三阴性乳腺癌HER2(0/1+)和HER2(2+)的相关基因表达差异

许增祥，谢　闵，黄小梅，周芳芳，卢林明

(1.皖南医学院　病理学教研室，安徽　芜湖　241002；2.芜湖市第二人民医院　病理科，安徽　芜湖　241000)



三阴性乳腺癌HER2(0/1+)和HER2(2+)的相关基因表达差异

许增祥1，谢闵2，黄小梅1，周芳芳1，卢林明1

(1.皖南医学院病理学教研室，安徽芜湖241002；2.芜湖市第二人民医院病理科，安徽芜湖241000)

【摘要】目的：探讨三阴性乳腺癌(TNBC)HER2(0/1+)和HER2(2+)两组中CK5/6、EGFR、VEGF、COX-2和TOP Ⅱα的表达差异及其临床意义。方法：收集2010年1月～2014年12月TNBC患者HER2(0/1+)组30例，HER2(2+)组15例，采用免疫组织化学方法检测CK5/6、EGFR、VEGF、COX-2和TOP Ⅱα的表达。结果：与HER2(2+)组比较，HER2(0/1+)组中CK5/6、EGFR、VEGF、COX-2和TOPⅡα的表达均偏高，但不具有统计学差异(P>0.05)；且与患者年龄、肿瘤大小、病理学类型及分级、淋巴结转移、脉管侵犯均无相关性(P>0.05)。结论：TNBC HER2(0/1+)和HER2(2+)两者存在一些基因表达差异，可能为临床靶向治疗药物的选择提供理论依据。

【关键词】三阴性乳腺癌；HER2；表达；差异

【DOI】10.3969/j.issn.1002-0217.2016.01.007

三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer，TNBC)是一种特殊分子类型的乳腺癌，其特点是雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)以及人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor reptor 2,HER2)表达均呈阴性。由于TNBC病人内分泌治疗和抗HER2靶向治疗均无效，可选择的药物作用靶点和治疗手段相对较少，因而TNBC患者预后较差。有研究报道，与HER2(1+)相比，HER2(0)的TNBC中CK5/6或EGFR表达明显较高，表现出更像基底细胞样乳腺癌(basal-like breast carcinoma,BLBC)特征。本研究通过采用免疫组织化学方法，检测TNBC患者HER2(0/1+)和HER2(2+)两组内CK5/6、表皮生长因子受体(epithelial growth factor,EGFR)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、环氧化酶2(cyclooxygenase 2,COX-2)和DNA拓扑异构酶Ⅱα(topoisomerase，TOPⅡα)的表达情况，并分析其差异和临床意义。

1资料与方法

1.1临床资料随机选择2010年1月～2014年12月在皖南医学院附属弋矶山医院和芜湖市第二人民医院行手术并病理确诊的乳腺癌病人标本45例。患者年龄29～75岁，中位年龄52岁，均无其他恶性肿瘤史。所有病例ER、PR和HER2均经本实验室再次免疫组织化学验证，其中HER2(0/1+)组30例，HER2(2+)组15例，后者并经荧光原位杂交(FISH)技术证实呈阴性。

1.2实验方法所有标本均用10%福尔马林溶液固定，石蜡包埋。根据HE染色切片选取癌细胞丰富区域的对应蜡块进行打孔(直径1.2 mm)，制备组织芯片。组织芯片蜡块切片厚度4 μm，常规HE染色。免疫组化染色采用SP法，DAB显色，技术操作严格按照国家卫计委PQCC要求进行病理质控。所有抗体ER、PR、HER2、CK5/6、EGFR、VEGF、COX-2和TOPⅡα均购自福州迈新生物技术开发有限公司和北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3结果判定免疫组化染色结果判读分别由3名高年资病理医师完成，最后对判读结果进行综合分析。ER、PR表达于细胞核，着色<10%判为阴性(以周边正常乳腺导管上皮细胞作阳性对照)。HER2判定依照2014版乳腺癌HER2检测指南进行。CK5/6、VEGF和COX-2主要表达于细胞浆，TOPⅡα定位于细胞核，EGFR呈细胞膜/胞浆染色，当上述基因蛋白表达的阳性细胞≥10%时判为阳性。

