台山地区珠蛋白生成障碍性贫血基因突变类型分析

陈　迪，吴　瑛

(台山市第二人民医院检验科，广东台山 529224)



·论著·

台山地区珠蛋白生成障碍性贫血基因突变类型分析

陈迪，吴瑛

(台山市第二人民医院检验科，广东台山 529224)

摘要:目的了解台山地区珠蛋白生成障碍性贫血(又称地中海贫血，地贫)患者基因突变类型及构成，为该地区地贫的防治提供依据。方法选取2014年1～12月来该院进行地贫基因检测的患者1 383例，采用PCR技术与膜杂交法检测α、β基因。结果1 383例研究对象有595例基因确诊为地贫，阳性率为43.02%。其中α地贫386例，占27.91%；β地贫183例，占13.23%；αβ复合型地贫26例，占1.88%。α地贫以--SEA/αα为主(64.25%)；β地贫以β41-42/β型为主(28.42%)；αβ复合型地贫基因以--SEA/αα与β41-42/β复合型最为常见(19.23%)。结论台山市地处地贫高发地区，对育龄人群进行地贫基因诊断对降低该地区地贫患儿的出生率具有重要意义。

关键词:珠蛋白生成障碍性贫血；基因突变；构成比

珠蛋白生成障碍性贫血又称为地中海贫血(以下简称地贫)是一种危害极大的常染色体隐性遗传的血红蛋白疾病。在我国，地贫多发生于长江以南地区，尤其是广东、广西、海南三地[1-2]，该病在广东已被列为重点防治疾病之一。广东省人群α及β地贫基因携带率高达11.07%，其中α地贫基因携带率为8.53%，β地贫基因携带率为2.54%。台山市位于珠三角地区腹地，针对本地区地贫基因携带研究一直处于空白地带。本研究对2014年1～12月的1 383例地贫基因检查结果进行了分析，旨在掌握本地区地贫基因携带特点，为本地区地贫的防范及治疗提供依据。

1资料与方法

1.1一般资料选取2014年1～12月来本院进行地贫基因检测的患者1 383例，其男500例、女883例，平均年龄为23岁。

1.2仪器与试剂检测仪器为ABI 7300型实时荧光定量PCR仪，α与β地贫基因检测试剂盒由潮州凯普生物化学有限公司提供。

1.3方法

1.3.1标本采集研究对象采用无菌抗凝管(EDTA抗凝剂)抽取静脉血2 mL，混匀。标本采集后立即送检，4 ℃保存不超过3 d，未及时检测的标本置-20 ℃保存待测。

1.3.2标本的检测采用PCR与膜杂交法检测中国人常见的3种缺失型α地贫(--SEA、-α3.7和-α4.2)，2种突变型α地贫(CS、QS)及11种突变型β地贫(CD41-42、CD43、IVSⅡ-654、CD17、CD14-15、-28、-29、CD71-72、βE、IVSⅠ-1、CD27-28)。

1.3.3操作步骤(1)DNA分离提取：取抗凝血200 μL，提取DNA浓度为20～40 ng/μL，A260/A280的值为1.5～2.5，吸取3～6 μL抽提好的DNA标本作为模板进行PCR扩增，α、β地贫试验各设置阴性对照。(2)PCR扩增：将配制好的扩增试剂充分混匀，8 000 r/min离心1 min，向设定的n个PCR反应管中分别加入配制好的扩增试剂(α地贫加入44 μL，β地贫加入47 μL)，转移到样品处理区；在对应的PCR反应管中分别加入处理好的样品DNA(20～40 ng/μL)。α地贫扩增试剂中每份样品加入6 ng DNA，阴性对照加入6 μL纯水。β地贫扩增试剂中每份样品加入样品DNA 3 μL，阴性对照加入3 μL纯水，盖紧管盖，8 000 r/min离心1 min。以ABI 7300型实时荧光定量PCR仪进行扩增。(3)PCR产物杂交的操作按试剂盒说明书进行。

1.3.4结果判断(1)阴性对照检测结果膜条无草蓝紫色斑点出现；(2)若在突变或缺失检测探针处出现显色强度与相应的正常对照探针相近的蓝紫色斑点，则该点为地贫突变或缺失的杂合子；(3)若在突变或缺失检测探针处出现蓝紫色斑点，而相应的正常对照探针处未出现蓝紫色斑点，则该位点为地贫突变或缺失的纯合子；(4)若仅正常对照探针处出现蓝紫色，则待检样品没有上述16种地贫突变或缺失。见图1(见《国际检验医学杂志》网站主页“论文附件”)。

2结果

2.1一般情况1 383例进行基因检测的患者中，595例为地贫，阳性率为43.02%。其中α地贫386例，占27.91%；β地贫183例，占13.23%；αβ地贫双重杂合子26例，占1.88%。

