奥卡西平纳米脂质载体包封率的测定*

金银秀，王玉新，石 雷，沈佩佩，夏念友，游锦晨，李姿生

(台州职业技术学院 化学制药研究所，浙江 台州 318000)

奥卡西平(Oxcarbazepine，OXC)是一种治疗癫痫部分发作和全身强直阵孪性发作的新药[1]。与卡马西平相比，具有不良反应少、自身诱导作用小等优点，其体内过程主要通过胃肠道快速吸收并迅速、几乎完全降解为有药理活性的代谢产物10，11-二氢-10-羟基卡马西平(monohydroxycarbazepine，MHD)而发挥作用[2]。但由于OXC几乎不溶于水，其普通制剂在水中不易润湿和扩散，用常规的制剂辅料和分散系统制备的口服剂型在胃肠液中易于结晶或沉淀析出，极大地影响了药物的溶出和吸收。近年来，出现了一些新型的药物传递系统，其中纳米脂质载体受到了越来越多的关注[3-5]。纳米脂质载体具有脂质药物载体的固有优势：难溶性药物在脂质成分中表现出良好的溶解度，引入液体脂质可以增加药物的包封率和载药量；所使用的脂质具有生理相容性，体内毒性低；纳米粒子的固体骨架结构使其具有良好的稳定性；具备与固体脂质纳米粒相似的缓控释特性[6-7]。因此进行OXC纳米脂质载体的研究是解决上述问题的有益探索。纳米脂质载体易于加工成传统剂型，如片剂、胶囊等[6]。作者研究制备了OXC纳米脂质载体，可以进一步制成冻干粉以供临床使用。为了更好地控制OXC纳米脂质载体的质量，建立了其包封率的测定方法。

1 实验部分

1.1 试剂与仪器

奥卡西平对照品：批号100657-201102，中国食品药品检定研究院，供含量测定用；奥卡西平：批号140530，质量分数99.8%，浙江九洲药业股份有限公司；卵磷脂：批号J1422068，质量分数>70%，阿拉丁试剂(上海)有限公司；大豆油：批号20140429，上海嘉里食品工业有限公司；聚山梨酯80(Tween-80)：批号20131220，上海强顺化学试剂有限公司；葡聚糖凝胶( Sephadex G50)：批号20140703，台州市路桥四甲生化塑料厂；乙腈、甲醇：色谱纯；水为蒸馏水，其它试剂均为分析纯，市售。

Agilent 1220型高效液相色谱仪：可变波长检测器，美国Agilent公司；RE-52AA 型旋转蒸发器：上海亚荣生化仪器厂；DF-101S型集热式磁力加热搅拌仪：金坛市精达仪器制造厂；Scientz-IID型超声波细胞粉碎机：宁波新芝生物科技有限公司；GL-20M型高速冷冻离心机：上海卢湘仪离心机仪器有限公司。

1.2 OXC纳米脂质载体制备[8]

1.2.1 OXC纳米脂质载体制备

取10 mg OXC，0.1 g卵磷脂，0.15 g大豆油，0.4 g Tween-80精密称定，溶解于10 mL乙酸乙酯中，超声至完全溶解，构成有机相。将有机相倒入30 mL水中，充分搅拌，超声1 min，得乳浊液；将得到的乳浊液进行旋转蒸发，除去有机溶剂乙酸乙酯，得到澄清均一的溶液即为奥卡西平纳米脂质载体。

1.2.2 空白纳米脂质载体的制备

取除主药OXC外的其它成分按“1.2.1”项下方法制备，即得空白纳米脂质载体。

1.3 OXC含量测定方法的建立

1.3.1 色谱条件

色谱柱Agilent ZORBAX C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相0.01 mol/L磷酸盐缓冲液(含质量分数0.2%的三乙胺，用磷酸调节pH= 4.5)-乙腈-甲醇(体积比为15∶45∶40)；流速1.2 mL/min；柱温50 ℃；检测波长254 nm；进样量20 μL。

1.3.2 溶液制备

取OXC纳米脂质载体及空白纳米脂质载体各1 mL，加流动相定容至10 mL，超声5 min，破坏其脂质结构，作为供试品溶液和空白样品溶液。取OXC 0.010 0 g精密称定，流动相溶解定容至25 mL，精密吸取1.0 mL至10 mL量瓶中，用流动相定容，得到质量浓度为40.00 μg/mL的OXC对照品溶液。

1.3.3 方法学考察

1.3.3.1 专属性

取空白样品溶液、OXC对照品溶液和供试品溶液，按“1.3.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。

1.3.3.2 线性关系考察

取OXC 0.010 4 g精密称定，用流动相定容至250 mL作为母液，分别稀释为质量浓度0.16、0.31、0.62、1.04、2.16、5.16、20.8、31.2、41.6 μg/mL溶液，按“1.3.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。

1.3.3.3 仪器精密度实验

精密量取1.04 μg/mL对照品溶液，按“1.3.1”项下色谱条件重复进样测定 6 次。

1.3.3.4 重复性实验

取同一批样品，平行6份，按“1.3.2”项下方法处理，进样测定。

1.3.3.5 回收率实验

精密移取9份空白纳米脂质载体溶液1 mL，分别加入OXC对照品溶液，流动相定容至10 mL量瓶中，制成质量浓度分别为0.324、3.24、32.4 μg/mL的溶液，按“1.3.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积，计算回收率。

