4种中药对广泛耐药鲍曼不动杆菌的抑菌作用*

吴贤丽，庞载元，敖茂程，华　毅

(攀枝花市中心医院检验科，四川攀枝花 617067)



·论著·

4种中药对广泛耐药鲍曼不动杆菌的抑菌作用*

吴贤丽，庞载元△，敖茂程，华毅

(攀枝花市中心医院检验科，四川攀枝花 617067)

摘要:目的研究黄芩等4种中药对广泛耐药鲍曼不动杆菌(XDRAB)的抑菌作用，为临床治疗XDRAB感染寻找新的途径。方法采用试管倍比稀释法测定黄芩、连翘、黄连、金银花4种药物的最低抑菌浓度(MIC)。结果黄芩、连翘、黄连、金银花对XDRAB的MIC平均值分别为30.99、187.50、27.61、75.00 mg/mL，其中黄连的抑菌作用最强。攀枝花市与外地收集的菌株抑菌作用比较，差异无统计学意义(P>0.05)。结论4种中药对XDRAB均有不同程度的抑菌作用。

关键词:中药；广泛耐药鲍曼不动杆菌；体外抑菌试验

鲍曼不动杆菌是一种获得耐药性和克隆传播能力都非常强大的细菌，广泛耐药、多重耐药、全耐药鲍曼不动杆菌在全世界范围内都呈流行趋势，目前已经成为我国院内感染最重要的病原菌之一[1]。广泛耐药的鲍曼不动杆菌(XDRAB)是指对临床常用的5类抗菌药物都耐药，而仅对1至2种抗菌药物，主要是替加环素和(或)多黏菌素敏感的菌株[2-3]。多黏菌素类药物的神经系统不良反应发生率高且具有肾毒性。由于多黏菌素E异质性耐药的存在，在临床中常需要联合其他抗菌药物一起使用[4-6]。耐亚胺培南鲍曼不动杆菌对替加环素有较好的敏感性[7-9]，但替加环素血药浓度、脑脊液浓度低，而且常需与其他抗菌药物联合应用，价格过于昂贵[10]。虽然解决该菌耐药性问题的途径还有开发新的抗菌药物，但投资大、周期长是新药开发会遇到的难题。常用的抗菌中草药有近百种，而且中药治疗感染性疾病有悠久的历史[11]。本研究采用试管倍比稀释法对4种中药配方颗粒的体外抗XDRAB活性进行了检测，参考了文献[12]的相关方法并做了相应的改进，现报道如下。

1材料与方法

1.1菌株的选取收集2010年4月至2011年4月分离自本院和浙江大学医学院附属第一医院(外院)临床标本的XDRAB 30株，选择标准菌株ATCC27853、ATCC25922、ATCC25923用于对比分析。

1.2仪器与耗材包括孵箱、1 000 μL无菌吸头、1 000 μL加样枪、带帽无菌试管、试管架、比浊仪、API 0.85% 3 mL无菌盐水管、梅里埃公司生产的非苛养革兰阴性杆菌药敏试验专用肉汤。

1.3方法

1.3.1中药的选取与制备通过查阅文献，选择有抗菌活性的4种中药配方颗粒。这4种中药配方颗粒包括黄连、金银花、黄芩、连翘，均由四川新绿色药业科技发展股份有限公司生产。将中药配方颗粒溶解于无菌蒸馏水中，使其生药的质量浓度为1 000 mg/mL。

1.3.2细菌的培养与稀释将选定的实验菌株接种于血平板培养基，于37 ℃孵箱中孵育24 h后挑取菌落于API 3 mL 0.85%无菌盐水管中并配制成0.5麦氏比浊单位的细菌,使其细菌密度为1.5×108CFU/L。

1.3.3最低抑菌浓度(MIC)的测定按临床标准化协会(CLSI)推荐的液体稀释法测定实验菌株的MIC值，稀释液为梅里埃的非苛养革兰阴性杆菌药敏试验用肉汤。

1.3.4操作步骤10支无菌试管中各加入1 mL肉汤，于第1管加入1 mL中药药液(生药浓度为1 000 mg/mL)，充分混匀后取出1 mL加入第2管，混匀后再取出1 mL加入第3管，反复操作至第9管。混匀后，从第9管取出1 mL液体丢弃，第10管不加入药液，作为MIC测定的阳性对照。除第9管外在每个试管中加入0.5麦氏单位的菌液20 μL,第9管作为MIC测定的阴性对照。从第1管至第8管的生药浓度依次为500.00、250.00、125.00、62.50、31.25、15.63、7.81、3.91 mg/mL，将各管充分混匀后放置于37 ℃孵箱中培养，24 h后观察细菌生长情况。在阴性对照管无细菌生长，阳性对照管中的细菌生长正常的条件下,出现无浑浊试管的最小浓度即为MIC。以上的所有无菌操作均需在生物安全柜中进行。

1.4统计学处理统计软件为SPSS17.0，4种中药对菌株的MIC的比较采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

