不同种类鱼中snrpc的组织表达特征研究

王红莹+方瑞

摘 要：为了深入研究鱼类RNA剪接相关基因snrpc的作用机制，实验应用RT-PCR研究了斑马鱼成鱼组织中snrpc mRNA的表达模式，并比较分析了鲫鱼中snrpc的表达。结果显示，斑马鱼snrpc在垂体和卵巢中有表达，而鲫鱼中在肾脏、垂体和卵巢中有表达，表明snrpc在不同鱼类中具有组织表达的差异性。

关键词：斑马鱼；snrpc；组织表达分析

中图分类号 S965.299 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2016）08-21-02

Abstract：In order to further study the mechanism of fish's snrpc relevant to RNA splicing，we researched the expression of mRNA in zebrafish's and crucian carp's tissues by RT-PCR. Zebrafish's snrpc expression in the pituitary and oocyte，while the crucian carp's expression in kidney pituitary and oocyte. Preliminary results show that zebrafish's snrpc has specific expression in different tissue.

Key words：Zebrafish；Snrpc；Tissue distribution

在负责RNA剪切的因子中，snRNP蛋白是最关键的一类。SNRPC是snRNP蛋白中的一种，但至今研究仍较少。在鱼类早期发育过程中，细胞的快速分裂需要RNA的正确剪切，推测SNRPC在此过程中发挥着重要的功能。本研究中应用RT-PCR研究斑马鱼以及经济鱼类鲫鱼成鱼组织中snrpc mRNA的表达模式，以期进一步揭示SNRPC的作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验材料 （1）实验品种：斑马鱼、鲫鱼。（2）主要仪器及设备：Sequi-Gen电泳仪系统，Bio-RabGONGSI；定量移液器，Gilson；凝胶成像系统，Bio-RabGONGSI；PCR仪，Bio-RabGONGSI；恒温摇床、隔水式恒温培养箱、低温水浴锅、高速冷冻离心机、超净工作台、恒温水浴锅，上海精宏。（3）主要试剂：PCR taq酶，TaKaRa；限制性内切酶，NEB；质粒提取试剂盒、PCR纯化试剂盒、酶切胶回收试剂盒，上海生工；Trizol、逆转录试剂盒，TOYOBO。

1.2 实验方法

1.2.1 snrpc基因引物的设计 根据NCBI上预测的snrpc的全长序列，利用primer 5.0设计引物。

1.2.2 mRNA及蛋白表达水平的检测

1.2.2.1 斑马鱼及鲫鱼中各组织总RNA的提取及cDNA合成 斑马鱼和鲫鱼各10条，分别取心脏、肝脏、肾脏、脾脏、脂肪、肌肉、垂体、下丘脑、端脑、小脑、延髓、精巢、卵巢50～100mg，各加600μL TRIZOL；研磨并静置3min，加氯仿抽提，离心后将上清液转到新Rnase-free EP管中，在管中加入等体积的异丙醇沉淀；用75%乙醇洗涤，最后溶于Rnase free的ddH2O中。提取的RNA加入oligo dT引物，70℃孵育后加入RNA酶抑制剂1μL，dNTP 5μL，逆转录酶1μL，42℃逆转录，得到各组织cDNA。

1.2.2.2 RT-PCR检测mRNA水平 RT-PCR中使用到的引物如下：

PCR扩增后用琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。

2 结果与分析

2.1 snrpc在斑马鱼成鱼各组织中mRNA的表达 通过提取各组织的总RNA，逆转录合成cDNA，再以α-tubulin作为内参，进行PCR反应，确保逆转录效率一致，再利用snrpc引物进行PCR扩增，通过电泳鉴定斑马鱼成鱼各组织中mRNA水平，结果见图1。由图1可知，琼（下转130页）（上接21页）脂糖凝胶电泳检测的结果，斑马鱼snrpc在垂体和卵巢中均有表达，且条带大小正确清晰，表达量相当。

2.2 snrpc在鲫鱼成鱼各组织中mRNA的表达 由于斑马鱼各组织的特异性，笔者设计出一组对照实验，即在鲫鱼成鱼各组织中检测snrpc mRNA的表达，其结果见图2。从图2可以看出，鲫鱼中snrpc mRNA在肾脏、垂体和卵巢中有表达。此结果与斑马鱼中不同。不同鱼的snrpc在不同组织中表达，具有不同的生物学功能。

3 结论与讨论

根据琼脂糖凝胶电泳的检测结果，斑马鱼中在P（垂体）和T（精巢）中有明显的条带，且条带大小正确清晰，说明斑马鱼snrpc mRNA在垂体和精巢中具有组织特异性。而在鲫鱼中，在K（肾脏）和P（垂体）、T（即精巢）中有明显的条带，说明鲫鱼snrpc mRNA在肾脏、脑和精巢中具有组织特异性。鱼类snrpc基因属于差异表达基因，不同物种中具有不同的表达模式。据研究，snrpc基因在不同组织中表达的差异性与其RNA剪接活性有一定关系。此外，一些因子也和SNRPC共同作用并且参与了RNA的剪切。比如，转录因子EWS和其他转录因子结合后，再和SNRPC作用来进行RNA剪切的调节。TIA-1因子和U1 C蛋白共同作用后，可促进snRNP的剪接效率。SNRPC的N末端可以和谷氨酸富含区域的C末端产生互作。当然，要想了解snrpc基因在体内的功能还需通过基因敲除等技术，进一步研究其蛋白质的生物学功能，以揭示其在机体内的作用。

参考文献

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（责编：张宏民）