1.4统计学方法应用SPSS 18.0统计软件处理数据，所有数据比较采用χ2检验或Fisher精确概率法，以P<0.05作为差异具有统计学意义。

2结果

2.1TNBC HER2(0/1+)和HER2(2+)中基因表达差异由表1可知，CK5/6、EGFR、VEGF、COX-2和TOPⅡα在TNBC HER2(0/1+)中表达均高于HER2(2+)，但不具有统计学差异(P>0.05)。

A示病理组织芯片扫描片(HE染色)，B～F示免疫组化染色(IHC ×200)：B示CK5/6(+)，C示EGFR(+)，D示VEGF(+)，E示COX-2(+)，F示Top Ⅱ(+)。

图1TNBC组织芯片HE染色及免疫组化标记

2.2TNBC HER2(0/1+)组和HER2(2+)组基因表达与临床病理特征关系由表2、3可见，在HER2(0/1+)和HER2(2+)中，CK5/6、EGFR、VEGF、COX-2、TopoⅡα的表达与患者年龄、肿瘤大小、病理学类型及分级、脉管侵犯、淋巴结转移均无相关性(P>0.05)。

表1三阴性乳腺癌HER2(0/1+)与HER2(2+)基因表达差异

HER-2表达CK5/6+-阳性率/%PEGFR+-阳性率/%PVEGF+-阳性率/%PCOX-2+-阳性率/%PTOPⅡα+-阳性率/%PHER2(0/1+)82226.67>0.05102033.33>0.0522873.33>0.0524680.00>0.05141646.67>0.05HER2(2+)31220.0021313.3310566.678753.3351033.33合计113424.44123326.67321371.11321371.11192642.22

3讨论

三阴性乳腺癌(TNBC)免疫组化标记显示为“三阴性”，即ER、PR、HER2均为阴性，是一种特殊类型的乳腺癌，其病理形态、临床特征均与普通乳腺癌有所不同。TNBC发病率约占所有乳腺癌的12%～24%，平均15%左右。TNBC发病年龄比普通乳腺癌患者年龄轻，肿瘤体积往往较大，呈推挤性生长，中央往往伴有大片坏死；肿瘤细胞异型较明显，组织学分级高，具有较高的增殖活性，侵袭性强。而且缺乏有效的减危手段，主要以化疗为主，治疗后大多在1～3年内复发，多数在5年内死亡。基底细胞样乳腺癌(BLBC)同样具有免疫组化标记“三阴性”特征。它与TNBC有相似特性，但不完全相同，存在交叉重复。BLBC具有基底细胞基因表型，并不同程度地表达CK7、CK5/6、干细胞因子受体(c-kit)、p53等基因。因此，CK5/6和(或)CK14阳性表达成为BLBC病理诊断标准之一。也有文献将CK5/6或EGFR阳性表达作为具有基底细胞样表型乳腺癌的指标。TNBC和BLBC均高表达EGFR，而EGFR高表达则抑制细胞凋亡、促进血管新生，从而促进肿瘤发生、转移和侵袭;乳腺癌患者若表达CK5/6或EGFR，其生存率明显降低，预后往往极差。本实验发现，TNBC组织内CK5/6、EGFR均高表达，而且HER2(0/1+)组TNBC中CK5/6、EGFR表达率均高于HER2(2+)组。另外，CK5/6或EGFR阳性表达者占50%(15/30)，也明显高于HER2(2+)组，这些结果提示HER2(0/1+)组TNBC在免疫表型上更加具有BLBC的特征，但CK5/6、EGFR的表达在两个实验组均与临床病理资料无显著相关性。

表2TNBC HER2(0/1+)中基因表达与临床病理特征之间的关系

临床病理特征nHER(0/1+)组CK5/6+-PEGFR+-PVEGF+-PCOX-2+-PTOPⅡα+-P年龄/岁>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05 ≥5018414612126144810 <5012484810210266肿块大小>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05 ≥2cm226168141481661012 ﹤2cm82626808044病理类型>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05 浸润性导管癌268188182062241214 其他40422222222组织分级>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05 Ⅰ、Ⅱ102846828255 Ⅲ20614614146164911淋巴结转移>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05 有18612810144162108 无12210210848448脉管侵犯>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05 有1441041010410477 无1641261012414279

