妊娠高血压疾病与HLA-G，KIR相关性的分析

余亮 熊员焕 冯翰

妊娠高血压疾病与HLA-G，KIR相关性的分析

余亮 熊员焕 冯翰

目的 检测妊娠高血压疾患者者外周血KIRs水平和胎盘组织HLA-G的表达情况，进一步探讨KIRs在妊娠高血压疾病发病中的免疫机制。方法 用20例妊娠高血压疾病和20例正常妊娠产妇（对照组）采用免疫组化技术检测胎盘组织HLA-G阳性率，酶联免疫吸附实验（ELISA)检测外周血血清KIRs水平，对比分析各指标及其与妊娠高血压疾病的关系。结果 （1）母体血清KIRs含量与妊娠高血压疾病相关，并且随着妊娠高血压病情的加重母体血清KIRs含量增加；（2）孕妇胎盘组织中的HLA-G表达阳性率及表达强度与妊娠高血压疾病相关，并且妊高症组表达阳性率和表达强度随病情加重而降低；（3）母体血清KIRs含量与胎盘组织中的HLA-G表达阳性率及表达强度相关。结论 外周血清KIRs可以反映妊娠高血压综合征病情，胎盘HLA-G的表达降低与妊娠高血压疾病严重程度密切相关。

妊娠高血压疾病；KIR；胎盘；HLA-G

妊娠期高血压疾病为妊娠期特有疾病，是产科常见并发症。表现为妊娠20周以后高血压，蛋白尿，胎儿生长受限等情况。妊娠高血压疾病造成的孕产妇死亡率为4.2/10万，占死亡总数的

9.3 %，围生儿病死率为2.2%，严重威胁母婴健康，是导致孕产妇和围产儿病亡的主要原因[1]。其发病机制不清晰，免疫学因素近来越来越受到关注。目前多数学者认为妊娠状态下母胎界面免疫平衡的破坏，造成一系列的级联式免疫反应，包括全身的免疫反应，导致病理性妊娠的发生。本文通过检测妊娠高血压疾患者者外周血KIRs水平和胎盘组织HLA-G的表达情况的分析，进一步探讨妊娠高血压疾病的免疫学机制中自然杀伤细胞及其KIR受体和配体HLA-G表达的变化。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2013年9月～2014年5月在景德镇市第一人民医院产科住院分娩的PIH患者20例，其中妊娠期高血压5例，平均年龄（26.20±1.48）岁，平均孕周（39.77±1.11）周；轻度子痫前期10例，平均年龄（27.0±1.0）岁，平均孕周（38.20±1.02）周；重度子痫前期5例，平均年龄（28.70±3.49）岁，平均孕周（38.94±1.54）周。选择同期住院分娩的健康孕妇20例作为对照组，平均年龄（26.70±2.53）岁，平均孕周（39.67±1.07）周。2组孕妇妊娠前均无高血压、糖尿病以及肝肾疾病等。

1.2 诊断标准[2]血压正常的女性孕20周后收缩压≥0 mmHg，舒张压≥90 mmHg定义为妊娠期高血压。子痫前期的标准：妊娠20周后首次出现收缩压≥140 mmHg或舒张压≥90 mmHg，蛋白尿即尿蛋白≥0.3 g/24 h、下列标准至少1条符合可诊断为重度子痫前期：卧床休息患者间隔6小时2次收缩压≥160 mmHg或舒张压≥110 mmHg；蛋白尿：≥5 g/24 h，或间隔4小时2次尿蛋白；少尿：24小时尿量＜500 mL；大脑或视觉障碍；肺水肿或发绀；上腹部或右上腹疼痛；肝功能受损；血小板减少；胎儿生长受限。

1.3 血标本采集 2组孕妇均在分娩前抽取肘正中静脉血

3 mL，在室温条件下离心10 min，转速2 000。取血清1 mL置于-70℃冰箱保存，成批检测。操作方法按照美国Edification B＆G公司公司提供的操作说明。

1.4 胎盘组织选取 胎盘娩出30 min内取胎盘母体面约2 cm×2 cm×2 cm标本（避开缺血及钙化点），盐水清洗，置10%中性福尔马林液固定48 h以后，采用常规脱水、浸蜡，石蜡包埋，最后进行4μm连续切片。应用免疫组化S-P法根据阳性细胞数和细胞内染色强度检测胎盘组织中HLA-G表达强度。应用免疫组化S-P法根据阳性细胞数和细胞内染色强度对胎盘组织中HLA-G表达进行评分，0～1分为阴性（-），2～3分为弱阳性（+），≥4分为强阳性（++）。

