙间用镍钛拉簧施加10～15克力，加力的上颌左侧为加力组，未接受干预的右侧为对照组。

1.2主要试剂和仪器

水合氯醛、透明二甲苯、兔抗Sema3A多克隆抗体、镍钛拉簧、硬组织切片机、HRP标记羊抗兔抗体、正畸专用测力计、免疫组化试剂盒、防脱玻片以及光学显微镜等。

1.3实验方法

1.3.1建立移动动物模型 wildtype鼠腹腔注射麻醉成功后，将上颌切牙作为支抗，在上颌两切牙牙槽骨间放一结扎丝，连接镍钛拉簧结扎剪断。另选一根结扎丝在上颌第一、第二磨牙牙槽骨间穿过，顺牙颈部绕住第一磨牙，旋紧结扎丝，把镍钛拉簧与上颌第一磨牙固位结扎丝与连接装置相连接，保持拉簧力量。每个饲养笼放5只，饲养温度20℃～25℃，每日换饲料并观察矫治器情况。

1.3.2观察指标 在建模后第1 d、7 d和第14 d分别处死动物（12只），应用免疫组织化学染色法检测牙周组织的形态变化，OB数目和Sema3A阳性情况（阳性：细胞内现棕黄色颗粒）。显微镜下重点观察牙周纤维排列方式、牙槽骨形态以及OB数目。

2　结果

对照组牙周膜纤维整齐、规则，在牙槽骨边缘无骨吸收，偶尔可见成骨细胞；加力组第1 d，形态特点、成骨细胞分布和数目、Sema3A阳性细胞数和对照组几乎一致；第7 d，膜纤维排列紊乱，膜腔变窄，牙槽骨边缘可见骨吸收陷窝，成骨细胞极为丰富，Sema3A阳性细胞分布广泛，各指标高于对照组（见图1～2）；在第14 d，加力组牙周膜纤维排列方式、骨吸收陷窝范围、成骨细胞数目、Sema3A阳性细胞数再次恢复至对照组相近水平，不具有显著性差异。

图1　7 d对照组　图2　7 d实验组

3　讨论

由于牙齿移动速度、骨吸收速度以及骨形成情况均能够影响骨改建治疗效果，因此，改善正畸牙移动速度、防止牙槽骨丧失等对于改善正畸牙治疗效果极为重要。Sema3A对于骨组织的保护调节作用已经得到临床广泛认可［4-6］，其能够产生类似于骨保护素一样的作用，不仅能够有效调控OB分化及其生物学功能，而且对于OC分化成熟均有重要调控作用，因此，Sema3A是骨代谢过程中最为重要的调控因子之一［7-8］，对于骨自稳态和骨重塑具有重要影响。在本实验中，对照组的牙周组织形态一直未见明显改变，虽然细胞内可检测到OB和Sema3A存在，但是一直为稳定低水平；加力组在第1 d时各项指标均未见明显异常，说明在此阶段，骨改建尚未开始；在第7 d时，牙槽骨边缘出现骨吸收，OB数目和Sema3A阳性表达大量增多，区别于对照组，说明此时骨改建活动最为活跃，骨吸收和骨形成同步活跃进行，此时是骨重塑的峰值阶段；在第14 d，加力组各项指标与对照组相近，说明骨改建已经基本完成。综上所述，Sema3A能够参与调节正畸牙骨形态结构的改建过程，其作为保护因子，能够促进OB和骨吸收，在骨改建过程中的表达水平具有时间规律性，可以作为评价骨改建的标记物。

参考文献

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［7］邹海东，罗敏． Semaphorins与骨质疏松的研究进展［J］． 实用医学杂志，2014，30（18）：3011-3013．

［8］丛宇，郭亭，赵建宁，等． Semaphorins家族在骨自身动态平衡及代谢性骨病中的重要角色［J］． 中国组织工程研究，2015，19 （11）：1761-1767．

·护理研究·

Study on the Effect of Sema3A on the Immunohistochemistry During Orthodontic Tooth Movement

BAI Qiuye YAN Xiulin Orthodontic Department， The affiliated Oral Hospital of China Medical University， Shenyang Liaoning 110002， China

［Abstract］Objective To discuss the regularity of Sema3A expression in bone remodeling of orthodontic tooth movement. Methods 36 wildtype mice were made successful orthodontic tooth movement model， the mechanical stress was applied in the left upper jaw （stress group）， there was no other treatment in right upper jaw （control group）. After modeling in 1 d， 7 d and 14 d， 12 mice were sacrificed， the immunohistochemical staining was used in paraffin tissue sections， the changes of periodontal tissue morphology were observed. Results After modeling for 1 d， there were no significant difference between the two groups in the periodontal tissue morphology and OB cells number. On the 7thday， in stress group，the periodontal tissue morphological disorder， the number of OB cells was significant than control group. On the 14thday， two groups of observed indicators were similar， there was no significant difference. Conclusion Sema3A plays an important regulatory role in orthodontic tooth movement during the process of bone remodeling. The level of expression shows a temporal and spatial regularity. It is recommended to further study.

［Key words］Orthodontic tooth movement， Periodontal tissue remodeling，Bone remodeling， Bone protection element， Sema3A

【中图分类号】R392

【文献标识码】A

【文章编号】1674-9308（2016）12-0187-02

doi：10．3969/j．issn．1674-9308．2016．12．134

通讯作者：阎秀林，E-mail：wang_dianming@163．com