表3TNBC HER2(2+)中基因表达与临床病理特征之间的关系

临床病理特征nHER(2+)组CK5/6+-PEGFR+-PVEGF+-PCOX-2+-PTOPⅡα+-P年龄/岁>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05 ≥5071616524334 <5082617534426肿块大小>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05 ≥2cm102828646428 ﹤2cm51405412332病理类型>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05 浸润性导管癌13310211947658 其他20202111102组织分级>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05 Ⅰ、Ⅱ71616433425 Ⅲ82617625335淋巴结转移>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05 有62424514233 无91809544527脉管侵犯>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05 有40422403113 无1138011655647

血管内皮生长因子能特异性促进血管内皮细胞增殖和血管、淋巴管的生成，并能提高血管通透性，在肿瘤的生长和转移过程中起重要作用。已有研究证实，TNBC高表达VEGF，而且患者生存期往往更短。COX-2是花生四烯酸合成前列腺素的限速酶，在多种肿瘤中高表达，可促进肿瘤细胞增殖、抑制凋亡和促进血管新生、肿瘤播散[10]。同样，COX-2在乳腺癌组织中高表达，且与预后相关[11]。最近有文献报道[12]，TNBC中COX-2表达增高。本实验结果发现，TNBC组织中VEGF和COX-2呈高表达，COX-2在HER2(0/1+)TNBC中表达也高于HER2(2+)，进一步提示COX-2高表达不仅与TNBC有关，而且可能与BLBC关系更密切，有可能作为BLBC未来的一个分子治疗靶点。TOP是DNA代谢过程中催化DNA拓扑结构改变的重要的酶，同时也是多种化疗药物的靶点。乳腺癌中，TOPⅡα不仅在TNBC组织中高表达[3,13]，而且还可作为蒽环类药物的疗效预测指标以及乳腺癌的预后指标[14]。我们的实验结果显示TOPⅡα在HER2(0/1+)组表达率高于HER2(2+)组，提示蒽环类药物可能对部分TNBC有效。

本实验中，我们分别研究了HER2(0/1+)和HER2(2+)中这些基因表达与临床病理特征之间的关系，结果显示HER2(0/1+)中这些基因的表达患者年龄、肿瘤大小、病理学类型及分级、淋巴结转移、脉管侵犯均无相关性，可能原因是标本量过低所导致。但就部分数据可言，提示我们这些基因在TNBC HER2(0/1+)和HER2(2+)中表达存在差异，可能与肿瘤的不同生物学行为存在某些联系。

总之，本研究结果表明TNBC中，HER2不同表达状态下，一些基因表达存在差异，这些基因表达差异不仅反映了TNBC不同的临床生物学行为，而且可根据这些基因表达的差异，选择合理的化疗方案，对TNBC的预防和治疗、改善预后等均有重要意义。

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Gene expression difference between HER2(0/1+)and HER2(2+)in the triple-negative breast cancers

XU Zengxiang,XIE Min,HUANG Xiaomei,ZHOU Fangfang,LU Linming

Department of Pathology,Wannan Medical College,Wuhu 241002 China

【Abstract】Objective：To investigate the expression difference of CK5/6,EGFR,VEGF,COX-2,TOPⅡα genes and their clinical significance between HER2(0/1+)and HER2(2+)in the triple-negative breast cancers(TNBC).Methods:Thirty cases of TNBC with HER2(0/1+)and 15 with HER2(2+)were included.Immunohistochemistry was performed to detect the expression of CK5/6,EGFR,VEGF,COX-2 and TOPⅡα in the tissue specimens obtained from the TNBC cases.Results:Up-regulated expression of CK5/6,EGFR,VEGF,COX-2 and TOPⅡα was observed in cases of HER2(0/1+),yet the difference was not statistically significant,and expression of these genes was not correlated with the patient′s ages，tumor size,type of pathology,histology grade,lymph node metastasis and vascular invasion(P>0.05).Conclusion:Expression of HER2(0/1+)appears somewhat different from that of in TNBC,and this biological marker may be an important theoretical support to molecular target therapy for TNBC.

【Keywords】triple-negative breast cancer;HER2;expression;differences

文章编号：·临床医学·1002-0217(2016)01-0022-04

基金项目：皖南医学院中青年科研基金项目(WK201513)

收稿日期：2015-05-29

作者简介：许增祥(1980-),男,讲师,硕士,(电话)0553-3932474；(电子信箱)xuzx1980@126.com；

【文献标识码】【中图号】R 737.9A

谢闵(1981-)，女，主治医师，博士研究生，(电子信箱)76206423@qq.com，通讯作者.