1.5 统计学方法 采用SPSS 17.0对全部数据进行统计处理，计量资料采用独立因素样本均数方差分析，两变量间的相关性分析采用Spearman等级资料的相关性分析方法。

2 结果

2.1 临床特征 见表1。

表1 孕妇临床特征（±s）

表1 孕妇临床特征（±s）

临床观察指标妊娠高血压组轻度子痫前期组重度子痫前期组对照组（n=5）（n=10）（n=5）（n=20）年龄（岁）26.43±0.5426.8±0.4627.96±0.7425.63±0.51分娩孕周（周）38.02±1.1137.07±1.0236.94±1.5438.61±1.07新生儿体质量（kg）3278.00±60.023075.00±61.34 2960.00±52.453292.00±60.29

2.2 2组孕妇外周血外周血KIRs水平测定结果 随着妊娠高血压病情的加重母体血清KIRs含量增加，重度子痫前期患者较正常妊娠组差异有统计学意义（P<0.01）。见表2。

表2 孕妇外周血KIRs水平（s）

表2 孕妇外周血KIRs水平（s）

组别例数平均值妊娠高血压组5 14.96±2.03轻度子痫前期组10 53.21±2.38重度子痫前期组5114.77±7.00对照组20 7.32±0.99

2.3 2组孕妇胎盘组织中的HLA-G表达阳性率及表达强度比较 妊高症组表达阳性率明显低于对照组，并且妊高症组表达强度随病情加重而降低，差异有统计学意义（P<0.01）。

2.4 KIRs水平与胎盘中HLA-G蛋白表达水平相关性分析 血清中表达KIRs水平与胎盘中HLA-G蛋白表达水平呈负相关(r=0.909，P＜0.05)。

3 讨论

妊娠高血压疾病是妊娠期特有疾病，是导致孕产妇死亡的六大独立因素之一[3]，其发病机制未完全阐明。子痫前期被认为与炎症、血管内皮功能障碍以及母胎间免疫不耐受密切相关。胎儿滋养细胞表达的HLA-G在子痫前期血管重铸的免疫调节中的作用受到越来越多的关注[4]。研究表明HLA-G可与NK细胞表面抑制性受体KIR结合，向细胞内传递抑制信号，抑制NK细胞的细胞毒作用。目前妊娠高血压与NK细胞、KIR、HLA-G关系机制研究集中在外周血和母胎界面中数量、功能、基因检测等多方面[5-8]。目前鉴定出与受体HLA-G结合的配体只有KIR2DL4。通过酶联免疫吸附实验（ELISA)检测外周血血清KIR水平表明，妊娠高血压患者KIR水平较正常孕妇组升高，并且其水平与妊娠高血压疾病程度正相关，表明KIR参与妊娠高血压疾病的发生和发展。KIR2DL4不仅是抑制性受体，抑制NK细胞的细胞毒作用，保护滋养细胞免受蜕膜NK细胞杀伤。

研究表明正常妊娠时母胎界面以天然免疫系统起主导作用，HLA-G与蜕膜NK细胞的抑制性受体KIR2DL4结合，刺激NK细胞分泌细胞毒性因子和免疫调节因子，与子宫螺旋动脉重铸中起作用的血管生成因子共同发挥作用。正常孕妇蜕膜NK细胞高水平表达KIR2DL4。本研究通过免疫组化技术检测妊娠高血压患者胎盘HLA-G，证实妊娠高血压患者胎盘HLA-G表达低于对照组孕妇。考虑HLA-G降低与其结合的受体KIR2DL4减少，对NK细胞的抑制信号减弱，导致NK细胞的杀伤活性增强，刺激NK细胞分泌细胞因子减少，滋养细胞的浸润性下降，胎盘浅着床，螺旋小动脉管腔相对狭窄，造成胎盘血液循环阻力增加，子宫胎盘灌注量减少胎盘供血不足，胎盘滋养细胞缺血缺氧，产生大量细胞因子，进而引起血管内皮细胞损伤，炎症介质释放，导致全身各系统反应及临床表现[9]。

综上所述，自然杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)通过识别滋养细胞表面的人类白细胞抗原G(HLA-G),向自然杀伤(NK)细胞传递抑制性信号，研究表明NK细胞及其受体KIR和配体HLA-G参与了妊娠高血压疾病的发病机制，无论是全身免疫失衡还是局部母胎界面免疫紊乱均与妊娠高血压疾病的发病及病理生理变化密切相关。

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10.3969/j.issn.1009-4393.2016.36.010

江西省自然科学基金（20122BAB205091）

江西 330006 南昌大学研究生院医学部 （余亮） 江西省人民医院妇产科 （熊员焕） 333000 江西景德镇市第一人民医院妇产科 （余亮冯翰）