沙利度胺对溃疡性结肠炎疗效的实验研究

夏婷婷+徐洪雨

【摘要】 目的 通过检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的浓度， 观察沙利度胺治疗由2， 4， 6-三硝基苯磺酸（TNBS）诱导的溃疡性结肠炎（UC）的疗效。方法 21只TNBS结肠炎动物模型， 随机分为模型组、柳氮磺吡啶组及沙利度胺组， 每组7只。模型组不给予干预、沙利度胺组给予沙利度胺200 mg/（kg·d）、柳氮磺吡啶组给予柳氮磺吡啶100 mg/（kg·d）， 测定大鼠血清中TNF-a的浓度， 探讨沙利度胺对UC的疗效。结果 沙利度胺组大鼠腹泻次数减少， 部分有隐血阳性， 一直未出现肉眼血便。沙利度胺组、柳氮磺吡啶组、模型组大鼠TNF-a的浓度分别为（19.51±8.06）、（40.88±14.24）、（115.32±9.60）pg/ml， 沙利度胺组降低血清TNF-α浓度的幅度高于柳氮磺吡啶组， 差异有统计学意义（P<0.01）。结论 沙利度胺治疗UC有效， 能显著减轻结肠炎症， 降低TNF-α浓度强于柳氮磺吡啶。

【关键词】 沙利度胺；柳氮磺吡啶；2， 4， 6-三硝基苯磺酸；溃疡性结肠炎

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.14.211

Experimental research of curative effect by thalidomide for ulcerative colitis XIA Ting-ting， XU Hong-yu. Department of Gastroenterology， Hulun Buir City Peoples Hospital， Hulun Buir 021000， China

【Abstract】 Objective To observe curative effect by thalidomide for 2，4，6-trinitro-benzene-sulfonic acid （TNBS）-induced ulcerative colitis （UC） by detecting serum tumor necrosis factor-α （TNF-α） concentration in rats. Methods TNBS colitis animal model was made， and 21 rats were randomly divided into model group， sulfasalazine group and thalidomide group， with 7 rats in each group. No intervention was taken in model group. Thalidomide group received thalidomide by 200 mg/（kg·d）， and sulfasalazine group received sulfasalazine by 100 mg/（kg·d）. Detection was made on serum TNF-α concentration to investigate curative effect by thalidomide for UC. Results Thalidomide group had reduced diarrhea times， and some rats had positive occult blood， without any visible bloody stools. TNF-α concentrations in thalidomide group， sulfasalazine group and model group were respectively （19.51±8.06）， （40.88±14.24）， （115.32±9.60） pg/ml. Thalidomide group had higher reducing degree of serum TNF-α concentration than sulfasalazine group， and the difference had statistical significance （P<0.01）. Conclusion Thalidomide is effective in treating UC， and it can remarkably relieve colitis. It shows better effect in reducing TNF-α concentration than sulfasalazine.

【Key words】 Thalidomide； Sulfasalazine； 2，4，6-trinitro-benzene-sulfonic acid； Ulcerative colitis

UC是一种病因不明的直肠和结肠慢性非特异性炎症性疾病。其病因和发病机制尚不清楚， 目前大多学者认为免疫异常是其发病的主要原因， 受到国内外学者们的重视， 已经成为临床研究的重点之一， 随着对细胞因子研究的进展， 人们发现细胞因子TNF-α与UC的发病密切相关。沙利度胺作为一种免疫调节剂， 目前认为是肿瘤坏死因子TNF-α的特异性调节药物， 所以沙利度胺可通过抑制这种因子的作用而治疗UC。本研究通过研究治疗前后UC大鼠的血清中TNF-α的表达情况， 进而探讨沙利度胺治疗UC的疗效， 及肿瘤坏死因子在发病机制中的作用及临床意义， 现报告如下。

1 材料与方法

1. 1 材料

1. 1. 1 实验动物清洁及健康成年雄Wistar大鼠， 平均体质量（250±20）g， 由哈尔滨医科大学动物实验中心提供及饲养。

1. 1. 2 实验试剂TNBS购自美国Sigma 公司；沙利度胺购自常州制药厂有限公司；柳氮磺吡啶购自上海信谊嘉华药业有限公司；大鼠TNF-αELISA 试剂盒购自欣博盛生物科技有限公司。