2.2α地贫基因突变类型及构成比386例α地贫中，大部分为--SEA/αα型，占64.25%；其次为-α3.7/αα，占18.13%。各基因类型及构成比见表1。

表1　　386例α地贫基因突变类型及构成比

2.3β地贫基因突变类型及构成比183例β地贫研究对象进行基因分型，大部分为β41-42/β型，占28.42%，其次为β654/β型，占28.42%。各基因类型及构成比见表2。

表2　　183例β地贫基因突变类型及构成比

2.4αβ复合型地贫基因突变类型及构成比26例αβ复合型地贫患者进行基因分型，--SEA/αα，β41-42/β复合型所占比例最高，占19.23%；其次为-α3.7/αα，β41-42/β和-α3.7/αα，β654/β复合型，各占15.38%。各基因类型及构成比见表3。

表3　　αβ复合型地贫基因突变类型及构成比

3讨论

地贫分为α型、β型、δβ型和δ型4种，其中以β和α地中海贫血较为常见。现阶段对于地贫尚无理想治疗方法，重在预防，产前地贫基因检测是降低地贫婴儿出生的重要手段。珠海市开展的大规模人群地贫预防控制计划，使α地贫患儿出生率年均下降达30%[3]，现广东省已将地贫筛查列入婚前常规检查项目。

α地贫主要由发生于16号染色体短臂末端α-珠蛋白基因簇内α基因的缺失引起，少数由点突变引起。中国人群中α地贫主要以缺失型为主，常见类型有东南亚缺失型(--SEA)，右侧缺失型(-α3.7)和左侧缺失型(-α4.2)。本研究在1 383例人群中共检出386例α地贫患者。大部分α地贫为--SEA/αα型，占64.25%，其次为-α3.7/αα，占18.13%。说明本地区α地贫以--SEA/αα型为主，与国内同类研究结果相一致[4-5]。如东南亚缺失型患者应对配偶也进行地贫筛查，避免因配偶为东南亚缺失型而有可能造成子代出现血红蛋白H病或Bart′s水肿胎。

β地贫主要发生在位于11号染色体短臂的β基因内的点突变引起，在我国β地贫基因突变类型有34种，本次研究检出的183例β地贫患者中大部分为β41-42/β型，占28.42%，其次为β654/β型，占28.42%，这与广东已有的报道一致[6-7]，可能与同一省基因分布变化不大有关系。

健康人的血红蛋白四聚体由α链和非α链合成平衡，维持红细胞正常功能与形态，地贫患者由于打破此平衡而引起贫血，αβ复合型地贫由于减轻了α和β珠蛋白链间的不平衡状态，因此其临床症状可不明显，但其携带致病基因如果传递给后代可造成重症患儿的出现。本次研究检出的26例αβ复合型地贫基因患者中大部分为--SEA/αα，β41-42/β复合型，占19.23%；其次为-α3.7/αα、β41-42/β、-α3.7/αα和β654/β复合型，分别占15.38%。由于地贫临床主要表现为慢性溶血性贫血，目前尚无有效的治疗方法[8]。因此，通过婚前检查或产前诊断减少重型地贫患儿的出生是目前最为有效的预防措施。

近年来，胚胎植入前遗传学诊断(PGD)作为产前诊断的更早期方式，为高危地贫夫妇终止妊娠提供了更多的选择手段[9]。PCR技术是临床用于检测地贫的主要方法[10]，通过研究发现--SEA/αα、β41-42/β、--SEA/αα与β41-42/β是台山地区最常见的α和β地贫基因型，应作为重点监控对象，采取科学有效的预防措施，尽量减少地贫基因携带患儿或重型地贫儿的出生。

参考文献

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Gene mutation type analysis of thalassemia in Taishan area

CheDi，WuYing

(DepartmentofClinicalLaboratory,the2ndPeople′sHospitalofTaishan,Taishan,Guangdong529224,China)

Abstract:ObjectiveTo learn the gene mutation type and prevalence of thalassemia in the Taishan area and to provide basis for the prevention and treatment of local thalassemia.Methods1 383 patients who visited the hospital for thalassemia genetic test from January to December 2014 were enrolled for this study.α- and β- genes were determined by using PCR and membrane hybridization methods.ResultsOf the 1 383 patients,595 were diagnosed with thalassemia (positive rate was 43.02%),including 386 cases(27.91%) of α-thalassemia,183 cases(13.23%) of β-thalassemia and 26 cases(1.88%) of αβ-thalassemia.--SEA/αα(accounted for 64.25%) was the major genotype of α-thalassemia,the major genotype of β-thalassemia was β41-42/β(accounted for 28.42%),and --SEA/αα,β41-42/β was the major genotype of αβ-thalassemia (accounted for 19.23%).ConclusionTaishan is located in a high risk area of thalassemia,it is of great significance to perform genetic diagnosis of thalassemia among reproductive population so as to reduce the birth rate of children with thalassemia in the area.

Key words:thalassemia；gene mutation；constituent ratio

(收稿日期：2015-12-10)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.08.021

文献标识码：A

文章编号：1673-4130(2016)08-1067-03

作者简介：陈迪，主管技师，主要从事临床血液学的研究。