1.4 包封率测定方法

1.4.1 葡聚糖凝胶柱层析法

1.4.1.1 洗脱曲线的建立

采用葡聚糖凝胶柱层析法分离载药纳米脂质载体，HPLC法测定游离药物的含量。称取葡聚糖凝胶(G50)2.5 g，加纯化水水浴加热煮沸溶胀2 h，静置溶胀12 h。装柱平衡，精密吸取OXC纳米脂质载体溶液1 mL上样，用纯化水洗脱，流速1.5 mL/min，每管1 mL，收集洗脱液40管后，改用质量分数50%的甲醇洗脱，收集洗脱液40管[9]。洗脱下来的溶液每毫升加无水甲醇2 mL，加流动相2 mL，涡旋15 s，用0.22 μm的有机膜过滤，按“1.3.1”项下色谱条件进样测定。

1.4.1.2 柱回收率实验

精密吸取OXC纳米脂质载体溶液1 mL，按上述方法过柱分离，取全部80 mL洗脱液，旋转蒸发浓缩至干，甲醇清洗旋蒸瓶并定容至10 mL，超声5 min后，按“1.3.1”项下色谱条件进样测定。另取OXC纳米脂质载体溶液1 mL，甲醇定容至10 mL，超声5 min后，同法测定，计算柱回收率。

1.4.1.3 包封率的测定

取OXC纳米脂质载体溶液1 mL，加无水甲醇2 mL，加流动相2 mL，涡旋15 s用0.22 μm的有机膜过滤，按“1.3.1”项下色谱条件进样测定，计算含量，得到OXC纳米脂质载体溶液中药物总量为ρ总，按上述方法，用纯化水洗脱，收集洗脱液前40 mL，旋转蒸发浓缩至干，甲醇清洗旋蒸瓶并定容至10 mL，超声5 min后，按“1.3.1”项下色谱条件进样测定，计算含量，得到OXC纳米脂质载体包封药物的ρ包。OXC纳米脂质载体包封率=ρ包/ρ总。

1.4.2 高速冷冻离心法[9]

1.4.2.1 方法学验证

取处方量的OXC精密称定，纯化水定容至25 mL，取2 mL置离心管中高速冷冻离心(离心条件为22 000 r/min，4 ℃)45 min，倾去上层清液，用甲醇溶解底部沉淀物并定容至10 mL，按“1.3.1”项下色谱条件进样测定。将空白纳米脂质载体溶液按上述方法离心。将处方量的OXC与空白纳米脂质载体溶液混合，按上述方法离心并测定。

1.4.2.2 包封率测定

精密吸取OXC纳米脂质载体溶液2 mL按“1.4.2.1”项下方法离心并分析测定，计算游离药物的ρ游。精密吸取OXC纳米脂质载体溶液2 mL，用甲醇定容至10 mL，超声10min破乳，破乳后液体取0.5 mL稀释至10 mL，按“1.3.1”项下色谱条件进样测定，计算出总药物的质量浓度ρ总。OXC纳米脂质载体包封率=(1-ρ游/ρ总)×100%。

2 结果与讨论

2.1 方法学考察结果

专属性实验色谱图见图1。

t/min空白样品溶液

t/min供试品溶液

t/minOXC对照品溶液图1 高效液相色谱法图

由图1可见，处方中其它成分不干扰OXC的定量分析。线性关系考察以OXC质量浓度(ρ) 为横坐标、峰面积(A)为纵坐标进行线性回归，得回归方程A=27.86ρ+5.626，r=0.999 8(n=9)。结果表明，ρ(OXC)在0.16～41.6 μg/mL内与峰面积线性关系良好。

精密度实验中对照品峰面积的RSD=0.45%(n=6)，表明仪器精密度良好。

重复性实验测得平均ρ(OXC)=24.22 μg/mL，RSD=0.81%(n=6)，表明方法重复性良好。

回收率实验结果低、中、高3种浓度的平均回收率为100.8%，RSD=1.24%，表明该方法准确度良好。

2.2 包封率测定结果

2.2.1 葡聚糖凝胶柱层析法

洗脱曲线的测定结果显示在前40 mL无游离药物被洗脱出来，在第55～65 mL洗脱液里检测出游离药物，表明游离药物与包封药物能有效分离。OXC平均柱回收率为99.62%(n=3)，结果表明葡聚糖凝胶柱层析法可用于OXC纳米脂质载体包封率的测定。测得OXC纳米脂质载体的包封率为(98.16±1.59)%。

2.2.2 高速冷冻离心法[9]

方法学验证结果显示OXC沉淀药物量为97.81%，空白纳米脂质载体溶液离心后底部未见沉淀，处方量的OXC与空白纳米脂质载体溶液混合后离心，测得沉淀药物量为95.53%。结果表明，高速离心法测定OXC纳米脂质载体的包封率可行。测得OXC纳米脂质载体的包封率为(95.73±0.77)%。

3 结 论

采用葡聚糖凝胶柱层析法和高速冷冻离心法较好地分离纳米脂质载体与游离药物，并采用高效液相色谱法测定药物的含量，方法简单易行，重复性好。经方法学验证，该法可用于OXC纳米脂质载体中药物包封率的测定。

参 考 文 献：

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