1. 1. 3 实验仪器保温箱（上海仪器总厂）；湿盒及通风柜， 光学显微镜， 低温冰箱：台式离心机， 450-酶标仪。

1. 2 实验方法

1. 2. 1 造模及分组 清洁及健康成年雄性Wistar大鼠21只， 随机分为模型组、柳氮磺吡啶组及沙利度胺组， 每组7只。模型组不给予干预、沙利度胺组给予沙利度胺200 mg/（kg·d）、柳氮磺吡啶组给予柳氮磺吡啶100 mg/（kg·d）。建立TNBS结肠炎动物模型[1]：三组大鼠实验前禁食（不禁水） 24 h， 实验时腹腔注射10%的水合氯醛（0.3 ml/100 g体质量） 使大鼠麻醉， 而后将一直径2.0 mm、长约12 cm 的硅胶管用石蜡油润滑， 由肛门插入大鼠体内约8 cm， 缓慢注入含100 mg/kg TNBS 的0.25 ml无水乙醇溶液， 提起大鼠尾部， 倒置10 min， 使造模剂充分渗入大鼠肠腔内。造模后使动物保持平躺， 自然清醒， 自由饮食。

1. 2. 2 检测方法 用ELISA法记录三组大鼠血清中TNF-α含量进行比较。

1. 3 统计学方法 采用SPSS18.0统计学软件对数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2. 1 大鼠一般状况 造模后第1天即出现肉眼血便， 模型组一直有血便及腹泻， 食欲不振、 毛色粗糙、 体质量开始下降。沙利度胺组大鼠腹泻次数减少， 部分有隐血阳性， 一直未出现肉眼血便， 食欲恢复、 毛色光滑、 体质量逐渐增加。实验后， 沙利度胺组与柳氮磺吡啶组大鼠体质量优于实验前（P<0.01）；柳氮磺吡啶组与沙利度胺组大鼠体质量比较， 差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。

表1 三组大鼠实验前后体质量比较（ x-±s， g）

组别 例数 实验前 实验后

模型组 7 249.8±0.5 232.8±0.4

沙利度胺组 7 222.9±0.3 253.7±0.6a

柳氮磺吡啶组 7 229.7±0.4 249.9±0.4ab

注：与实验前比较， aP<0.01；与沙利度胺组比较， bP>0.05

2. 2 组织病理改变 模型组镜下可见腺管排列紊乱或消失， 黏膜及黏膜下层血管高度扩张充血， 大量炎细胞浸润， 浸润黏膜下或固有层， 部分浸润全层， 以中性粒细胞、淋巴细胞为主。沙利度胺组镜下黏膜及黏膜浅层仅有少量中性粒细胞、淋巴细胞浸润， 组织损伤较轻， 炎症程度较模型组明显减轻。柳氮磺吡啶组可见黏膜消失或部分消失， 腺体排列紊乱， 炎性细胞浸润， 但较模型组有所减轻。

2. 3 血清TNF-α在各组表达 沙利度胺组、柳氮磺吡啶组、模型组TNF-a的浓度分别为（19.51±8.06）、（40.88±14.24）、（115.32±9.60）pg/ml， 沙利度胺组降低血清TNF-α浓度的幅度高于柳氮磺吡啶组， 差异有统计学意义（P<0.01）。见表2。

表2 血清中TNF-α在各组的表达比较（ x-±s， pg/ml）

组别 例数 TNF-α

模型组 7 115.32±9.60

沙利度胺组 7 19.51±8.06a

柳氮磺吡啶组 7 40.88±14.24ab

注：与模型组比较， aP<0.01；与沙利度胺组比较， bP<0.01

3 讨论

沙利度胺最初作为一种镇静剂和止吐剂用于临床， 后来因发现其有较强的致胎儿海豹样畸形作用而被禁止使用， 直至1997 年Wettstein 等[2]报道了1例皮质类固醇治疗无效的克罗恩病患者经沙利度胺治疗获得改善后受到重视， 随后出现沙利度胺治疗UC的个案报导及更多的实验研究。