黄芩、连翘、黄连、金银花对30株XDRAB有不同程度的体外抑菌作用，MIC均值分别为30.99、187.50、27.61、75.00 mg/mL，其中黄连的抑菌作用最强。两个医院的MIC相比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1　　　4种中药对两个医院分离的XDRAB的

3讨论

抗菌药物的广泛和不合理应用，使细菌的耐药性日趋严重，医院由XDRAB引起的感染呈逐年升高的趋势，特别是重症监护室(ICU)尤为严重。抗菌药物中可供选择的药物很少，而且疗效差、不良反应大，给临床治疗带来了困难，而中药对XDRAB有一定的体外抑菌作用。

黄芩、连翘、黄连、金银花对30株XDRAB有不同程度的体外抑菌作用，MIC均值分别为30.99、187.50、27.61、75.00 mg/mL，其中黄连的抑菌作用最强。黄连、金银花和连翘的抑菌浓度比冷会勇等[13]报道的对XDRAB的抑菌浓度低，而黄芩抑菌浓度与之接近。4种中药对XDRAB的抑菌浓度比庞载元等[14]报道的对广泛耐药铜绿假单胞菌的抑菌浓度低，4种中药对本地与外地收集的菌株抑菌作用无明显差异。

中药中有抗菌作用的有近百种，但是这些中药的最小抑菌浓度远远高于按常规剂量口服所得的血药浓度[15]。本研究中，黄连的MIC平均为27.61 mg/mL，若按5 000 mL的成年人体液量计算，需要一次性地口服多达138 g的生药才可能在体内达到所需要的抑菌浓度，而2～10 g是黄连的常规剂量[16]。因此口服黄连药液远远达不到治疗所需的血药浓度。本研究中，黄芩的平均MIC为30.99 mg/mL，若按成年人的体液量为5 000 mL计算，一次性地口服155 g生药才可能在体内达到抑菌浓度，而5～15 g为黄芩的常规剂量[16]，也不可能达到治疗所需的血药浓度。彭乙华等[17]报道，中药单体注射制剂棓丙酯对XDRAB的体外MIC为64～128 μg/mL，有较高的抑菌活性。但按成年人5 000 mL的体液量计算，仍需要药物320～640 mg，而棓丙酯静脉滴注一次的允许用量不超过180 mg。所以其采用静脉滴注在人体内也不可能达到有效抑菌浓度。从上述中药的抑菌试验可以看出，传统给药模式难以发挥中药的抗菌作用。

呼吸道毛细血管致密、丰富，吸收面积大，药物吸收快，速率仅次于静脉给药[16]。通过雾化吸入，药物可直达病灶，因此这种途径给药的药物用量少，可以避免口服给药中血药浓度过低的瓶颈，吸入给药是中药治疗呼吸道感染不错的选择。肺炎[18-20]和上呼吸道感染[21-23]采用中药雾化吸入治疗的报道较多，疗效受到肯定。本研究显示，虽然4种中药对XDRAB有不同程度的体外抗菌活性，但按常规剂量口服在体内均不能达到应有的抑菌浓度。中药雾化吸入治疗XDRAB引起的肺炎是值得进一步研究的方法。

在中药抗菌治疗的研究中，已经有很多证据表明中药在抗菌治疗方面蕴藏着巨大潜力。在临床应用中，还需要对其给药途径进行进一步的研究，不断创新与开拓，才能使其更好地发挥作用。

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The bacteriostatic effect of four kinds of traditional Chinese herbal medicines on strains of extensively drug-resistant Acinetobacter baumannii*

WuXianli,PangZaiyuan△，AoMaocheng，HuaYi

(DepartmentofLaboratory,PanzhihuaCentralHospital,Panzhihua，Sichuan617067，China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the bacteriostatic effect of 4 kinds of traditional Chinese herbal medicine on extensively drug-resistant A.baumannii(XDRAB) bacteriostatic effect,find a new way for the clinical treatment of the XDRAB infection.MethodsThe minimal inhibitory concentrations(MICs) of scutellaria,forsythia,rhizoma coptidis,honeysuckle were determined by using broth two-fold dilution method.ResultsThe mean values of MICs of scutellaria,forsythia,rhizoma coptidis,honeysuckle were 30.99,187.50,27.61 and 75.00 mg/mL,respectively.Among the 4 kinds of traditional Chinese herbal medicines,rhizoma coptidis got the strongest antimicrobial effect strongest inhibitory effect.There was no significant difference in the inhibitory effect of the strains collected from local or nonlocal(P>0.05).ConclusionThe 4 kinds of Chinese herbal medicine had in vitro antibacterial activity to XDRAB in different degree

Key words:traditional Chinese medicine；extensively drug resistant Acinetobacter baumannii；in vitro antibacterial test

(收稿日期：2015-12-19)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.08.006

文献标识码：A

文章编号：1673-4130(2016)08-1030-03

基金项目：四川省攀枝花市2015年度市级财政科技专项资金项目(2015cy-s-25)。

作者简介：吴贤丽，女，检验技师，主要从事临床微生物检验的相关研究。△通讯作者，E-mail：yangfan621225@qq.com。