超高效液相色谱法测试分析蔬菜的多种农药残留

许燕平　朱金兰

摘 要 通过超高效液相色谱法同时测定蔬菜中吡虫啉、多菌灵、啶虫脒、嘧霉胺和阿维菌素的残留量，确定最佳色谱条件。结果证实，超高效液相色谱法的准确度高、耗时短，特别适用于批量蔬菜样品的农药多残留检测。

关键词 超高效液相色谱法；农药多残留；蔬菜检测

中图分类号：TS255.7 文献标志码：A 文章编号：1673-890X（2016）01--02

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

仪器：美国沃特世Acquity UPLC I-Class超高效液相色谱仪、配带二极管阵列检测器、电化学工作站等；超纯水系、高速匀浆机、氮吹仪等。

试剂：吡虫啉、多菌灵、啶虫脒、嘧霉胺和阿维菌素等农药标准品，浓度皆为1 000μg/mL；色谱纯CH3OH（德国默克公司）；18.2 MΩ.cm超纯水。

1.2 标准液配制

储备液：准确吸取吡虫啉、多菌灵、啶虫脒、嘧霉胺和阿维菌素标准品溶液各1 mL，均加甲醇稀释至10 mL，制备浓度中等的标准储备液，于-18 ℃条件下密封保存。

工作液：取适量储备液，用CH3OH/H2O（体积比为3∶2）作溶剂，分别制取3种不同浓度的标准工作液，经0.2 μm滤膜过滤后送入进样瓶，上机检测，做标准曲线，标准曲线法定量。

1.3 样品处理

提取：准确称量25.0 g已备好的样品，加入250 mL锥形瓶中，再加入50.0 mL CH3CN，高速匀浆处理2 min，经过滤后加入100 mL具塞量筒之中，量筒内已提前加入经灼烧处理的氯化钠4 g；用力震荡1 min，然后静置30 min，让乙腈与水彻底分离；于上层乙腈层吸取溶液10 mL，加入150 mL烧杯中，将烧杯放在80 ℃水浴锅上加热，杯内缓缓通过空气流，蒸发近干。加入2.0 mL CH2Cl2/CH3OH（体积比为99∶1），使烧杯瓶内残渣再次溶解。

净化：以4 mL CH2Cl2/CH3OH试剂对LC—NH2 SPE小柱进行预淋洗，将流出液用玻璃刻度试管收集起来，流速以2 mL/min为宜。以2 mL CH2Cl2/CH3OH试剂对烧杯进行洗涤，待SPE小柱中的液面上升至柱床表面后，向其中移入洗涤液，并重复一次；再将盛有淋洗液的刻度试管置于氮吹仪上，在水浴温度50 ℃的条件下，氮吹蒸发至近干，加入1.5 mL CH3OH，然后涡旋处理，加入1 mL水，再次涡旋处理，经0.2 μm滤膜过滤后送入进样瓶，留待上机检测。

1.4 色谱条件设定

以CH3OH/H2O为流动相，流速设为0.2 mL/min；采用Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱，规格为2.1 mm×50 mm，1.7 um i.d.；柱温设定25℃；二极管阵列检测器的检测波长设为255 nm；进样量5.0 μL。

1.5 线性关系及检出限

以CH3OH/H2O（体积比为3∶2）为溶剂制备标准溶液，浓度分别为0.05、0.10、0.25、0.50、1.00 μg/mL，上机检测，作浓度-峰面积标准曲线，得出校正曲线，然后按照信噪比S/N=3算出每种农药的检出限。

2 结果与分析

2.1 色谱条件的优化

以CH3OH/H2O为流动相实施梯度洗脱时，5种待测组分的分离效果明显，经多次试验，得出最佳洗脱梯度，见表1。经进一步分析比较，用50 nm及100 nm两种不同规格的色谱柱进行洗脱时，分离效果未出现明显差异，但100 nm色谱柱的耗时更长，且柱压接近50 nm色谱柱的2倍，从省时、系统安全等角度考虑，决定选用50 nm色谱柱。在上述优化的基础上，分别得到标准溶液色谱图以及豇豆、西红柿的加标色谱图。

在CH3OH/H2O流动相中，甲醇与水的比例随时间而变化。为消除进样时的溶剂效应影响，防止色谱峰发生漂移、变形等问题，必须确定甲醇与水的合理比例。经多次尝试，最终确定标准工作液中甲醇∶水的比例为3∶2时，待测组分的保留时间相对稳定，所得色谱峰的形状尖锐而对称；而采用纯甲醇或8∶2等比例时，出现保留时间漂移、谱带展宽等问题，其中采用纯甲醇时该问题尤其明显。

2.2 线性关系及检出限

相关性超過0.999，反映线性关系良好；检出范围为0.01～0.06 mg/kg。

根据国家有关规定，吡虫啉、多菌灵、啶虫脒、嘧霉胺和阿维菌素5种农药在豇豆、西红柿等蔬菜中的残留限量依次为，1、0.5、1、2、0.05 mg/kg，本试验方法能够满足上述几种农药的检测需求。

2.3 实际样品分析

抽样调取一批蔬菜样品，包括白菜、辣椒和菜花等，通过本方法予以检测，5种农药均有检出，说明此类农药在我国农业生产中的使用较为广泛。尽管检测结果并未超出国家规定的残留上限，但仍然要强化监管，避免因农药残留超标而引发食品安全事故[1]。

3 结论与讨论

根据5种农药的回收率、变异系数及检出限结果可知，该检测方法的准确度及精密度均比较高，且操作容易、检测迅速、易于推广，能够满足当前社会对蔬菜农药多残留的检测需求。

参考文献

[1]李彤.高效液相色谱和超高效液相色谱仪器的一些最新发展[J].色谱，2015（10）.

（责任编辑：刘昀）