有相关学者[3]通过对内镜下活动期UC患者的肠黏膜TNF-α的分泌量研究发现， 活动期UC患者肠黏膜TNF-α数量显著高于非活动期， TNF-α与炎症程度密切相关。邹莉波等[4]检测TNBS结肠炎模型大鼠血清TNF-α含量时， 发现均显著高于正常对照组， 且与疾病严重程度成正相关。近年来已有研究用ELISA法检测UC患者的结肠TNF-α的释放程度， 发现活动期UC患者平均TNF-α明显高于对照组（非活动期患者）。其中应用5-氨基水杨酸（5-ASA）治疗症状缓解者的TNF-α显著下降， 治疗无效者TNF-α浓度仍高， 提示肠腔内TNF-α数量可以作为UC患者的炎症活动性指标[5]。本实验说明柳氮磺吡啶为治疗UC的有效药物。而目前虽然已有沙利度胺用于IBD 患者及动物模型的报道， 但其确切的机制和疗效目前仍未有定论， 有待于进一步研究。

目前一些针对细胞因子失衡的免疫调节药物的治疗已经在动物模型上取得了较好的效果。UC发病机制尚不明确， 一般认为是多环节、多因素相互作用的结果。促炎细胞因子及抑炎细胞因子失衡机制的研究无疑为研究UC的发生、发展提供了理论依据， 且有利于研制新药及开发更有效的临床治疗手段。

本研究证实大鼠应用沙利度胺治疗后， 显著改善UC的症状， TNF-α的浓度明显低于模型组和柳氮磺吡啶组（P<0.01）， 表明沙利度胺具有减轻肠黏膜水肿， 对抗炎性细胞浸润， 发挥抗炎的作用。实验显示沙利度胺与柳氮磺吡啶在减轻结肠炎症、降低TNF-α活性及减少TNF-α的合成等方面有显著差异， 但在升高大鼠体质量方面无显著差异性， 因为柳氮磺吡啶主要通过抑制TNF-α及其他因子的表达而发挥作用。依据UC大鼠血清TNF-α浓度治疗前后的变化， 可推断沙利度胺对UC的治疗， 可通过抑制TNF-a的表达而发挥作用。这种因子的浓度可能作为诊断UC病情活动的生物学指标， 为临床上UC的诊断提供一定的理论依据。

肠道组织大体观察亦可发现沙利度胺治疗组黏膜损伤较轻， 说明沙利度胺可作为一种新药治疗UC。沙利度胺对UC治疗有效， 沙利度胺是通过降低TNF-α活性及减少TNF-α的合成而发挥作用的， 其他的作用方式可能是次要的， 这为其临床应用价值提供了一定的理论依据。沙利度胺虽为免疫调节剂， 但是其不抑制正常免疫， 副作用可通过减量或停药或服用相关药物减轻， 病情复发后再次用药依然见效。药物的有效性需大量临床实验进一步研究证实， 常规药物治疗无效的患者， 试用沙利度胺会得到意外的效果。希望大家继续努力研制新药， 减少不良反应。

综上所述， 沙利度胺治疗UC有效， 能显著减轻结肠炎症， 降低TNF-a浓度强于柳氮磺吡啶。

参考文献

[1]Togawa J， Nagase H， Tanaka K， et al. Lactoferrin reduces colitis in rats via modulation of the immune system and correction of cytokine imbalance. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol， 2002， 283 （1）：187-195.

[2]Wettstein AR， Meagher AP. Thalidomide in Crohns disease. Lancet， 1997， 350（9089）：1445.

[3]Dong ZZ， Yao DF， Wu W， et al. Delayed hepatocarcinogenesis through antiangiogenic intervention in the nuclear factor-kappa B activation pathway in rats. Hepatobiliary Pancreat Dis Int， 2010， 9（2）：169-74.

[4]邹莉波， 刘艳， 先宇飞， 等 .复方青黛颗粒治疗UC的机制.沈阳医科大学学报， 2006， 23（2）：119-122.

[5]Desreumaux P， Uhosh S. Review article： mode of action and delivery of 5-aminosalicylic acid-new evidence. Aliment Pharmacol Ther， 2006， 24（Suppl 1）：2-9.

[收稿日期：2016-01-28]